陶長城等

摘要：對一例豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬偽狂犬病毒（PRV）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）混合感染病例的病理變化和病原檢測情況進(jìn)行了介紹，并提出了相關(guān)防控措施。

關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉病毒（PEDV）；豬偽狂犬病毒（PRV）；豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）；混合感染

中圖分類號：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1007-273X（2015）05-0015-02

2014年6月份，河南省信陽市某200頭母豬規(guī)模場的1～3日齡新生仔豬發(fā)生以嘔吐、腹瀉為主要癥狀的疫病，發(fā)病率90%，死亡率85%。經(jīng)過臨床診斷、病理剖檢及實(shí)驗(yàn)室診斷確診為豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬偽狂犬病毒（PRV）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）混合感染，采取針對措施后，獲得較好防治效果，現(xiàn)將其報(bào)道如下。

1 發(fā)病情況

2014年6月中旬，河南省信陽市某存欄200頭母豬規(guī)模豬場里，出生幾個小時至3 d的仔豬突然嘔吐，緊接著水樣腹瀉，脫水衰竭死亡，個別仔豬出現(xiàn)劃水、角弓反張等神經(jīng)癥狀。對病仔豬使用止瀉藥、慶大霉素、喹諾酮類等藥物但治療無效。懷疑為傳染性胃腸炎和流行性腹瀉感染，給母豬進(jìn)行疫苗緊急預(yù)防注射未能控制新生仔豬發(fā)病。發(fā)病率90%，死亡率85%。選取2頭癥狀典型病仔豬送至信陽市動物疫病檢測實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行診斷。

2 病理變化

解剖發(fā)病仔豬可見其肺局部水腫；肝、脾有散在灰白色壞死點(diǎn)、黃染；胃黏膜充血；腸壁變薄呈半透明狀，腸系膜充血；淋巴結(jié)腫脹、出血、壞死；腎散在針尖大小出血點(diǎn)；腦脊液增多似膠凍樣。其他器官未發(fā)現(xiàn)明顯病變。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 主要病原體PCR檢測

仔豬剖檢后，收集其脾臟、腦、淋巴結(jié)和肺臟，經(jīng)組織研磨器研磨后，離心取上清液，利用PCR方法檢測豬瘟病毒（CSFV）、PRV、PCV-2、TGEV和PEDV，相關(guān)檢測引物序列見表1，由上海生工生物工程有限公司合成。

3.1.1 CSFV、PEDV和TGEV的檢測 RNA的提取按照RNA提取試劑盒（購自上海捷瑞生物工程有限公司）操作說明進(jìn)行，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（由Thermo公司生產(chǎn)）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系為：RNA模板4 μL、5×buffer 4 μL、dNTP 2 μL、下游引物（CSFV-A，10 μmol/L）1 μL、反轉(zhuǎn)錄酶 1 μL、RNA酶抑制劑1 μL，DEPC水7 μL。反應(yīng)條件：42 ℃ 45 min，70 ℃ 5 min，4 ℃冷卻。PCR反應(yīng)體系：PCR反應(yīng)液12.5 μL，模板3 μL，上下游引物各0.75 μL，加水至25 μL。PCR反應(yīng)程序：95 ℃ 5 min，95 ℃30 s、55 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s、共35個循環(huán)，72 ℃ 7 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后，紫外燈下觀察結(jié)果。

3.1.2 PRV和PCV-2的檢測 DNA的提取按照DNA提取試劑盒（購自上海捷瑞生物工程有限公司）說明書進(jìn)行操作，PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序均同3.1.1。

3.2 檢測結(jié)果

PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后，具體結(jié)果見圖1。由圖1可見，檢測樣品泳道1、2和5分別檢測有PRV（279 bp）、PCV-2（189 bp）和PEDV（457 bp）的DNA存在；TGEV和CSFV檢測未見有目的片段DNA出現(xiàn)，結(jié)果為陰性。

3.3 細(xì)菌性病原檢測

選取解剖仔豬的小腸內(nèi)容物接種伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，選擇肺臟和淋巴結(jié)組織接種普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h。結(jié)果均未見有細(xì)菌生長。

綜合以上實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，確定該養(yǎng)殖場為PEDV、PRV和PCV-2混合感染引起的仔豬腹瀉。

4 防控措施

4.1 母豬群

全群采用豬偽狂犬弱毒疫苗連續(xù)免疫2次，間隔2～3周，選取典型未用藥治療的仔豬，采集腸道、肺臟和脾臟等組織制作組織滅活疫苗，所有母豬普免2次，間隔2～3周，產(chǎn)前45 d和20 d各進(jìn)行1次免疫。

4.2 育肥豬

仔豬出生后立即使用豬偽狂犬弱毒疫苗噴鼻免疫，每個鼻孔0.5頭份。

4.3 消毒和滅鼠

利用聚維酮碘消毒液進(jìn)行全場消毒，間隔3 d后重復(fù)消毒1次。產(chǎn)床在使用前進(jìn)行火焰消毒。

4.4 調(diào)整免疫程序

母豬和公豬按照4次/年進(jìn)行普免。商品豬，出生1 d，噴鼻；35～42日齡，肌肉注射1頭份/頭。

該豬場采取以上綜合防控措施，迅速有效地控制了本次疫情，目前豬場新生仔豬生長良好，生產(chǎn)恢復(fù)正常。

5 小結(jié)

該豬場經(jīng)組織滅活疫苗和新生仔豬偽狂犬疫苗超免及待產(chǎn)母豬轉(zhuǎn)入徹底消毒的產(chǎn)房等措施實(shí)施，明顯有效地控制了初生仔豬腹瀉疫情。歸結(jié)起來主要啟示如下。

（1）放松了育肥豬的免疫工作，以及豬群之前做過針對仔豬腹瀉的母豬返飼措施，存在加大野毒在豬群里循環(huán)感染的風(fēng)險(xiǎn)。

（2）疫情兇猛，初生仔豬發(fā)病率、死亡率均高達(dá)80%以上，同時豬場病死仔豬無害化處理工作到位，極大地減小了病原污染范圍和環(huán)境病毒濃度，有利于疫情的迅速控制。

（3）初生仔豬實(shí)施豬偽狂犬疫苗超前免疫所產(chǎn)生的主動免疫效果，對仔豬具有堅(jiān)實(shí)的防御保護(hù)作用。

（4）在初步達(dá)到野毒凈化后，應(yīng)對易感染與發(fā)病的后備豬進(jìn)行不定期抽測，如果豬場兩年以上未再檢測到偽狂犬病野毒陽性，則認(rèn)為本場凈化成功。