戴 璐 傅文凡 陳文彬

肺腺癌細胞中miR-125a-5p對吉非替尼耐藥影響

戴 璐 傅文凡 陳文彬

【摘要】目的 研究肺腺癌細胞中miRNA對吉非替尼耐藥的影響。方法 熒光定量PCR檢測miR-125a-5p在肺腺癌細胞PC9及吉非替尼耐藥細胞PC9/GR中的表達；改變miR-125a-5p在細胞株中的表達，觀察其對吉非替尼耐藥的影響。結果 miR-125a-5p在PC9細胞及PC9/GR細胞中表達有差異，增加miR-125a-5p在PC9中的表達，增加細胞對吉非替尼耐藥。結論 miR-125a-5p可促進肺腺癌細胞對吉非替尼產(chǎn)生耐藥。

【關鍵詞】肺腺癌；miR-125a-5p；吉非替尼；耐藥

Objective To study the influence of miRNA to gefitinib resistance in Lung adenocarcinoma cells． Methods The miR-125a-5p expressions in PC9 and PC9/GR were analyzed by real-time PCR． Observed the influence of the Change of miR-125a-5p expression to gefitinib resistance ． Results The miR-125a-5p expression in PC9 and PC9/GR were significant differences，and increaseing the miR-125a-5p expression in PC9 obviously promote drug resistance to gefitinib． Conclusion The miR-125a-5p can promote drug resistance to gefitinib in Lung adenocarcinoma cells．

【Key words】 Lung adenocarcinoma，The miR-125a-5p，Gefitinib，Resistance

目前在全球范圍內(nèi)，肺癌在所有惡性腫瘤中死亡率位居第一，發(fā)病率第二，而且大多數(shù)肺癌患者確診時已發(fā)展至晚期［1］。吉非替尼作為不可手術的晚期肺腺癌患者的一線治療之一，具有有效率高、毒副作用小、服藥方便等優(yōu)勢，在臨床中廣泛應用。然而用藥患者最終都將產(chǎn)生耐藥，吉非替尼耐藥的機制主要有T790M、cMET擴增、kras突變等［2］。本文主要研究miR-125a-5p對吉非替尼耐藥的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

PC9（肺腺癌細胞株），PC9/GR（耐藥細胞株），吉非替尼（AstraZeneca），細胞培養(yǎng)液及胎牛血清（Hyclone），CCK8 （Dojindo），miRNA mimics（ 銳 博 生 物 ），TurboFectTMsiRNA Transfection Reagent（Fermentas），PCR引物（銳博生物），SYBR Green Mix（TOYOBO），逆轉錄試劑盒（Takara）。

1.2熒光定量PCR檢測miR-125a-5p表達

PC9及PC9/GR細胞均在含10%胎牛血清培養(yǎng)液中，培養(yǎng)至對數(shù)生長期后消化分離，提取其總RNA，質檢合格后，應用熒光定量PCR檢測PC9及PC9/GR細胞中miR-125a-5p的表達。

1.3 吉非替尼的敏感性檢測

待PC9細胞生長至對數(shù)期，消化分離，接種于96孔板中（細胞濃度：2×104個/mL）。實驗組轉染miR-125a-5p mimics 升高其表達，對照組不轉染。24 h后兩組都加入50 nmol/L吉非替尼，藥物作用72 h后，用CCK-8檢測細胞存活，計算出抑制率。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0軟件進行單因素方差分析或t檢驗，檢驗水準P＜0.05。

2 結果

2.1 miR-125a-5p的表達

熒光定量PCR檢測miR-125a-5p在PC9/GR中表達值比PC9中表達值降低約2.5倍，且P＜0.05。

2.2 吉非替尼的敏感性

將miR-125a-5p mimics轉染至PC9，增高miR-125a-5p的表達，加入50 nmol/L吉非替尼。實驗組抑制率（14.92%）比對照組抑制率（41.03%）降低了約26.11%，且P＜0.01。見表1。

表1 吉非替尼的敏感性比較

3 討論

吉非替尼是EGFR敏感突變的晚期肺腺癌患者的一線治療方案，具有毒副作用小、服用方便、患者易于接受等優(yōu)點，廣泛應用于臨床，取得了良好的療效，但是絕大多數(shù)患者產(chǎn)生耐藥現(xiàn)象。其耐藥機制主要有T790M、cMET擴增、kras突變等［2］，進一步研究其耐藥機制及如何克服耐藥引起了廣大研究者的興趣。

本課題組前期已對PC9及PC9/GR進行芯片檢測，篩選出多個差異表達miRNAs，其中包括miR-125a-5p在PC9/GR中明顯低表達［3］。有研究證明miR-125a-5p可通過上調Rock-1促進肺癌細胞轉移［4］。但是有趣的是，另一個研究組證明miR-125a-5p通過EGFR信號通路抑制肺癌細胞的侵襲轉移［5］。

本實驗證明增加miR-125a-5p在PC9中的表達，促進其對吉非替尼產(chǎn)生耐藥，但miR-125a-5p的作用靶基因仍需進一步研究。綜上所訴，本文為闡明吉非替尼耐藥機制增加依據(jù)，可為臨床上實現(xiàn)克服吉非替尼耐藥提供理論基礎。

參考文獻

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【中圖分類號】R734．2

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2015）21-0149-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2015．21．115

作者單位：510095 廣州醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院肺腫瘤科

基金項目：2012年廣州醫(yī)學院青年基金項目（項目編號：2012A14）

Effect of the miR-125a-5p on Grug Resistance in Lung Adenocarcinoma Cells

DAI Lu FU Wenfan CHEN Wenbin Cancer Center of Guangzhou Medical University，Lung Tumor Department，Guangzhou 510095，China

【Abstract】