范友強(qiáng)（哈藥集團(tuán)中藥二廠，黑龍江 哈爾濱 150000）

高效液相色譜法測(cè)定小兒清熱口服液中綠原酸的含量

范友強(qiáng)
（哈藥集團(tuán)中藥二廠，黑龍江 哈爾濱 150000）

摘 要：本文以高效液相色譜為主要的檢測(cè)手段，來建立這種綠原酸檢測(cè)方法，具體研究如下文所述。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；小兒清熱口服液；綠原酸；含量；測(cè)定

作為一種較為常見的小兒清熱退燒藥物，在小兒清熱口服液中，，綠原酸作為重要藥效成分，其含量的多少會(huì)對(duì)口服液的退熱效果產(chǎn)生直接影響，為此在生產(chǎn)小兒清熱口服液時(shí)，一般都會(huì)對(duì)綠原酸的含量進(jìn)行有效控制，這就需要一種高效便捷的測(cè)量方法來檢測(cè)綠原酸的含量。現(xiàn)本文就以高效液相色譜為主要的檢測(cè)手段，來建立這種綠原酸檢測(cè)方法，具體研究如下文所述。

1 儀器和試藥

本試驗(yàn)中所使用的儀器主要有高效液相色譜泵、檢測(cè)儀和數(shù)據(jù)處理機(jī)。這些儀器設(shè)備均為試驗(yàn)室常用設(shè)備，且能夠滿足本試驗(yàn)的研究需要。所使用的試藥為小兒清熱口服藥品，以及綠原酸對(duì)照品，這些藥品和對(duì)照品均由相關(guān)單位檢測(cè)合格，另外試驗(yàn)中所使用的其他試劑均為分析純。

表1 小兒清熱口服液中綠原酸的回收率測(cè)定結(jié)果

2 測(cè)定方法

2.1 色譜條件

YWG-C18柱（4.0mm×150mm，10μm）；流動(dòng)相甲醇-水-四氫吠喃-冰醋酸（2.5∶97∶5∶1.5）；流速1.5mm·min-1；檢測(cè)波長327nm；靈敏度0.05AUFS；紙速0.1mm·min-1。

2.2 綠原酸對(duì)照品溶液的配制

首先應(yīng)該精密稱取一定的綠原酸對(duì)照品，以便于配制一定的對(duì)照品溶液。本試驗(yàn)中稱取了10.1mg的對(duì)照品，并將其放在10mL的容量瓶里進(jìn)行稀釋，稀釋溶液使用濃度為50%的甲醇，稀釋完后將溶液搖勻即可得到1號(hào)對(duì)照品溶液。之后再從1號(hào)對(duì)照品溶液中精密量取1mL，將其放置在10ml容量瓶中，繼續(xù)稀釋，搖勻，得到2號(hào)對(duì)照品溶液。

2.3 供試樣品液的配制

在配備完對(duì)照品溶液后，就要配制相應(yīng)的供試樣品液。其配制方法與對(duì)照品溶液相同，均是精密量取后加50%甲醇進(jìn)行稀釋，搖勻。

2.4 陰性液的配制

由于綠原酸主要存在于金銀花這一藥材中，為了排除其他藥材對(duì)綠原酸含量測(cè)量的影響，本實(shí)驗(yàn)還專門配制了陰性液加以對(duì)比分析。陰性液的配制主要是按照小兒清熱口服液的制備工藝和相關(guān)工藝參數(shù)所制備出的不含金銀花的小兒清熱口服液，并以這一溶液為樣品，采用與對(duì)照品溶液制備相同的方法制備出陰性液。

2.5 藥材液的配制

同樣需要進(jìn)行精密稱取，并將所稱取的0.15g藥材放置到到具塞錐形瓶中，加入50mL濃度為50%的甲醇溶液之后將瓶塞塞緊，然后稱量其重量，并對(duì)其進(jìn)行時(shí)長為半個(gè)小時(shí)的超聲處理。然后待溶液冷卻后，再稱量其重量，并用50%甲醇將所損失的重量補(bǔ)充回來，并搖勻。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取綠原酸對(duì)照品2號(hào)溶液2，4，5，6，8μl進(jìn)樣測(cè)定，以綠原酸進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪圖。其回歸方程為：Y=781483.90，X-15316.87， r=0.9999，綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品在0. 201～0. 807μg與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

按照測(cè)定方法重復(fù)進(jìn)樣5次，綠原酸峰面積積分值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD = 1.33%。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

按照測(cè)定方法重復(fù)測(cè)定5份樣品，綠原酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0. 4%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取5份樣品（批號(hào)：110618）各0.5mL，置50mL，容量瓶中，精密吸取各樣品液，分別精密加入綠原酸對(duì)照品2號(hào)溶液0.90mL、1.09mL、1.00mL、1.04mL、1.00mL，用50%甲醇定容至刻度，搖勻即得。按上述色譜條件測(cè)定，以下式計(jì)算回收率，結(jié)果如表1結(jié)果表明，本方法具有良好的回收率。

2.10 樣品測(cè)定

精密量取樣品液l0μL進(jìn)樣，依照上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 綠原酸含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)語

由本實(shí)驗(yàn)可以得知，在對(duì)小兒清熱口服液中的綠原酸含量進(jìn)行測(cè)定時(shí)，采用高效液相色譜法是非?？尚械摹６錅y(cè)定效果與效率在很大程度上與流動(dòng)相有較大關(guān)聯(lián)。在本試驗(yàn)中，最初使用的流動(dòng)相：甲醇-水-乙腈-冰醋酸的比例為3：97：12：3，在測(cè)定期間發(fā)現(xiàn)在此流動(dòng)相下樣品的分離效果不理想，很容易造成綠原酸峰拖尾問題，為此我們對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了一定的變動(dòng)，將乙腈換位了四氫呋喃。在經(jīng)過調(diào)整后，樣品的分離達(dá)到了理想效果。并為之后的綠原酸含量測(cè)定提供了良好條件。在對(duì)綠原酸進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)采用高效液相色譜法不但操作簡便，且檢測(cè)效果好，能夠使綠原酸和其他成分實(shí)現(xiàn)基線分離，保證了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

事實(shí)上，綠原酸含量檢測(cè)不但對(duì)小兒清熱口服液的生產(chǎn)質(zhì)量保證有很大意義，其在其他請(qǐng)熱類藥物的生產(chǎn)中也往往需要進(jìn)行要有效檢測(cè)。因?yàn)榫G原酸本身存在于金銀花中，所以只要藥物成分中有金銀花都會(huì)有綠原酸，綠原酸的殺菌功能較為顯著，在多種感冒清熱藥物中發(fā)揮積極作用，為此必須要確保這類藥物中綠原酸的含量符合相關(guān)要求。而高效液相色譜法完全可以作為一種檢測(cè)方法應(yīng)用在這些藥物的綠原酸含量檢測(cè)中。

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中圖分類號(hào)：R286

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A