高宏敬，孫珊珊，武亮飛，孫飛飛

(1.張家口學(xué)院醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)部,河北 張家口 075000;2.河北北方學(xué)院應(yīng)用研究所，河北 張家口 075000)

大黃酚磁性脂質(zhì)體制備工藝研究

高宏敬1，孫珊珊2，武亮飛2，孫飛飛2

(1.張家口學(xué)院醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)部,河北 張家口 075000;2.河北北方學(xué)院應(yīng)用研究所，河北 張家口 075000)

目的 研究大黃酚磁性脂質(zhì)體的制備工藝。方法 采用薄膜超聲法制備大黃酚磁性脂質(zhì)體，以包封率為評價(jià)指標(biāo)，通過單因素考察和正交試驗(yàn)優(yōu)化處方。結(jié)果 大黃酚磁性脂質(zhì)體的最佳處方為:藥脂比為1∶15，膜材比為5.5∶1，成膜溫度50 ℃，水化介質(zhì)為pH值為6.6的PBS溶液。最優(yōu)處方下平均包封率為(64.93±1.49)%。結(jié)論 優(yōu)選處方和制備工藝穩(wěn)定可行，采用薄膜超聲法制備的大黃酚磁性脂質(zhì)體包封率較高。

大黃酚;磁性脂質(zhì)體;薄膜超聲法

大黃酚是蓼科植物大黃有效成分之一，屬于蒽醌類化合物，具有止咳、利尿、抗菌、抗衰老、抗癌、止血、收縮血管、降低血管脆性、降血糖等功效[1]。但大黃酚溶解度較低、易被氧化、對胃腸道刺激大，且不能長時(shí)間保存，其臨床應(yīng)用受到限制。脂質(zhì)體是一種人工制備的類脂質(zhì)小球體,由一個(gè)或多個(gè)酷似細(xì)胞膜的類脂雙分子層包裹水相介質(zhì)組成[2]，具有藥物靶向性、延長藥效、降低藥物毒性、提高療效等諸多優(yōu)點(diǎn)，但因其靶向性不高、穩(wěn)定性欠佳等缺點(diǎn)，生產(chǎn)和應(yīng)用受到限制。磁性脂質(zhì)體、前體脂質(zhì)體等新型藥物脂質(zhì)體克服了上述缺點(diǎn)，已成為藥物脂質(zhì)體研究熱點(diǎn)。

磁性脂質(zhì)體(ML)是在脂質(zhì)體中摻入磁性納米粒子而制成的一種新型磁性載體，具有廣闊應(yīng)用前景[3]。Fe3O4為一種磁性載體，對膠質(zhì)瘤具有較好的靶向性，當(dāng)磁性脂質(zhì)體進(jìn)入生物體內(nèi)后,在體外磁場效應(yīng)引導(dǎo)下在體內(nèi)定向移動和定位，靶向給藥，使藥物靶向性更強(qiáng),從而降低用藥副作用，本研究中磁性脂質(zhì)體即在脂質(zhì)體中摻入納米磁性Fe3O4[4]。我們研究了大黃酚磁性脂質(zhì)體制備過程中的影響因素和最佳制備工藝，利用薄膜超聲法制備出相對穩(wěn)定的大黃酚磁性脂質(zhì)體，以期為大黃酚在臨床中應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)[5]。

1 儀器與藥品

1.1 儀器

722S型可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，RE52-99型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，800型離心沉淀器(上海手術(shù)器械廠)，ALC-210.4電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)，CX-250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備工廠)。

1.2 藥品

大黃酚試品(chrysophanol，Chry，98%，西安小草植物科技有限公司)，卵磷脂(phosphatidyl Choine，PC，北京華清美恒天然產(chǎn)物技術(shù)開發(fā)有限公司，批號:20130308)，膽固醇(cholesterol，CH，北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號:76C10150)，維生素E(上海藍(lán)季科技發(fā)展有限責(zé)任公司)，納米磁性Fe3O4(阿拉丁試劑)，甲醇(色譜純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)，無水乙醇等均為國產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 大黃酚磁性脂質(zhì)體包封率的測定

按照本課題組前期研究采用低速離心法[6]測量包封率，測定過程如下：將制得的大黃酚磁性脂質(zhì)體懸濁液轉(zhuǎn)移至10.0 mL容量瓶中，定容，混合均勻。精密量取1.0 mL溶液置離心管中，1 000 r·min-1，每次20 s，離心6次，棄上清。精密移取5.0 mL甲醇溶解沉淀，以甲醇做參比溶液，428 nm處測定吸光度，計(jì)算游離大黃酚的量。如下公式計(jì)算大黃酚磁性脂質(zhì)體包封率。

(W游離為游離大黃酚的質(zhì)量，W總為總大黃酚的質(zhì)量)

2.2 大黃酚磁性脂質(zhì)體的制備[7-8]

精密稱取處方量大黃酚、大豆卵磷脂、膽固醇及維生素E于燒杯中，完全溶于10 mL無水乙醇中，將該含藥混合溶液加入500 mL茄型瓶中，再將燒杯用5 mL無水乙醇沖洗干凈倒入茄型瓶中，加入幾顆玻璃珠，38 ℃下水浴減壓蒸發(fā)，除去無水乙醇，在瓶壁上形成透明黃色薄膜，干燥薄膜中加入分散有0.5 mg Fe3O4的PBS溶液10.0 mL，40 ℃常壓下水化約2 h，即得到黃綠色磁性脂質(zhì)體混懸液，超聲細(xì)化后即得粒徑較小的磁性脂質(zhì)體。

2.3 單因素考察

2.3.1 不同藥脂比對包封率的影響 固定大黃酚、維生素E、膽固醇的用量,使處方中藥脂比分別為3∶40、3∶45、3∶50、3∶55、3∶60，制備大黃酚磁性脂質(zhì)體，測定其包封率，結(jié)果分別為62.30%、68.35%、72.57%、54.42%、47.43%。結(jié)果顯示藥脂比為3∶50時(shí)，制備的脂質(zhì)體包封率高、穩(wěn)定性好。

2.3.2 膽固醇用量對包封率的影響 固定大黃酚、維生素E、卵磷脂的用量，使處方中卵磷脂與膽固醇的比例分別為50∶20、50∶15、50∶10、50∶8.3、50∶7，制備大黃酚磁性脂質(zhì)體，測定包封率，結(jié)果分別為65.62%、67.73%、72.72%、67.53%、48.91%。結(jié)果表明膜材比為50∶10時(shí)，制備的脂質(zhì)體包封率高、穩(wěn)定性好。

2.3.3 緩沖溶液酸度對包封率的影響 固定大黃酚、維生素E、磷脂、膽固醇的用量，使處方中的酸度分別為6.5、6.8、7.0、7.2、7.4，制備大黃酚磁性脂質(zhì)體，測定包封率，結(jié)果分別為56.17%、75.68%、74.13%、73.35%、59.53%。結(jié)果表明反應(yīng)體系pH為6.8時(shí)，包封率較高。

2.3.4 成膜溫度對包封率的影響 固定大黃酚、維生素E、磷脂、膽固醇的用量，使成膜溫度分別為38、40、45、50、55 ℃，制備大黃酚磁性脂質(zhì)體，測定包封率，結(jié)果分別為73.68%、71.38%、77.49%、71.59%、59.52%。結(jié)果表明，成膜溫度為45 ℃，包封率較高。

2.4 正交優(yōu)化試驗(yàn)

在單因素考察試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以包封率為指標(biāo)，對處方中藥脂比(A)、膜材比(B)、水化介質(zhì)的pH值(C)、成膜溫度(D)4個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)選，以期得到包封率較高的磁性脂質(zhì)體處方。選用L9(34)正交表安排試驗(yàn)，制備磁性脂質(zhì)體，測定包封率(表1～2)。

表1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表2 方差分析

表3 大黃酚磁性脂質(zhì)體驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)

從直觀分析可知，磷脂膽固醇比是影響大黃酚磁性脂質(zhì)體包封率的第一因素，藥脂比次之，水化介質(zhì)比較小，成膜溫度最小，且差異無顯著性。最佳處方為A1B3C1D3，即藥脂比1∶15，膜材比為5.5∶1，水化介質(zhì)酸度為6.6，成膜溫度為50 ℃。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

取最優(yōu)處方磁性脂質(zhì)體3批，測定其包封率分別為63.1%、66.1%、65.6%。由測定結(jié)果可知該處方和制備條件穩(wěn)定可行(表3)。

3 討 論

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，分別用氯仿甲醇混合物(體積比1∶5)、甲醇、乙醇等溶劑溶解大黃酚、大豆卵磷脂、維生素E、膽固醇，發(fā)現(xiàn)用氯仿甲醇混合物溶解的體系水化時(shí)有較大塊狀黏稠物出現(xiàn)，無法形成分散較好的懸浮液；用甲醇、乙醇溶解反應(yīng)物體系時(shí)，能夠較好的形成懸浮液，其包封率差別不大?？紤]到甲醇在高溫下容易形成甲醛對環(huán)境造成污染，所以本實(shí)驗(yàn)選擇乙醇作為溶劑。

在對制得的磁性脂質(zhì)體穩(wěn)定性進(jìn)行考察時(shí)發(fā)現(xiàn)磁性脂質(zhì)體放置一定時(shí)間后會有微量Fe3O4沉淀，用磁鐵吸附磁性脂質(zhì)體的上清液時(shí)會有少許Fe3O4發(fā)生移動，由于Fe3O4屬于極性很強(qiáng)的無機(jī)磁性顆粒，不能很好地結(jié)合在脂質(zhì)體有機(jī)官能團(tuán)上而出現(xiàn)微量滲漏，故尋找合適的Fe3O4改性方法再制備Fe3O4磁性脂質(zhì)體成為下一步需要解決的問題。

[1]張丹丹.大黃的臨床藥理研究[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2011，9(17):69-70.

[2]李曦,方燈明,何敏博,等.磁性脂質(zhì)體的制備及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].材料導(dǎo)報(bào)，2006,20(9):51-54.

[3]李鐵福,鄧英杰,王雨青.磁性脂質(zhì)體的研究進(jìn)展[J].藥學(xué)進(jìn)展，2002,26(1):5-9.

[4]張儉儉，孫曉東.新型脂質(zhì)體的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國藥房，2007,18(31)：2465-2466.

[5]王永利，王立華，武亮飛，等.大黃酚前體脂質(zhì)體的制備及其質(zhì)量評價(jià)[J].中草藥，2014,45(14):2014-2017.

[6]王永利，王立華，夏明華,等.低速離心法測定大黃酚脂質(zhì)體包封率[J].河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012,28(6):30-35.[7]王永利，王立華，李維爽，等.大黃酚脂質(zhì)體的制備及其質(zhì)量評價(jià)[J].中草藥，2011，42(6):1119-1121.

[8]凌家俊,古錦輝,謝毅,等.羥基喜樹堿磁性脂質(zhì)體的制備及其靶向性特征試驗(yàn)[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012,18(16):19-23.

[責(zé)任編輯：李薊龍 英文編輯：謝利峰]

Preparation and Evaluation of Chrysophanol Magnetic Liposomes

GAO Hong-jing1,SUN Shan-shan2,WU Liang-fei2,et al

(1.Zhangjiakou College,Zhangjiakou 075000,Hebei China； 2.Hebei North Universities,Zhangjiakou 075000,Hebei China)

Objective To study on preparation process of Chrysophanol magnetic liposomes.Methods The magnetic liposome was prepared by film-ultrasonicwave technology.A single-factor investigation and orthogonal design were used to optimize the formulation by entrapment efficiency(EE).Results The optimum prescription of magnetic liposomes as follows:The ratio of phospholipid-drug was 1∶15,the ratio of cholesterol-phospholipid was 5.5∶1,the temperature was 50 ℃,and the hydration medium for the PBS solution was pH=6.6.The average entrapment efficiency reached(64.93±1.50)% at the optimize prescription conditions.Conclusion Prepared by the film-ultrasonic wave technology,chrysophanol could be highly entrapment efficiency entrapped into magnetic liposome with good stability.

chrysophanol;magnetic liposomes;film-ultrasonic wave technology

河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(No.12276104D-94)，河北省高等學(xué)?？茖W(xué)研究計(jì)劃(No.QN2015221)

高宏敬(1973-)，女，河北張家口人，實(shí)驗(yàn)師。

R 914

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2015.04.018

來稿日期：2015-06-29