馮浩軒,王萬春，吳愛萍,魏 云

(1.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院，湖南 長沙 410008；2.湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所，湖南 長沙 410014)

椒七麝巴布貼對大鼠軟組織損傷修復(fù)及血液黏度的作用

馮浩軒1,王萬春1，吳愛萍2,魏 云2

(1.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院，湖南 長沙 410008；2.湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所，湖南 長沙 410014)

目的 探討椒七麝巴布貼對大鼠軟組織損傷的修復(fù)及活血化瘀作用。方法 SD大鼠右后肢外側(cè)局部去毛，采用重物沖擊大鼠右后肢外側(cè)軟組織造成面積約4 cm2有明顯皮下出血及腫脹的非開放性軟組織損傷模型，損傷處給予實驗藥物，連續(xù)給藥7 d，另設(shè)正常對照組10只。肉眼觀察局部組織損傷程度，并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查；頸動脈取血，肝素抗凝，SA-6000型血液流變儀測全血黏度高切、中切、低切及血漿黏度。結(jié)果肉眼觀察到椒七麝巴布貼可明顯減輕損傷組織腫大和瘀斑程度；組織形態(tài)學(xué)觀察顯示椒七麝巴布貼具有不同程度減輕嗜中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞滲出、減輕創(chuàng)傷后炎癥、促進(jìn)組織修復(fù)的作用，與對照組比較差異有顯著性(P<0.01)；椒七麝巴布貼低、中、高劑量組(0.266、0.532、1.064 mg·kg-1)可不同程度降低全血比黏度及血漿比黏度，與對照組比較差異有顯著性(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論 椒七麝巴布貼能改善軟組織損傷大鼠血液流變性及促進(jìn)軟組織損傷修復(fù)。

椒七麝巴布貼；大鼠；軟組織；損傷；活血化瘀

椒七麝巴布貼由麝香、三七、辣椒、干姜等中藥組成，具有溫經(jīng)散寒、活血止痛之功效，臨床用于寒凝血瘀性關(guān)節(jié)炎、肩周炎、腰肌勞損等。根據(jù)其功能主治，本研究旨在探討椒七麝巴布貼對大鼠軟組織損傷及活血化瘀的作用，以期為臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 藥物與動物

1.1.1 藥物 椒七麝巴布貼(51%)，規(guī)格：每片6.5 cm×9 cm，每片5.8 g，相當(dāng)生藥2.96 g，批號：110904-A；椒七麝巴布貼(102%)，規(guī)格：每片6.5 cm×9 cm，每片5.8 g，相當(dāng)生藥5.92 g，批號：110904-B；椒七麝巴布貼(204%)，規(guī)格：每片6.5 cm×9 cm，每片5.8 g，相當(dāng)生藥11.84 g，批號：110904-C；椒七麝巴布貼賦性劑，規(guī)格：每片6.5 cm×9 cm，每片5.8 g，批號：110904，均由湖南九典制藥有限公司提供。麝香壯骨膏，規(guī)格：每片7 cm×10 cm，每100 cm2不少于1.6 g，批號：111011，岳陽市金壽制藥有限公司提供。

1.1.3 儀器 OLYMPUS光學(xué)顯微鏡。TP-1200C電子天平，湘儀天平儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)。SA-6000自動血流變測試儀，北京賽科希德科技發(fā)展有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及實驗方法 60只SD大鼠，隨機(jī)取50只大鼠損傷造模，10只對照(未損傷大鼠，也不給藥)。50只模型大鼠隨機(jī)分為5組：①損傷模型組(賦形劑)；②麝香壯骨膏組(0.202 g·kg-1)；③～⑤椒七麝巴布貼低、中、高劑量組(0.266、0.532、1.064 g·kg-1)。大鼠右后肢損傷處給藥，每天一次，連續(xù)給藥7 d后，肉眼觀察局部組織損傷程度，并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查[1-8]。

另取60只SD大鼠，分組及給藥方法同上，連續(xù)給藥7 d后，頸動脈取血，肝素抗凝，待檢[1-6，8-11]。

1.2.2 造模方法 SD大鼠固定于木板上，取內(nèi)徑2.5 cm、長100 cm PVC空心管垂直置于大鼠右后肢外側(cè)軟組織上，取100 g鈍頭鐵杵從上而下自由落體沖擊大鼠右后肢外側(cè)軟組織連續(xù)3次，造成面積約2 cm×2 cm有明顯皮下出血及腫脹的非開放性軟組織損傷模型[4-6]，操作時盡可能使每只大鼠損傷部位相近，成功率100%。所使用實驗動物均獲得湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2.3 觀察指標(biāo) 肉眼觀察：肉眼觀察局部組織損傷程度，參照以下分級標(biāo)準(zhǔn)計分：“-”無明顯腫大和瘀斑；“+”無腫大，隱約可見瘀斑；“++”腫脹厚度在左側(cè)肢體同部位厚度1倍以下，可見瘀斑；“+++”腫脹厚度在左側(cè)肢體同部位厚度1倍以上和/或有明顯紫瘀斑。

病理組織學(xué)檢查：將損傷組織固定于10%中性福爾馬林溶液中，24 h后常規(guī)石臘包埋切片，HE染色，光鏡下觀察病理組織學(xué)改變，參照以下分級標(biāo)準(zhǔn)計分：“-”無明顯病理組織學(xué)改變；“+”皮下及肌纖維輕度水腫、瘀血，僅見散在嗜中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤；“++”皮下及肌纖維間中度水腫、少許肌纖維變性壞死，有明顯嗜中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤；“+++”皮下和肌纖維間重度水腫，大量肌纖維變性壞死及炎性細(xì)胞浸潤或炎性肉芽組織增生。

SA-6000型血液流變儀測定全血黏度高切、中切、低切及血漿黏度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 椒七麝巴布貼對大鼠軟組織損傷修復(fù)效果

椒七麝巴布貼(0.266、0.532、1.064 g·kg-1)可明顯減輕損傷組織腫大和瘀斑程度，可減輕嗜中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞滲出，減輕創(chuàng)傷后炎癥，促進(jìn)組織修復(fù)。與損傷模型組比較差異有顯著性(P<0.01)(表1～2，圖1)。

表1 椒七麝巴布貼修復(fù)大鼠軟組織損傷肉眼觀察結(jié)果

注：與損傷模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與麝香壯骨膏組比較#P<0.05。

表2 椒七麝巴布貼修復(fù)大鼠軟組織損傷顯微鏡觀察結(jié)果

注：與損傷模型組比較*P<0.05，**P<0.01，與麝香壯骨膏組比較#P<0.05。

圖1 椒七麝巴布貼修復(fù)大鼠軟組織損傷病理觀察結(jié)果(HE染色,250×)

2.2 椒七麝巴布貼活血化瘀作用

椒七麝巴布貼低、中、高劑量組具有不同程度降低全血比黏度及血漿比黏度作用，與損傷模型組比較差異有顯著性(P<0.05，P<0.01)，提示椒七麝巴布貼具有改善血液流變性的作用(表3)。

表3 椒七麝巴布貼對大鼠血液流變性的影響±s)

注：與損傷模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

3 討 論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，軟組織損傷引起炎癥的主要因素有損傷因子、化學(xué)因子、致熱源和微生物，組織受損后，組織細(xì)胞失活、肌纖維斷裂、局部小血管破裂、紅細(xì)胞浸潤，血漿因子與暴露的基膜、膠原等接觸，于是激肽系統(tǒng)、補(bǔ)體系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)、纖維系統(tǒng)變化，釋放組織胺、5-羥色胺、緩激肽、前列腺素E等炎性介質(zhì)，引起血管反應(yīng)。微血管經(jīng)過短暫收縮后發(fā)生擴(kuò)張和充血，血管壁通透性增高，水分、電解質(zhì)和血漿蛋白滲入組織間隙，同時中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞從血管溢出，進(jìn)入損傷組織間隙，局部表現(xiàn)為腫脹疼痛、功能障礙[12-13]。同時損傷愈合的基礎(chǔ)也是炎性細(xì)胞如中性粒細(xì)胞和修復(fù)細(xì)胞如成纖維細(xì)胞一系列活動的結(jié)果。

本研究結(jié)果表明，椒七麝巴布貼對急性軟組織損傷大鼠具有抑制局部創(chuàng)傷炎癥反應(yīng)、明顯減輕嗜中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞滲出、減輕創(chuàng)傷后炎癥、加快損傷組織修復(fù)的作用；能不同程度降低大鼠血液黏度及血漿黏度，具有活血化瘀作用，與損傷模型組相比，差異有顯著性。其機(jī)理可能是其對炎性早期毛細(xì)血管通透性增加及炎癥發(fā)生過程均有抑制作用，通過降低毛細(xì)血管通透性避免炎性細(xì)胞大量滲出，同時使血流加速，改善損傷局部供血，加速組織損傷后所釋放的組織胺、5-羥色胺、緩激肽、前列腺素等致痛因子的運(yùn)轉(zhuǎn)和破壞或抑制它們的釋放，達(dá)到抗炎鎮(zhèn)痛作用；另一方面椒七麝巴布貼由麝香、三七、辣椒、干姜等中藥組成，具有溫經(jīng)散寒、活血止痛之功效；第三，椒七麝巴布貼中麝香含有的麝香酮能通過降低HUVEC表面ICAM-1、VCAM-1和CD44表達(dá)而抑制中性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附，可能是麝香促進(jìn)創(chuàng)面愈合的機(jī)制之一[14]。三七中的皂甙具有活血作用，三七黃酮能降低血管脆性，改善血管通透性，辣椒中的辣椒堿具有消炎止痛作用。所以，椒七麝巴布貼能改善軟組織損傷大鼠血液流變性及促進(jìn)損傷軟組織修復(fù)。

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[責(zé)任編輯：李薊龍 英文編輯：謝利峰]

Effects of Seven Deer Pepper Babu Paste in Repairing and Promoting Blood Circulation by Removing Blood Stasis on Soft Tissue Injury of Rat

FENG Hao-xuan1,WANG Wan-chun1,WU Ai-ping2,et al

(1.The Second Xiangya Hospital,Central South University,Changsha 410008,Hunan China； 2.Hunan Institute of Pharmaceutical Industry,Changsha 410014,Hunan China)

Objective To study the effect of Seven Deer Pepper Babu paste in repairing and promoting blood circulation by removing blood stasis on the soft tissue injury of rat.Methods SD rats were caused significant subcutaneous bleeding and swelling areas of about 4cm2into non-open soft tissue injury model by heavy impact on outside of the right hind limb soft tissue after unhairing then right hind limb lesions in rats were given the experimental drug for consecutive seven days,while normal control group including 10 rats was set up.Afterwards,visually observe the extent of local tissue damage,histopathological examination,carotid artery blood,heparin,and measure whole blood viscosity,high cut,cut,low cut and plasma viscosity with SA-6000-type blood rheology.Results Seven Deer Pepper Babu paste could significantly reduce the extent of damage to tissue swelling and bruising with naked eye observation.Histological observation showed Seven Deer Pepper Babu paste could ease neutrophils and other inflammatory cell leakage with different degrees,reduce post-traumatic inflammation,promote tissue repairing function.Compared with that of control group,the difference was significant(P<0.01).For Seven Deer Pepper Babu paste low,medium and high dose groups(0.266,0.532,1.064 mg crude drugs/Kg)with varying degrees of reduced whole blood,it had a significant viscosity and plasma viscosity compared with that of control group,the difference was(P<0.05,P<0.01).Hence,Seven Deer Pepper Babu paste had effect in improving blood rheology.Conclusion Seven Deer Pepper Babu paste could improve blood rheology of soft tissue injury in rats and promote the repairing of soft tissue injury.

Seven Deer Pepper Babu Paste;rats soft tissue;injury;promoting blood circulation and removing blood stasis

馮浩軒(1989-)，男，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院研究生，專業(yè)方向：骨關(guān)節(jié)外科。

王萬春(1962-)，男，教授、博士，專業(yè)方向：骨與關(guān)節(jié)疾病的基礎(chǔ)與臨床研究。

R 979.4

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2015.04.015

來稿日期：2015-06-02