王　霖

結(jié)核菌特異性抗原ESAT-6及CFP-10在肺結(jié)核及肺炎患者中的診斷價值

王霖

【摘要】目的 分析結(jié)核菌特異性抗原ESAT-6及CFP-10在肺結(jié)核及肺炎患者中的診斷價值。方法 將48例肺結(jié)核患者作為觀察組，30例肺炎患者作為對照組，分別進行PPD及ELISA實驗，對兩組患者的結(jié)核菌特異性抗原在兩種疾病中的診斷價值進行分析。結(jié)果 經(jīng)ELESA實驗檢測，觀察組結(jié)核菌陽性率、特異度及靈敏度分別為87．50%、93．75%、89．58%；對照組結(jié)核菌陽性率、特異度及靈敏度分別為60．00%、66．67%、70．00%；組間比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。經(jīng)PPD實驗檢測，觀察組結(jié)核菌陽性率、特異度及靈敏度分別為45．83%、50．00%、47．92%；對照組結(jié)核菌陽性率、特異度及靈敏度分別為46．67%、50．00%、53．33%；組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。結(jié)論采用ELISA法對肺結(jié)核及肺炎患者ESAT-6及CFP-10抗原進行檢測可鑒別兩者的不同，與PPD法相比，ELISA法在肺結(jié)核及肺炎的鑒別中診斷價值更優(yōu)。

【關(guān)鍵詞】結(jié)核菌特異性抗原；ESAT-6；CFP-10；肺結(jié)核；肺炎

Objective To evaluate the value of Mycobacterium tuberculosis specific antigen ESAT-6 and CFP-10 in the diagnosis of pulmonary tuberculosis and pneumonia patients． Methods 48 cases of patients with pulmonary tuberculosis as the observation group，30 cases of patients with pneumonia as control group，PPD and ELISA experiments were performed and the diagnostic value of two groups of patients with tuberculosis specific antigen in the two kinds of diseases were analyzed． Results By ELISA assay to observe the Mycobacterium tuberculosis positive rate，specificity and sensitivity were 87．50% and 93．75% and 89．58%． Control group TB positive rate，specificity and sensitivity were 60．00%， 66．67%， 70．00%，inter group had significant difference（P＜ 0．05）． The PPD test，observation group TB positive rate，sensitivity and specificity of 45．83%，50．00%， 47．92% respectively，control group TB positive rate，specificity and sensitivity were 46．67%，50．00%，53．33%，and inter group had no significant difference（P＞0．05）．Conclusion ELISA method can be used to detect the ESAT-6 and CFP-10 antigen in patients with pulmonary tuberculosis and pneumonia，and it can be used to distinguish the difference between ELISA and PPD．

【Key words】Mycobacterium tuberculosis specific antigen，ESAT-6，CFP-10，Pulmonary tuberculosis，Pneumonia

肺結(jié)核在我國的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，是臨床死亡率和感染率最高的傳染性疾病，該病的快速診斷是治療和控制的關(guān)鍵。現(xiàn)階段，臨床主要采用結(jié)核菌素試驗及細菌學檢查對該病進行診斷，單因結(jié)核菌的生長特點及卡介苗接種的廣泛使用，采用上述方式診斷肺結(jié)核具有一定的局限性［1］。ESAT-6及CFP-10是結(jié)核菌特異性低分子蛋白，僅存在于致病性的結(jié)合桿菌中，可對機體進行刺激，促進機體產(chǎn)生特異性較強的免疫球蛋白。因此，臨床可結(jié)合兩種抗原的特性，對肺結(jié)核及肺炎進行診斷和鑒別［2-3］。本組研究中，采用PPD及ELISA實驗對肺結(jié)核及肺炎患者血清中ESAT-6及CFP-10抗原的含量進行檢測和分析，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2014年2月～2015年7月收治的48例肺結(jié)核患者及30例肺炎患者作為研究對象，患者均符合結(jié)核病學分會制定的肺結(jié)核診斷標準和呼吸病學會制定的肺炎診斷標準，經(jīng)白細胞計數(shù)、結(jié)核菌素實驗及影像學檢查確診［4］。入選標準：初治者尚未服用結(jié)核藥物；復診的患者使用結(jié)核藥物的時間不超過1年。肺結(jié)核患者為觀察組，其中男性30例，女性18例；年齡分布為45 ～74歲，平均年齡為（60.4±2.3）歲；病程為3個月～6年，平均為（2.4±0.4）年。肺炎組患者為對照組，其中男性20例，女性10例；年齡分布為47～76歲，平均年齡為（60.5±2.1）歲；病程為2個月～7年，平均為（2.3±0.5）年。兩組患者性別構(gòu)成、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

兩組患者均在清晨空腹抽取靜脈血作為標本，速度為3 000 轉(zhuǎn)/min進行離心，時間為3 min，將血清分離后，在零下20℃的環(huán)境下保存。先進行ELISA實驗，取100 μl濃度各異的標準品和血清標本放入反應孔中，在溫度為25℃的環(huán)境下放置1 h。沖洗3次后，加入酶標記的抗體，在溫度為25℃的環(huán)境下放置1 h。再沖洗3次，放入顯色液，20 min后在每個孔中加入劑量為100 μl的終止液體，搖晃均勻后采用酶標儀對各孔溶液的吸光度值進行測定。結(jié)果判定方法：將試劑盒中的標準品作為定性值，顏色較深為陽性，顏色較淡為陰性［5］。

結(jié)核菌素實驗方法：采用TST法在左側(cè)前臂曲側(cè)1/3處，使用0.1 ml菌素進行皮內(nèi)注射，用10 mm長的26號針頭及1 ml注射器，在注射后可立即出現(xiàn)凸起的皮丘，可見清楚的邊界，在上面出現(xiàn)明顯的凹陷地方，實驗后72 h左右可見結(jié)果。結(jié)果判定方法：用手指觸摸硬結(jié)的邊緣，對硬結(jié)的平均直徑進行測量和計算，直徑不超過4 mm為陰性，4 mm以上為陽性［6-7］。

1.3 統(tǒng)計學分析

使用統(tǒng)計學軟件包SPSS 20.0實現(xiàn)全部數(shù)據(jù)的分析和處理，用率表示計數(shù)資料，組間比較用χ2檢測，P＜0.05提示兩組差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1 兩組患者ELISA實驗結(jié)果分析

經(jīng)ELISA實驗，觀察組與對照組結(jié)核菌檢測陽性率、特異度和靈敏度的比較差異差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩組患者ELESA實驗結(jié)果比較n［%］

2.2 兩組患者PPD實驗結(jié)果分析

經(jīng)PPD實驗檢測，觀察組與對照組結(jié)核菌陽性率、特異度及靈敏度的檢測差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2　兩組患者PPD實驗結(jié)果比較n［%］

3　討論

結(jié)核病是目前死亡率及感染率最高的傳染性疾病之一。結(jié)核病診斷的延誤可對患者的健康產(chǎn)生嚴重影響，同時增加了結(jié)核病傳播的幾率［8］。肺炎也是臨床常見的感染性疾病，嚴重者可能出現(xiàn)全身炎性變化，并進展為肺結(jié)核。目前，臨床多采用結(jié)核菌培養(yǎng)、痰涂片鏡檢及影像學等相關(guān)實驗對肺結(jié)核進行診斷，單因結(jié)核分歧桿菌自身的生長特點及卡介苗接種的廣泛使用，使得一些方法對結(jié)核病的診斷具有某些限制，無法進行準確判斷。再加上因多種因素的影響，肺結(jié)核的臨床表現(xiàn)并不十分典型，部分患者痰中含菌量較少或無痰［9］。另外，結(jié)核分歧桿菌的耐藥性不斷上升，HIV陽性患者在合并結(jié)核菌感染后，其臨床表現(xiàn)與單純的結(jié)核病差異大，傳統(tǒng)診斷結(jié)核的方式無法滿足患者臨床診斷的需要，因此，需探索新的、特異性較高的診斷方式對結(jié)核病及肺炎進行診斷［10］。

ESAT-6是致病性結(jié)核桿菌中特異性較低的分泌性蛋白，可對機體產(chǎn)生刺激，進而誘發(fā)特異性免疫球蛋白的生成。該蛋白僅存于致病性結(jié)核桿菌中，如非洲、牛型及人型分歧桿菌中，但是卡介苗及其他非致病性分歧桿菌中則不包括這類物質(zhì)。ESAT-6可對機體產(chǎn)生刺激，從而產(chǎn)生特異性較高的免疫球蛋白，利用其特性，可采用免疫檢測法對患者血清抗原及抗體含量進行檢測。相關(guān)研究表明，采用ELISA法對患者血清抗原及抗體的含量進行檢測，可對結(jié)核菌感染及接種卡介苗進行區(qū)分，進而進行科學、合理的治療［11］。CFP-10是上世紀末鑒定出的低分子質(zhì)量蛋白，特異性較高，可被γ干擾素識別，該抗原可作為T細胞的診斷抗原。有研究稱，聯(lián)合檢測ESAT-6及CFP-10將兩種單一抗原的優(yōu)勢結(jié)合在一起，并可刺激外周血單個核細胞的表位，產(chǎn)生大量IFN-γ，產(chǎn)生更為強大的活化能力，與單一抗原檢測相比，敏感度及特異度更高；經(jīng)證實，聯(lián)合檢測可有效將肺結(jié)核疾病的特異性提升至97%，敏感性提升至90%。本組研究中，兩組患者診斷的靈敏度及特異度低于前人研究，可能與樣本數(shù)量較少，及試劑選擇、操作方式相關(guān)。

本組研究中，分別采用ELISA法及PPD法聯(lián)合檢測ESAT-6 及CFP-10，對肺結(jié)核及肺炎患者的血清標本進行檢測，并進行統(tǒng)計學分析，對兩種實驗方式的可行性進行評價。進行ELISA檢測時，肺結(jié)核患者結(jié)核菌陽性率、特異度及靈敏度較高，提示ELISA法可作為鑒別肺結(jié)核及肺炎的重要依據(jù)。對PPD實驗檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學分析可得，肺結(jié)核患者及肺炎患者結(jié)核菌陽性率、特異度及靈敏度比較差異無統(tǒng)計學意義，原因可能在于受到卡介苗的影響。

本實驗為定性實驗，因此采用定性的方法對本組研究結(jié)果進行判定，實驗讀取的數(shù)據(jù)與結(jié)核菌特異性抗原呈正比關(guān)系，在理論上數(shù)值的高低可對感染程度進行反應，數(shù)值越高對診斷結(jié)果的意義越大，在病例治療期間，可對該數(shù)值進行監(jiān)測，從而診斷結(jié)核的治療情況。其中最有價值的部分是對結(jié)核菌抗原的研究，可進一步分析結(jié)核菌的耐藥性，但是本實驗受到人為和環(huán)境因素的影響，實驗的標準樣數(shù)值有所不同，因此無數(shù)值作為監(jiān)測標準，有待進一步研究發(fā)現(xiàn)［12］。本研究的優(yōu)勢在于操作簡單，結(jié)果判定容易，無需特殊的專業(yè)技術(shù)；無交叉反應，對BCG接種者及感染肺結(jié)核的患者均可適用；在體外進行血清檢驗，不受限制，無危險，無需回診。該方式同時適用于所有結(jié)核菌檢驗，可提前篩檢出感染的患者，在極大程度上預防了病菌的擴散，也可廣泛用于一般人的健康檢查中。

綜上所述，采用ELISA法對肺結(jié)核及肺炎患者ESAT-6及CFP-10抗原進行檢測可鑒別兩者的不同，與PPD法相比，ELISA法在肺結(jié)核及肺炎的鑒別診斷中更優(yōu)。

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The Diagnostic Value of Mycobacterium Tuberculosis Specific Antigen ESAT-6 and CFP-10 in Patients With Pulmonary Tuberculosis and Pneumonia

WANG Lin Third People＇s Hospital of Kunming City（Kunming Tuberculosis Prevention and Control Center），Kunming 650301，China

【Abstract】

【中圖分類號】R521

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2015）32-0172-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2015．32．121

作者單位：650301 昆明市第三人民醫(yī)院（昆明結(jié)核病防治院）