趙孝木 汪忠榮莫興虎 楊先富 袁曉娟

廖 飛 吳通奎 姜 艷 楊 梅 黃功明

(黔東南州動物疫病預(yù)防控制中心,貴州凱里 556000)

黔東南州2015年“兩節(jié)”期間禽流感監(jiān)測分析

趙孝木 汪忠榮*莫興虎 楊先富 袁曉娟

廖 飛 吳通奎 姜 艷 楊 梅 黃功明

(黔東南州動物疫病預(yù)防控制中心,貴州凱里 556000)

目的:了解禽流感病毒H5與H7亞型在不同場所外環(huán)境的分布狀況,切實做好“兩節(jié)”期間禽流感防控工作。方法:從養(yǎng)殖場、活禽交易市場、散養(yǎng)戶、環(huán)境采集樣品進行檢測。結(jié)果:熒光RT-PCR復(fù)核,764份樣品,H5亞型陽性數(shù)19份,陽性率為2.49%,H7亞型陽性數(shù)為零。H5亞型陽性分別來自交易市場和禽宰殺點。結(jié)論:黔東南州部分交易市場和禽宰殺點存在著H5亞型禽流感病毒,接觸禽類內(nèi)臟及活禽交易市場和家禽屠宰點是感染禽流感的高危因素,應(yīng)加強環(huán)境衛(wèi)生整治,落實環(huán)境消毒,以減少H5亞型禽流感傳播至人的風(fēng)險。

禽流感;血凝抑制試驗;熒光RT-PCR試驗

禽流感（AI）是由甲型禽流感病毒（AIV）任何一種血清亞型毒株引起各種家禽及野生禽類發(fā)生疫病的傳染性疾病，目前已知能感染人的有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3 亞型毒株。禽類作業(yè)環(huán)境可以增加感染禽流感病毒的危險性，禽類從業(yè)人群為感染禽流感的高危職業(yè)人群。為摸清黔東南州涉禽的不同場所免疫抗體合格率、H5和H7亞型病原污染情況，在全州開展禽流感免疫抗體和禽流感病原監(jiān)測，努力確保2015年“兩節(jié)”期間不發(fā)生重大動物疫情，切實維護公共安全。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 診斷試劑

禽流感H5亞型血凝抑制抗原與陰、陽性血清（廠家：青島易邦生物工程有限公司，批號：2013002、2013002、2013002）；禽流感H7亞型血凝抑制抗原與陰、陽性血清（廠家：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，批號：2014001、2014002、2014002）；禽流感H5亞型RT-PCR診斷試劑盒（廠家：北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司，批號AIVH520140807P），禽流感H7亞型RT-PCR診斷試劑盒（廠家：北京世紀(jì)元亨，批號AIVH720141007P），禽流感H7亞型抗原檢測卡（廠家：上海容暉生物科技有限公司，批號：GA14050404），以上試劑均由貴州省動物疫病預(yù)防控制中心提供。禽流感H5亞型抗原檢測卡（批號：20140104）購買于深圳康百得生物科技有限公司。

1.1.2 樣品采集

按照NY/T765-2004《高致病性禽流感樣品采集、保存及運輸技術(shù)規(guī)范》進行。2101份樣品分別采集自黔東南州轄區(qū)內(nèi)養(yǎng)殖場、活禽交易市場、散養(yǎng)戶、禽宰殺點。

1.2 方法

1.2.1 禽流感抗體檢測

依據(jù)《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》（GB19442－2004）用血凝抑制試驗（HI）對血清樣品進行H5和H7禽流感抗體檢測，嚴(yán)格按照診斷試劑說明書的要求進行操作，以完全抑制4個血凝單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。

1.2.2 禽流感快速檢測卡檢測

操作和結(jié)果判斷按試劑盒說明書進行。

1.2.3 禽流感核酸檢測

采用熒光定量RT-PCR試驗對快速檢測卡檢測出的陽性樣品和可疑樣品進行復(fù)核。操作參照試劑盒說明書進行，結(jié)果判定按《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》執(zhí)行。

2 結(jié)果

2.1 禽流感抗體檢測

來自不同采集點的樣品H5亞型抗體合格率不同（表1），養(yǎng)殖場的合格率最高91.67%，散養(yǎng)戶的合格率最低76.25%。

表1 禽流感血清樣本抗體檢測結(jié)果

2.2 禽流感快速檢測卡檢測

不同來源樣品H5亞型和H7亞型禽流感病原檢出率不同，其中禽宰殺點陽性率最高，陽性率為4.40%，詳見表2。

2.3 禽流感核酸檢測

用熒光定量RT-PCR對陽性樣品和可疑樣品進行復(fù)核，結(jié)果：H5亞型活禽交易市場3份陽性，禽宰殺點16份陽性；H7亞型全部為陰性，詳見表3。

3 分析與討論

禽流感免疫是防止禽流感發(fā)生和流行的主要方法，本次對黔東南州內(nèi)多家種禽場、商品養(yǎng)禽場、活禽交易市場和散養(yǎng)家禽進行了免疫抗體檢測，對免疫抗體合格率不達標(biāo)的及時進行補免，保證“兩節(jié)”期間在本轄區(qū)內(nèi)不發(fā)生重大動物疫病。從檢測結(jié)果看，散養(yǎng)戶免疫合格率相對比較低76.25%。

禽流感病毒根據(jù)病毒表面血凝素（HA）抗原和神經(jīng)氨酸酶（NA）抗原的不同，可分為不同血清型，感染人的禽流感病毒亞型主要為H5N1、H9N2、H7N7、H7N9，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。但目前人感染禽流感病例仍處于偶發(fā)、散發(fā)狀態(tài)，其感染來源的調(diào)查很難。2005年我國報告首例人禽流感病例，貴州省于2009年首次報告人禽流感病例，到2015年2月貴州省共報告7例人禽流感病例。本次調(diào)查通過對涉禽場所的監(jiān)測，目的是進一步確定感染禽流感的高危因素，為確定感染來源與制定防控措施提供依據(jù)。監(jiān)測結(jié)果顯示：19份禽流感H5亞型陽性樣品分別來自活禽交易市場和禽宰殺點，說明黔東南州部分交易市場和禽宰殺點被禽流感H5亞型病毒污染，應(yīng)加強環(huán)境衛(wèi)生整治，落實環(huán)境消毒，以減少H5亞型禽流感傳播至人的風(fēng)險。

近年來，黔東南州雖然沒有發(fā)生禽類禽流感疫情和人感染禽流感病例，但黔東南州疾病預(yù)防控制中心和動物疫病預(yù)防控制中心在活禽交易市場和禽宰殺點先后都檢出禽流感H5亞型核酸陽性，此外相關(guān)報道在該州野鳥糞便中也檢測出禽流感H7亞型核酸陽性，說明該州在流通環(huán)節(jié)和野鳥棲息地存在禽流感疫情發(fā)生的風(fēng)險。其相關(guān)部門要加強農(nóng)貿(mào)市場規(guī)范化管理，嚴(yán)格執(zhí)行衛(wèi)生清潔、環(huán)境消毒和定期休市制度，加大綜合治理力度，改善家禽銷售和宰殺環(huán)境衛(wèi)生狀況；動物衛(wèi)生監(jiān)督部門要按照禽流感防控相關(guān)規(guī)定，加強檢疫監(jiān)管，嚴(yán)把市場準(zhǔn)入關(guān)，堵住疫源；加強禽流感防控知識的宣傳，增強防護意識。從事家禽販運、交易、屠宰的從業(yè)人員以及經(jīng)常購買禽類的群眾感染禽流感的風(fēng)險較高，應(yīng)加強對他們的健康教育宣傳，增強個人防護意識，盡可能減少感染機會；農(nóng)業(yè)和衛(wèi)生部門要建立和完善禽流感等重大疫病防控技術(shù)支撐體系，定期對流通環(huán)節(jié)進行監(jiān)測，為禽流感防控工作決策提供科學(xué)依據(jù)。

表2 禽流感快速檢測卡檢測結(jié)果

表3 禽流感熒光RT-PCR檢測結(jié)果

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趙孝木（1966-），男，漢，貴州省正安縣人，本科，獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防控研究。

汪忠榮（1978-），女，獸醫(yī)師，碩士，主要從事動物疫病診斷與防治研究。