李 健， 喬世銘， 史 楓， 葉朕雄， 李 奇， 王世偉

(同濟(jì)大學(xué)附屬楊浦醫(yī)院普外科，上海 200090)

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·基礎(chǔ)研究·

聯(lián)合檢測血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1在胃癌診斷中的價(jià)值

李 健， 喬世銘， 史 楓， 葉朕雄， 李 奇， 王世偉

(同濟(jì)大學(xué)附屬楊浦醫(yī)院普外科，上海 200090)

目的 檢測血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1在胃癌患者血清中的水平，探討其在胃癌診斷中的臨床價(jià)值。方法 采用化學(xué)發(fā)光免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法測定60例胃癌患者血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平，選擇同期的20例健康體檢者作為對(duì)照。分別于術(shù)前、術(shù)后對(duì)患者血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1進(jìn)行檢測，對(duì)比胃癌患者手術(shù)前、后CEA、CA199、TGFα和TGFβ1血清水平及術(shù)后變化規(guī)律。研究CEA、CA199、TGFα和TGFβ1血清水平與臨床因素(性別、年齡)和胃癌腫瘤特性(腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期)的關(guān)系，觀察其在不同TNM分期的變化。結(jié)果 與正常對(duì)照組相比，胃癌患者血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1含量均顯著升高(P<0.05)。胃癌組患者術(shù)后血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平均顯著低于術(shù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。術(shù)后7、14、28、56d，各血清指標(biāo)逐漸下降，趨近正常水平。CEA、CA199、TGFα和TGFβ1四項(xiàng)血清指標(biāo)聯(lián)合檢測的陽性檢出率(85.00%)顯著高于單項(xiàng)檢測的陽性檢出率(38.33%，46.67%，53.33%，51.67%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各血清指標(biāo)CEA、CA199、TGFα和TGFβ1的表達(dá)水平在胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小各因素方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而TGFβ1在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有無淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面有顯著性差異。各血清指標(biāo)水平升高與胃癌的臨床病理分期有密切的關(guān)系。結(jié)論 血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平與胃癌的發(fā)展程度相關(guān)，聯(lián)合檢測CEA、CA199、TGFα和TGFβ1，有助于胃癌的早期診斷，提高胃癌的檢出率。

胃腫瘤； 血清； 糖類抗原199； 癌胚抗原； 轉(zhuǎn)化生長因子α； 轉(zhuǎn)化生長因子β1

消化道腫瘤是一種常見的惡性腫瘤，其中胃癌死亡率高居惡性腫瘤之首，主要原因在于早期診斷率低，對(duì)腫瘤的浸潤、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移缺乏足夠干預(yù)手段。早期診斷和治療可以顯著提高胃癌患者的生存率。腫瘤標(biāo)記物的聯(lián)合檢測對(duì)腫瘤早期診斷、分析病程、預(yù)后估計(jì)方面具有重要意義。糖類抗原199(CA199)和癌胚抗原(CEA)是胃癌診斷、術(shù)后隨訪中使用最廣泛的腫瘤標(biāo)記物，但存在陽性檢出率低，干擾因素多等缺點(diǎn)。近年來,研究又發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、凋亡關(guān)系密切[1-2]，本研究旨在聯(lián)合檢測分析胃癌患者血清因子CEA、CA199、TGFα、TGFβ1的水平，探討其在胃癌早期診斷中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2010年3月至2013年9月收治的胃癌患者60例,其中男36例，女24例，患者年齡39～76歲，平均(53.76±5.27)歲；正常對(duì)照組20例，為經(jīng)體檢確定的健康者，無其他急慢性疾病，男12例，女8例，年齡37～62歲，平均(56.52±7.31)歲。所有胃癌患者均根據(jù)胃鏡活檢病理、術(shù)后病理學(xué)檢查，確診為胃癌。本試驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，全部患者均簽署知情同意書。

根據(jù)2010年美國癌癥聯(lián)合協(xié)會(huì)(American Joint Committee on Cancer, AJCC)修訂的第7版TNM腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)將所有患者予以分期: T1期: 腫瘤侵及黏膜固有層，黏膜肌層或黏膜下層。T2期: 腫瘤侵及固有肌層。T3期: 腫瘤穿透漿膜下結(jié)締組織，尚未侵及腹膜或鄰近結(jié)構(gòu)與器官。T4期: 腫瘤侵及漿膜或鄰近結(jié)構(gòu)與器官。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)分期，60例患者中T1期20例，T2期13例，T3期17例，T4期10例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移37例，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移23例。

1.2 處理方法

正常對(duì)照組(n=20)及胃癌患者(n=60)于術(shù)前3d抽取空腹靜脈血4ml，離心后取血清置于 -20 ℃冰箱保存待測，檢測各血清指標(biāo)水平。其中20例胃癌患者分別于術(shù)前及術(shù)后7、14、28、56d檢測各血清指標(biāo)水平。CEA和CA199采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測。TGFα和TGFβ1測定采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測，全部操作均由專人按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

檢測結(jié)果的陽性值界定范圍: CA199>35U/ml，CEA>10ng/ml，TGFα>9ng/L，TGFβ1>12μg/L，即陽性。CEA、CA199、TGFα和TGFβ1聯(lián)合檢測指標(biāo)中若有一項(xiàng)陽性，即定為聯(lián)合檢測陽性。統(tǒng)計(jì)各血清指標(biāo)單項(xiàng)檢測與聯(lián)合檢測下胃癌檢出陽性量，計(jì)算陽性率。分析CEA、CA199、TGFα和TGFβ1血清水平與臨床因素(性別、年齡)和胃癌腫瘤特性(腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期)的關(guān)系。分別記錄術(shù)后7、14、28、56d CEA、CA199、TGFα和TGFβ1血清水平，繪制各血清指標(biāo)的術(shù)后變化曲線。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組間各血清指標(biāo)水平比較

如表1數(shù)據(jù)顯示，血清指標(biāo)CEA、CA199、TGFα和TGFβ1在胃癌患者中高度表達(dá)(17.37±2.43)、(96.31±10.26)、(14.63±2.13)、(23.15±3.58)，與正常對(duì)照組相比，胃癌患者血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1含量均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 兩組患者血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平比較

組 別nCEA/(μg·L-1)CA199/(IU·mL-1)TGFα/(ng·L-1)TGFβ1/(μg·L-1)正常對(duì)照組203.61±0.5715.65±2.516.15±1.073.15±0.92胃癌組6017.37±2.43*96.31±10.26*14.63±2.13*23.15±3.58*

注: 與對(duì)照組比較，*P<0.05

*P<0.05vsthe control group

2.2 胃癌組術(shù)前與術(shù)后各血清指標(biāo)水平比較

表2為胃癌組患者術(shù)前和術(shù)后血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平比較，各血清指標(biāo)含量在術(shù)后均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 胃癌組患者術(shù)前和術(shù)后血清 CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平比較

組 別(n=20)CEA/(μg·L-1)CA199/(IU·mL-1)TGFα/(ng·L-1)TGFβ1/(μg·L-1)胃癌術(shù)前組17.37±2.4396.31±10.2614.63±2.1323.15±3.58胃癌術(shù)后組9.65±1.23*65.31±10.07*8.12±2.06*10.58±3.21*

注: 與術(shù)前比較，*P<0.05

*P<0.05vsbefore surgery

2.3 各腫瘤指標(biāo)的術(shù)后水平變化曲線

圖1、2、3、4分別為患者在術(shù)后7、14、28、56d時(shí)血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平變化曲線圖，由圖中可以看出胃癌患者術(shù)后7～56d的過程中，各血清指標(biāo)逐漸下降，趨近正常水平，與術(shù)前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 血清指標(biāo)CEA的術(shù)后水平變化曲線Fig.1 Changes of serum CEA level after operation

圖2 血清指標(biāo)CA199的術(shù)后水平變化曲線Fig.2 Changes of serum CA199 level after operation

圖3 血清指標(biāo)TGFα的術(shù)后水平變化曲線Fig.3 The change of serum TGFα level after operation

圖4 血清指標(biāo)TGFβ1的術(shù)后水平變化曲線Fig.4 The change of serum TGFβ1 level after operation

2.4 單項(xiàng)檢測與聯(lián)合檢測胃癌陽性率的比較

胃癌患者各血清指標(biāo)CEA、CA199、TGFα和TGFβ1單項(xiàng)檢測與聯(lián)合檢測的檢出陽性率結(jié)果如表3所示，四項(xiàng)血清指標(biāo)聯(lián)合檢測的陽性檢出率為85%(51/60例)，顯著高于CEA、CA199、TGFα和TGFβ1的單項(xiàng)檢測的陽性檢出率(38.33%，46.67%、53.33%、51.67%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 各血清指標(biāo)單項(xiàng)檢測與聯(lián)合檢測下胃癌檢出陽性率的比較

注: 與四項(xiàng)聯(lián)合檢測比較，*P<0.05

*P<0.05vsthe combined detection

2.5 胃癌腫瘤特性與血清指標(biāo)檢測結(jié)果的關(guān)系

如表4所示，各血清指標(biāo)CEA、CA199、TGFα和TGFβ1的表達(dá)水平在胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、各因素方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示4項(xiàng)血清指標(biāo)與以上各因素?zé)o相關(guān)性。

表4 各血清指標(biāo)檢測結(jié)果與臨床因素及腫瘤特性的關(guān)系

(續(xù)表4)

注: 與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組比較，**P<0.05

與正常對(duì)照組相比，*P<0.05，與T1和T2組相比，#P<0.05

**P<0.05, compared to lymph node and distant metastasis free group,

*P<0.05 compared to control group,#P<0.05 compared to T1 and T2 groups

而TGFβ1在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有無淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面有顯著性差異，胃癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，TGFβ1的含量水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

按照胃癌TNM分期，T3和T4期患者組CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平顯著高于T1和T2期患者組，T1和T2期患者組的各血清指標(biāo)水平又顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，顯示各血清指標(biāo)水平升高與胃癌的臨床病理分期有密切的關(guān)系。

3 討 論

早期診斷和早期治療對(duì)控制胃癌進(jìn)展具有重要意義，而傳統(tǒng)胃鏡檢查繁雜而痛苦，單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像技術(shù)(single photon emission computed tomo-graphy， SPECT)較為昂貴。因此血清學(xué)檢查成為目前應(yīng)用最廣泛的手段。血清腫瘤標(biāo)志物主要用于腫瘤的排查和診斷，血清指標(biāo)可以動(dòng)態(tài)反映腫瘤的變化，監(jiān)測患者病情發(fā)展和轉(zhuǎn)移[3]。

CA199是一種糖脂類抗原，以粘蛋白形式存在于血清中[4-5]。相關(guān)研究顯示其與消化道腫瘤關(guān)系密切，是消化道腫瘤早期檢測的重要標(biāo)志物[6]。CEA 也廣泛存在于消化系統(tǒng)腫瘤中，與細(xì)胞分化遷移有密切關(guān)系[7]，但靈敏度不高，是輔助腫瘤檢測標(biāo)志物。

研究顯示，轉(zhuǎn)化生長因子-α(transforming growth factorα，TGFα)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorβ1，TGFβ1)與消化道腫瘤關(guān)系密切。TGF-α是一種可以與表皮生長因子受體結(jié)合的重要配體，其與表皮生長因子受體結(jié)合后，可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，在多種上皮組織中均具有促增殖作用，與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)[8]，具有潛在的致癌或促癌作用[9]。TGFβ1是一種具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和凋亡的生長因子[10]。相關(guān)研究[11]顯示TGFβ1因子具有刺激腫瘤血管生成、浸潤、轉(zhuǎn)移和使腫瘤生長加速，導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移等作用[12]。

近年來，國內(nèi)學(xué)者在檢測胃癌血清CEA、CA199水平的同時(shí)，嘗試聯(lián)合檢測TGFα、TGFβ1血清水平。王洋等[13]研究顯示三項(xiàng)診斷指標(biāo)(CEA+CA199+CA724)聯(lián)合檢測的敏感性、特異性均優(yōu)于任何一單項(xiàng)診斷指標(biāo)。本研究首次聯(lián)合檢測4項(xiàng)血清因子CEA、CA199、TGFα和TGFβ1的水平，探討各血清指標(biāo)CEA、CA199、TGFα和TGFβ1的聯(lián)合檢測在胃癌診治中的臨床價(jià)值。

本研究中通過對(duì)比胃癌患者術(shù)前和術(shù)后各血清指標(biāo)水平可以看出，術(shù)前血清中CEA、CA199、TGFα和TGFβ1的濃度均顯著高于正常對(duì)照組，而胃癌患者術(shù)后血清中CEA、CA199、TGFα和TGFβ1的濃度均顯著降低，56d后，逐漸趨近正常水平，說明該4項(xiàng)血清指標(biāo)與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。此外，本研究還對(duì)比了各血清指標(biāo)單項(xiàng)檢測與聯(lián)合檢測的檢出陽性率，結(jié)果顯示CEA、CA199、TGFα和TGFβ14項(xiàng)血清指標(biāo)聯(lián)合檢測的陽性率顯著高于單項(xiàng)檢測的陽性率(P<0.05)。

本研究中對(duì)比正常對(duì)照組和胃癌組血清TGFα和TGFβ1水平可以看出，在胃癌患者中，TGFα和TGFβ1血清表達(dá)量顯著升高。提示在TGFα和TGFβ1因子的刺激下，胃黏膜上皮腫瘤細(xì)胞過度增殖、分裂，最終發(fā)生惡變。各血清指標(biāo)CEA、CA199、TGFα和TGFβ1的表達(dá)水平在臨床因素如胃癌患者的年齡、性別及腫瘤大小方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明4項(xiàng)血清指標(biāo)與以上各因素?zé)o相關(guān)性。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者TGFβ1含量為(25.36±3.08)。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者TGFβ1含量為(17.62±2.61)。兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中TGFβ1含量為26.38±2.43，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中TGFβ1含量為16.35±1.95，表明TGFβ1血清含量越高,腫瘤轉(zhuǎn)移性越強(qiáng),發(fā)展越快。

研究結(jié)果顯示，不同TNM分期的胃癌患者血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平有所差異，其中T3和T4期胃癌患者組CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平顯著高于T1和T2期患者組，T1和T2期患者組的各血清指標(biāo)水平顯著高于正常對(duì)照組，說明血清CEA、CA199、TGFα和TGFβ1水平與胃癌的發(fā)展程度相關(guān)，病情進(jìn)展越深，血清指標(biāo)水平越高。

綜上所述，CA199、TGFα和TGFβ1的表達(dá)水平可以作為胃癌前病變的檢測指標(biāo)，聯(lián)合檢測CEA、CA199、TGFα和TGFβ1，對(duì)于胃癌的早期診斷，提高胃癌的檢出率，胃癌術(shù)后的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移具有積極意義。

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Combined detection of serum CEA, CA199, TGFα and TGFβ1for diagnosis of gastric cancer

LIJian,QIAOShi-ming,LIQi,SHIFeng,WANGShi-wei

(Dept. of General Surgery, Yangpu Hospital, Tongji University, Shanghai 200090, China)

Objective To investigate serum levels of CEA, CA199, TGFα and TGFβ1in patients with gastric cancer and the diagnostic value of combination of these 4 markers. Methods Serum CEA, CA199, TGFα and TGFβ1levels were measured by electric chemilluminescent assay or enzyme-linked immunosorbent assay in 60 patients with gastric cancer and 20 healthy subjects(control group). The serum markers were measured before and after operation in patients with gastric cancer. The relationship of serum tumor marker levels with gender, age, tumor size, lymph node metastasis, distant metastasis and clinical stages were analyzed. Results Compared with the control group， serum CEA, CA199, TGFα and TGFβ1levels of gastric cancer patients were significantly increased(P<0.05). The average levels of these markers of patients were significantly decreased at d7, d14, d28 and d56 after surgery(P<0.05) and gradually returned to normal levels. The positive rate of combined detection of CEA, CA199, TGFα and TGFβ1(85.0%) was significantly higher than that of single detection(38.3%,46.7%,53.3% and 51.7%), the difference was statistically significant(P<0.05). Serum CEA, CA199, TGFα and TGFβ1levels were not correlated with age, gender and tumor size of patients, while correlated with clinicopathologic staging of gastric cancer; and serum TGFβ1level was correlated with lymph node metastasis and distant metastasis. Conclusion The levels of serum markers are related to gastric cancer development. Combined detection of CEA, CA199, TGFα and TGFβ1might be helpful to early diagnosis of gastric cancer.

gastric cancer; serum; CEA; CA199; TGFα; TGFβ1

10.16118/j.1008-0392.2015.03.005

2014-12-28

上海市衛(wèi)生局項(xiàng)目(2010168)

李 健(1973—),男,副主任醫(yī)師,博士.E-mail: zenecan@163.com

R 735

A

1008-0392(2015)03-0021-06