路敏敏，金世祿，劉寶珍，張建，吳艷芳

(1.濱州醫(yī)學院臨床學院，山東 濱州 256603;2.濱州醫(yī)學院附屬濱州市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，山東 濱州 256610;3.濱州醫(yī)學院附屬濱州市人民醫(yī)院病理科，山東 濱州 256610)

隨著人們對于疾病認識的不斷深入，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與其局部微環(huán)境之間的關系備受關注。肥大細胞(MC)是腫瘤微環(huán)境中浸潤的炎癥細胞之一，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用尚無定論。本研究檢測了MC在胃良性病變、胃癌前病變及胃癌組織中的分布情況，并分析其與臨床病理資料的關系，以期進一步探討MC在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

選取2013年1月至2014年1月在濱州醫(yī)學院濱州市人民醫(yī)院行胃鏡活檢或手術切除的胃組織標本，其中胃癌標本23例，男16例，女7例;年齡30～73歲，平均(61.8±4.2)歲;TNM 分期:Ⅰ期8例，Ⅱ期4例，Ⅲ期8例，Ⅳ期3例，術前均未行放化療。胃癌前病變(慢性萎縮性胃炎伴腸化生)標本30例，男22例，女8例;年齡34～79歲，平均(61.5±3.9)歲。胃良性病變(慢性非萎縮性胃炎)標本12例，男4例，女8例;年齡32～67歲，平均(60.8±3.9)歲。以上病例臨床和病理資料完整，病理診斷均經(jīng)病理科專家復核。3組患者性別構成、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 主要儀器與試劑

LEICA RM2245型組織切片機，OLYMPUS BX50型光學顯微鏡，兔抗人CD117單克隆抗體購于武漢博士德生物工程公司，快速免疫組化MaxVisionTM試劑盒購于福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，Wathin-Starry胃幽門螺旋桿菌(HP)染色液購于廈門邁威生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化染色 所有標本均經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。采用Max-VisionTM快速免疫組織化學染色方法對切片染色。實驗步驟嚴格按照說明書進行:石蠟切片后脫蠟水化、3%H2O2孵育20 min滅活內(nèi)源性過氧化酶、PBS洗滌;采用微波熱修復法進行抗原修復;加入一抗、二抗孵育;DAB顯色、蘇木素復染、脫水、透明、封片。已知陽性片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。經(jīng)免疫組化染色，MC胞漿呈棕色，各組織標本隨機計數(shù)5個高倍鏡視野下MC數(shù)量，并求其平均數(shù)。

1.3.2 HP染色 采用Wathin-Starry銀反應法對切片染色。實驗步驟嚴格按照說明書進行。被著色的胃幽門螺旋桿菌呈棕黑色或黑色，即陽性;反之，為陰性。

1.4 統(tǒng)計學分析

應用軟件SPSS13.0統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，不同組別間MC數(shù)比較采用t檢驗，多組間比較應用單因素方差分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病變組織中MC計數(shù)結(jié)果

經(jīng)免疫組化染色后，鏡下呈棕色的MC主要位于黏膜層及黏膜下層。胃良性病變組、胃癌前病變組和胃癌組的MC 平均數(shù)量分別為32.0 ±9.1、39.0±10.2、20.8 ±11.0，經(jīng)統(tǒng)計分析，3 組MC 表達差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見圖1～3。

圖1 胃癌前病變組織肥大細胞（×200）

圖2 胃癌組織中肥大細胞表達（×200）

圖3 胃良性病變組織中MC分布（×200）

2.2 胃癌前病變組織中MC數(shù)量與臨床病理資料的關系

胃癌前病變組織中，除HP陽性和陰性組織中MC數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義外(P＜0.01)，其余各指標與MC數(shù)量均無相關性(P＞0.05)，見表1。

表1 胃癌前病變組織中MC數(shù)量與臨床病理資料的關系

2.3 胃癌組織中MC數(shù)量與臨床病理資料的關系

胃癌組織中，除HP陽性和陰性組織中MC數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義外(P＜0.01)，其余各指標與MC數(shù)量均無相關性(P＞0.05)，見表2。

3 討論

炎癥浸潤［1］被認為是腫瘤微環(huán)境的基本特征之一，在腫瘤發(fā)生、進展過程中可刺激機體發(fā)生一系列復雜的炎癥、免疫反應，其中MC的募集、浸潤越來越受到研究者的關注［2］。MC作為免疫細胞，不僅在超敏反應中發(fā)揮重要作用，在固有免疫、獲得性免疫中也發(fā)揮重大作用。MC可以釋放分泌多種生物活性物質(zhì)，這些具有各自生物學效應的介質(zhì)不僅能直接引起相應的反應，還能間接誘導鄰近細胞釋放一些其它的介質(zhì)，進一步擴大組織反應，表現(xiàn)為MC功能多樣化。

表2 胃癌組織中MC數(shù)量與臨床病理資料的關系

研究證實，在腫瘤進展過程中，腫瘤組織可以產(chǎn)生重組人干細胞因子(SCF)［3］，而 MC可以表達SCF 的受體 c-Kit，通過 SCF/c-Kit通路［4］作用，趨化遷移至腫瘤局部成為局部微環(huán)境中主要的間質(zhì)細胞。在多種免疫學或非免疫學刺激因子作用下激活MC脫顆粒［5］分泌一系列生物活性介質(zhì)，包括組胺、B-己糖胺酶、5-羥色胺、促炎性脂質(zhì)介質(zhì)、蛋白聚糖、生長因子、細胞因子、趨化因子和蛋白酶等。但關于MC在腫瘤中發(fā)揮的具體作用尚無一致意見。一方面，MC可能通過誘導血管生成［6］，分泌蛋白水解酶破壞腫瘤細胞外基質(zhì)的降解，免疫細胞招募方式等促腫瘤生長［7－8］。另一方面，肥大細胞通過釋放組胺等增加血管壁通透性誘發(fā)免疫細胞、抗體等成分進入腫瘤內(nèi)部;分泌肝素抑制腫瘤細胞的分裂限制腫瘤的生長;還可以分泌白細胞介素(IL)-1，IL-4，IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等細胞因子殺死腫瘤細胞。Amini等［9］探討了乳腺癌中MC的浸潤與預后的關系，結(jié)果顯示MC計數(shù)越多，患者預后越好。Gustaf等［10］人在彌漫性大B細胞淋巴瘤中也得出同樣的結(jié)論，即MC計數(shù)與病人的預后成正比，提示MC發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用。但關于MC在胃癌中發(fā)揮什么作用目前尚無一致定論。Ribatti等［6］發(fā)現(xiàn)MC數(shù)量和血管密度正相關，與患者預后負相關。陳娜等［11］研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中MC顯著低表達人類白細胞DR抗原(HLA-DR)，并可以抑制胃癌細胞分泌TNF-α進而發(fā)揮免疫抑制作用。Liu等［12］研究發(fā)現(xiàn)MC是胃癌組織中IL-17的主要來源，IL-17通過促進靶細胞分泌多種促血管生成因子以及直接作用于血管內(nèi)皮細胞，促進腫瘤血管生成。由此可見，MC與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系十分復雜。本實驗發(fā)現(xiàn)胃癌前病變組織中MC數(shù)量高于胃癌組織及胃良性病變組織，且差異有統(tǒng)計學意義，與國內(nèi)一些研究［13］相似。據(jù)此，筆者推測，在腫瘤發(fā)展初期，尤其是癌前病變時期，MC被募集到達局部，有可能在血管生成、組織重塑中起到關鍵作用，這有利于腫瘤的起始和生長，可能通過抑制微環(huán)境募集成熟的免疫效應細胞，發(fā)揮抗腫瘤作用。而胃癌組織中MC數(shù)量顯著低于其他組織，且MC與腫瘤分化級別、浸潤深度等臨床病理因素無明顯關系，MC有可在癌變的“轉(zhuǎn)折點”前發(fā)揮更重要的作用，隨著腫瘤進一步發(fā)展，則可能與其他免疫因子、免疫細胞一道參與重構胃癌微環(huán)境，但具體作用及機制尚待進一步研究。

有研究證明，MC及其脫顆粒過程［14］參與 HP感染，但其確切機制尚未明了。Bernard等［15］研究發(fā)現(xiàn)，HP通過釋放的VacA作用于MC，后者釋放一系列促炎因子，其中鈣依賴性炎性細胞因子(如TNF-α)誘發(fā)MC內(nèi)鈣離子水平快速改變，導致MC脫顆粒，釋放更多生物活性介質(zhì)，使局部微環(huán)境發(fā)生了改變。IL-1、IL-4、IL-5、IL-7及白三烯等均有較強化學趨化性，能刺激白細胞游走、粘附、遷移至感染部位，其中中性粒細胞的浸潤是HP致病的重要機制之一，其釋放大量細胞酶、溶酶體酶、氧自由基、花生四烯酸代謝產(chǎn)物等可導致胃粘膜受損;MC脫顆粒釋放大量炎性介質(zhì)參與免疫調(diào)節(jié)，MC釋放的組胺可與胃粘膜壁細胞受體結(jié)合，刺激胃酸分泌加重胃粘膜損傷。本研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌前病變、胃癌組織中，HP陽性組織中MC數(shù)量均高于陰性組織，且差異具有統(tǒng)計學意義，提示MC可能參與HP感染過程，或與HP感染誘發(fā)的胃癌及癌前病變關系密切，與上述報道一致。

綜上所述，MC參與重構慢性胃炎、胃癌微環(huán)境，且與HP感染相關，但涉及的分子機制尚待進一步探討。

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