丁文格朱秀高,葉 晶侯 博,蔣文明石勇耀程福生樊學坤陸 軍熊劍鋒唐萬勇
(1武漢回盛生物科技有限公司,湖北武漢430042;2湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心,湖北武漢430042)
2014年豬場五種病毒性疾病的血清抗體檢測
丁文格1朱秀高1,2葉晶2侯博1,2蔣文明1石勇耀1程福生1樊學坤1陸軍1熊劍鋒1唐萬勇1
(1武漢回盛生物科技有限公司,湖北武漢430042;2湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心,湖北武漢430042)
摘要:采用ELISA方法,對186個中小規(guī)模豬場的母豬群、保育豬群和育肥豬群的1 400余份血清檢測豬瘟、偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒2型和口蹄疫O型的抗體水平。結(jié)果表明,75%~87%的豬群抗體水平合格,種豬群抗體合格率高于保育豬群和育肥豬群。偽狂犬病野毒gE抗體陽性率較高,母豬群中g(shù)E抗體陽性樣品數(shù)占檢測樣品總數(shù)的40.93%,而母豬群中陽性場占總場數(shù)的89.74%。
關(guān)鍵詞:豬病毒性疾??;ELISA;抗體檢測
豬瘟、豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒病和口蹄疫等5種病毒病是目前嚴重影響我國養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病。對豬群進行這5種病毒病的抗體監(jiān)測,可以及時掌握豬群免疫抗體水平,了解免疫狀況或感染狀態(tài),豬場可根據(jù)實際抗體監(jiān)測結(jié)果建立科學、合理的免疫程序,這是疾病控制的基礎性工作。湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心豬病檢測所對湖北、湖南、山東、河南、海南等5個省份部分規(guī)?;i場送檢的1 400余份血清進行了豬瘟、偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒病和口蹄疫抗體的檢測,并對檢測結(jié)果匯總和分析,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。
1.1試驗材料
1.1.1送檢豬場及待檢血清樣品
來源于2014年我國湖北、河南、湖南、海南、山東等5個省份存欄規(guī)模為30~500頭母豬的中小型規(guī)模豬場。送檢豬場的免疫背景清楚,大多在送檢前已書面說明。豬只經(jīng)耳靜脈或前腔靜脈采血,血樣樣品自然凝固,包裝后,經(jīng)冷鏈運送至湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心。本文對其中不同批次送檢的共1 400余份血樣進行統(tǒng)計分析。
1.1.2抗體檢測試劑盒
豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒、豬偽狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗體檢測試劑盒、豬瘟抗體檢測ELISA試劑盒、豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測ELISA試劑盒、豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒抗體檢測ELISA試劑盒、豬口蹄疫病毒O型抗體檢測ELISA試劑盒,均為武漢科前動物生物制品有限責任公司生產(chǎn)。
1.2試驗方法
試驗方法均采用ELISA方法,按照ELISA檢測試劑盒的使用說明書嚴格進行操作,并根據(jù)試劑盒使用說明書中的判斷標準進行陽性和陰性的判斷。
1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法
最后,應用基于“三明治”SERS 特性的檢測方案開展臨床血清樣本的檢測.如圖8(d)所示,對不同稀釋比例的血清樣品分別進行SERS光譜檢測,并由劑量響應曲線(圖8(b))計算相應的AFP濃度,結(jié)果列于表1中.同時,與采用CLIA方法的檢測結(jié)果進行對比,可以看出,基于“三明治”結(jié)構(gòu)SERS特性的免疫檢測方案與CLIA的檢測結(jié)果基本一致,并且具有更高的靈敏度.因此,基于PS@Ag免疫探針和Si@Ag免疫基底的SERS光譜檢測具有好的可靠性.
本文以送檢豬場為統(tǒng)計單元進行數(shù)據(jù)匯總和分析,對母豬群、保育豬群和育肥豬群的檢測結(jié)果分別進行統(tǒng)計。豬群抗體合格率按照農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《國家動物疫病強制免疫計劃》中的標準均設定為70%。
表1 豬瘟抗體檢測結(jié)果
2.1豬瘟抗體檢測結(jié)果
豬瘟抗體檢測樣品總數(shù)為1 333份,來自172個豬場(群),其總抗體陽性率在70%以上的豬群數(shù)占84%(表1)。但不同豬群的抗體陽性率有明顯區(qū)別,其中母豬群的陽性率較高,而有30%的豬場保育豬群的豬瘟抗體陽性率在70%以下,16%的豬場育肥豬群的豬瘟抗性陽性率低于70%。結(jié)果表明,部分豬場保育豬群和育肥豬群的豬瘟免疫合格率不高,需要進一步改進豬瘟的免疫工作。
2.2偽狂犬抗體檢測結(jié)果
豬偽狂犬抗體檢測包括gB和gE抗體檢測,分別反映豬場免疫合格率和野毒感染比例,檢測結(jié)果見表2、表3。
2.2.1偽狂犬gB抗體檢測結(jié)果
2.2.2偽狂犬gE抗體檢測結(jié)果
對76個豬場(群)的655份血清的偽狂犬gE抗體檢測發(fā)現(xiàn)(表3),在母豬群中g(shù)E陽性樣品數(shù)占40.93%,而gE抗體呈陽性的豬場比例為89.74%,保育豬群的gE抗體陽性結(jié)果和陽性豬場數(shù)均比母豬群的陽性比例較低,育肥豬群陽性率最低。由于這些豬場在送檢樣品時已經(jīng)說明其最近一年使用的偽狂犬疫苗是gE基因缺失疫苗(Bartha K-61毒株),故檢測出的gE抗體被認為是野毒抗體,結(jié)果說明我國中小規(guī)模豬場母豬群野毒感染情況嚴重,應該采取有力措施進行野毒凈化。
2.3豬繁殖與呼吸障礙綜合征(藍耳病)抗體檢測結(jié)果
藍耳病抗體檢測樣品總數(shù)為1 464份,分別來自186個豬場(群)。其中,抗體陽性率在100%~90%的豬群數(shù)占73.12%,其中母豬群最高,為90.53%,其次為育肥豬群,最后為保育豬群。而保育豬群抗性陽性率低于70%的豬場數(shù)明顯高于其他豬群,結(jié)果詳見表4。
表2 豬偽狂犬gB抗體檢測結(jié)果
表3 豬偽狂犬gE抗體檢測結(jié)果
2.4豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測結(jié)果
豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測樣品總數(shù)為877份,分別來自116個豬場(群),其總抗體陽性率在100%~90%的豬群數(shù)占76.72%,其中母豬群為88.14%,其次為保育豬群,最后為育肥豬群。而大約有20%的保育豬群的圓環(huán)病毒2型抗性陽性率低于70%(表5),說明仔豬的免疫有待進一步增強。此外,有部分中小規(guī)模豬場未曾免疫豬圓環(huán)病毒疫苗,或未對商品豬進行免疫,因此對圓環(huán)病毒疫苗抗體陽性需要結(jié)合實際免疫情況進行分析,如果未曾免疫而檢測到圓環(huán)病毒抗體,則說明豬群中存在圓環(huán)病毒的感染。
表4 豬繁殖與呼吸障礙綜合征抗體檢測結(jié)果
表5 豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測結(jié)果
2.5豬口蹄疫O型抗體檢測結(jié)果
豬口蹄疫O型抗體檢測樣品總數(shù)為420份,分別來自57個豬場(群)。其中,抗體陽性率在100%~90%的豬群數(shù)占70.18%,其中母豬群為100%,其次為保育豬群,為64.29%,最后為育肥豬群,為47.83%(表6)。而育肥豬群抗性陽性率低于70%的豬場數(shù)明顯偏多,這與口蹄疫的實際發(fā)生情況較為吻合。目前豬群中發(fā)生的口蹄疫在大多數(shù)情況下是從育肥豬群開始而逐步蔓延至整個豬場的。
表6 豬口蹄疫病毒O型抗體檢測結(jié)果
⑴本文利用ELISA的方法,對2014年部分中型規(guī)?;i場的5種重要病毒性疾病的血清抗體進行了檢測,并以豬場(群)為統(tǒng)計單元進行匯總分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),豬瘟、偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒病和口蹄疫的免疫合格率范圍在75%~87%之間,相應則有13%~25%的豬場出現(xiàn)免疫失敗。這可能與近年來豬群免疫抑制性疾病增多、應激或霉菌毒素等其他環(huán)境因素的影響相關(guān),另外也與毒力變異株的出現(xiàn)、疫苗質(zhì)量不穩(wěn)定、免疫程序不合理、疫苗保存不當?shù)瓤陀^因素有關(guān)。因此需要獸醫(yī)工作者在臨床工作中根據(jù)檢測結(jié)果以及豬場的實際情況采取適當?shù)拇胧?,以提高免疫合格率?/p>
⑵對不同豬群的免疫合格率比較可見,保育豬群、生長育肥豬群的免疫合格率普遍低于母豬群,這一方面可能和母豬經(jīng)反復加強免疫、免疫力較為堅強有關(guān);另一方面,也表明仔豬的免疫程序、免疫操作可能存在不合理因素,如母源抗體干擾、免疫抑制性因素在豬群存在影響免疫效果等,這需要進一步摸索和調(diào)整仔豬的免疫程序。
⑶對偽狂犬gE抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn),在中小規(guī)模豬場中,大部分豬場gE抗體陽性,其中對母豬群的血清樣品檢測發(fā)現(xiàn)89.74%的豬場存在gE抗體陽性,部分豬場送檢的母豬血清樣品100%呈現(xiàn)gE抗體陽性,說明我國豬偽狂犬野毒感染仍普遍存在,這對我國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展具有極大威脅。因此在中小規(guī)模豬場,應該充分重視豬偽狂犬野毒感染的嚴重性和普遍性,應采取選用優(yōu)質(zhì)的偽狂犬活疫苗、制定合理的免疫程序、加強生物安全等措施進行綜合控制。同時,要加強豬偽狂犬野毒gE抗體陽性率的檢測,每年定期檢測兩次,及時了解本場野毒感染情況,逐步淘汰帶毒豬只,建立健康種群。
⑷對于中小規(guī)模豬場來講,亟需提高抗體檢測的意識,切實加強豬群采樣、送檢和結(jié)果分析,及時發(fā)現(xiàn)問題,及早進行查漏補缺,才能真正做到早發(fā)現(xiàn)、早治療,從而消除疾病風險,提升養(yǎng)豬的經(jīng)濟效益。
Gloria Solano Elida Bautista Thomas Molitor Joaquim Segalés Carlos Pijoan
中圖分類號:S858.28,S854.4+3
文獻標識碼:B
文章編號:1673-4645(2015)08-0076-04
收稿日期:2015-06-17