陽海紅，呂小元

（1.邵陽市中心醫(yī)院，湖南422000；2.邵陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，湖南邵陽422000）

抗環(huán)瓜氨酸肽抗體不同檢測方法比較分析

陽海紅1，呂小元2

（1.邵陽市中心醫(yī)院，湖南422000；2.邵陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，湖南邵陽422000）

目的比較分析電化學(xué)發(fā)光免疫（ECLIA）法與酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體的相關(guān)性，并探討其臨床診斷效率和實用性。方法選擇湖南省邵陽市中心醫(yī)院2013年1月至2014年12月收治的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者210例作為觀察組，另選擇對照組178例，其中風(fēng)濕性疾病患者71例，健康者107例。采用ECLIA法和ELISA法檢測研究對象血清中抗CCP抗體，觀察2種方法檢測抗CCP抗體的診斷靈敏度和特異度。結(jié)果ECLIA法檢測抗CCP抗體的靈敏度為71.43%（150/210），特異度為98.31%（175/178）；ELISA法檢測抗CCP抗體的靈敏度為69.52%（146/210），特異度為96.63%（172/178）。2種方法測定388份血清標(biāo)本，陽性147例，陰性230例。二者總體符合率為97.16%（377/388），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=35.538 9，P＜0.05）。結(jié)論ECLIA法檢測抗CCP抗體對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷的靈敏度、特異度與ELISA法具有較好的一致性，可在臨床檢驗中推廣應(yīng)用。

電化學(xué)；免疫測定；自身抗體/診斷應(yīng)用；酶聯(lián)免疫吸附測定；關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕/診斷

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種異質(zhì)性、系統(tǒng)性自身免疫性疾病，可呈慢性侵蝕性進(jìn)展，易導(dǎo)致關(guān)節(jié)受損、功能障礙及殘疾[1]。目前，尚缺乏診斷該病的特異性方法，漏、誤診率較高。有研究顯示，抗環(huán)瓜氨酸肽（cyclic citrullinated peptide，CCP）抗體對RA的早期診斷具有重要臨床意義，其已成為RA的一項具有高度特異性診斷指標(biāo)[2-3]。臨床檢測抗CCP抗體的試劑及方法有很多種，其中酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked im munosorbent assay，ELISA）法具有不易實現(xiàn)自動化、檢測復(fù)雜、檢測時間長、易受人為影響等缺點。另外一種新的測定方法——電化學(xué)發(fā)光免疫（eletrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）法具有敏感度高、測定范圍寬、快速、穩(wěn)定性高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點[4]，且采用自動化檢測，已成為國外一些實驗室檢測抗CCP抗體的重要方法。本研究同時采用ELISA法與ECLIA法對388例血清樣本進(jìn)行了抗CCP抗體檢測，旨在比較研究2種檢測方法的相關(guān)性，并探討其臨床診斷效率和實用性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 選擇2013年1月至2014年12月湖南省邵陽市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診和住院RA患者 210例作為觀察組，其中男80例，女130例；年齡47～65歲，平均（56±13）歲，均按照1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的關(guān)于RA分類標(biāo)準(zhǔn)確診[5]。另選擇對照組178例，其中風(fēng)濕性疾病患者71例，健康者107例。71例風(fēng)濕性疾病患者中強直性脊柱炎17例，骨關(guān)節(jié)炎13例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡11例，干燥綜合征10例，痛風(fēng)10例，系統(tǒng)性硬化癥6例，多發(fā)性肌炎或皮肌炎4例；男26例，女45例；年齡41～63歲，平均（51±15）歲；107例健康者中男47例，女60例；年齡44～65歲，平均（50±11）歲。

1.1.2 儀器與試劑 ELISA法檢測采用上海KHB ST-360酶標(biāo)儀，試劑盒由歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷公司提供；ECLIA法檢測采用瑞士羅氏公司的Cobas6000全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑由羅氏診斷公司提供。所有檢測均嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 用真空采血管采集所有研究對象清晨空腹靜脈血4 mL，并于30 min內(nèi)以3 000 r/min離心10 min分離血清，然后置入-20℃冰箱保存，1次溶解后測定。

1.2.2 結(jié)果判定 判定標(biāo)準(zhǔn)以試劑盒說明書為準(zhǔn)，ECLIA法以CCP＞17 U/mL判定為陽性；ELISA法以CCP≥18 U/mL判定為陽性。計算2種檢測方法的靈敏度、特異度。靈敏度=觀察組陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%；特異度=對照組陰性例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2種方法檢測抗CCP抗體的靈敏度和特異度比較 ECLIA法檢測抗CCP抗體的靈敏度為71.43%（150/210），特異度為98.31%（175/178）；ELISA法檢測抗CCP抗體的靈敏度為69.52%（146/210），特異度為96.63%（172/178），見表1。

2.2 2種方法檢測抗CCP抗體的一致性 388份血清標(biāo)本中2種方法檢測均為陽性147例，均為陰性230例。2種方法所得結(jié)果的總體符合率為97.16%（377/388），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=35.538 9，P＜0.05），見表2。

表1 2種方法檢測抗CCP抗體的靈敏度和特異度比較（n）

表2 2種方法檢測抗CCP抗體的一致性

3 討 論

RA是一種具有對稱性、侵蝕性的多關(guān)節(jié)炎癥性疾病，常可累及手足小關(guān)節(jié)，可出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛、腫脹和功能障礙等癥狀，其病情往往遷延不愈，嚴(yán)重危害人們身體健康，其患病率在自身免疫性結(jié)締組織病中居首位，患者如果不能及時得到診治，可能發(fā)展為關(guān)節(jié)僵直、畸形，甚至致殘，嚴(yán)重影響患者活動能力[6]。長期以來，在診斷RA方面以類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）作為其血清學(xué)指標(biāo)，但據(jù)文獻(xiàn)報道，在很多其他結(jié)締組織病、某些內(nèi)分泌疾病及慢性感染疾病患者中均可檢測到RF，因此，其特異性較低。抗CCP抗體于2000年被首次報道，其是由RA患者滑膜產(chǎn)生的一種免疫球蛋白G類抗體，國內(nèi)外學(xué)者對其檢測方法和臨床應(yīng)用進(jìn)行了大量研究，結(jié)果證實，抗CCP抗體對RA的早期診斷具有較高的靈敏度和特異度。

臨床研究顯示，應(yīng)用抗CCP抗體診斷RA的靈敏度能達(dá)到50.00%～70.00%，特異度可達(dá)到88.00%～98.00%。本研究結(jié)果顯示，ECLIA法檢測抗CCP抗體的敏感度為71.43%，特異度為98.31%，與上述研究結(jié)果基本一致。因此，抗CCP抗體可作為診斷RA的特異性指標(biāo)，尤其對RF檢測結(jié)果陰性及臨床癥狀不典型的RA患者，具有較高的診斷價值[7]。

本研究采用被廣泛應(yīng)用于臨床檢測的ELISA法歐蒙試劑盒作為參比試劑，與羅氏診斷公司提供的ECLIA法試劑進(jìn)行一致性分析，2種檢測方法所得結(jié)果總體符合率為97.16%，顯示出ECLIA法與ELISA法具有高度一致性的臨床診斷價值，與國內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報道基本一致[8]。本研究采用2種檢測方法檢測血清樣本時有11例不一致的結(jié)果，經(jīng)對比臨床資料分別分析該11例檢測結(jié)果，ECLIA法檢測結(jié)果與臨床診斷相符。因此，推斷ECLIA法檢測抗CCP抗體與ELISA法比較，具有更高的靈敏度。為此，本研究又進(jìn)一步對2種方法的靈敏度和特異度進(jìn)行了對比，ECLIA法檢測抗CCP抗體的靈敏度為71.43%，高于ELISA法（69.52%），ECLIA法檢測抗CCP抗體的特異度為98.31%，也高于ELISA法（96.63%）。

雖然ELISA法檢測抗CCP抗體技術(shù)已非常成熟，據(jù)悉在我國已有10余年的應(yīng)用時間，但其缺點為手工操作步驟繁瑣、耗用時間長，檢測1例標(biāo)本可能需2～3h。而羅氏診斷公司提供的ECLIA法自動化程度高、靈敏度高、特異度強、質(zhì)量易于控制，而且該法操作簡便，標(biāo)本離心后即可直接進(jìn)行檢測，可減少人為因素的干擾，也可節(jié)約人力成本，提高工作效率，且同一批次不必每天定標(biāo)，因此，結(jié)果穩(wěn)定、可靠。有研究發(fā)現(xiàn)，檢測抗CCP抗體耗時較短，檢驗采用ELISA法檢測的同樣1份標(biāo)本，只需20～30 min即可得到檢測結(jié)果，而且該法可隨到隨做，方便患者及時進(jìn)行臨床檢測并得到結(jié)果，適應(yīng)了臨床檢驗的即時之需，為RA的早期診斷提供了良好的技術(shù)平臺[9-10]。

綜上所述，抗CCP抗體在RA的新診斷標(biāo)準(zhǔn)中體現(xiàn)出越來越重要的作用，本研究初步探討了ECLIA法和ELISA法檢測抗CCP抗體的一致性，同時發(fā)現(xiàn)，ECLIA法具有靈活性高、檢測快速、試劑穩(wěn)定、便于質(zhì)量控制、操作簡便等優(yōu)點，為RA的早期免疫學(xué)診斷提供了有效方法，具有較高的臨床應(yīng)用價值，值得推廣應(yīng)用。

[1]康霞，李欣，楊春莉，等.ECLIA、CMIA、ELISA3種方法測定血清抗CCP抗體在RA診斷中的應(yīng)用[J].重慶醫(yī)學(xué)，2014，43（11）：1290-1292.

[2]陶蕾，薛建峰，翟乾勛，等.抗CCP抗體檢測在診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎方面的價值分析[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2014，12（20）：7-8.

[3]白伊娜，宋寧，李萍，等.電化學(xué)發(fā)光免疫測定與酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體比較[J].中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志，2012，6（4）：241-246.

[4]王艷嬌，李琳蕓，董莉，等.不同方法檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中抗環(huán)瓜氨酸肽IgG抗體的比較研究[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，26（5）：84-86.

[5]陽幼榮，吳雪瓊，張俊仙，等.化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清抗結(jié)核抗體的比較研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9（13）：88.

[6]戚潤鵬，孔春玲，劉旭華.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的臨床應(yīng)用探討[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2014，21（34）：99-101.

[7]吳意，張艷如.抗CCP抗體和RF對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷價值的比較[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2010，20（17）：2680-2684.

[8]徐雪亮，繆怡，張琦.電化學(xué)發(fā)光免疫測定法檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的方法比較[J].診斷學(xué)理論與實踐，2011，10（3）：260-262.

[9]李珍萍，郭慶昕，林宜昭.電化學(xué)發(fā)光法檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的臨床應(yīng)用評價[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（21）：2882-2883.

[10]梁鵬，張勁豐，蘇榮，等.電化學(xué)發(fā)光法檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的診斷效能評價[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（18）：2535-2536.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.17.031

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1009-5519（2015）17-2646-02

2015-03-31）

陽海紅（1976-），男，湖南邵陽人，副主任檢驗師，主要從事免疫學(xué)及分子生物學(xué)檢驗工作；E-mail：yanghaihongsy@163.com。