南一，馬麗杰，袁玲

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué) 回醫(yī)藥現(xiàn)代化省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，寧夏 銀川 750004；3.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；4.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750004；5.寧夏回醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心，寧夏 銀川 750004)

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回回甘松飲含藥血清對(duì)高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞外基質(zhì)堆積的影響

南一1,2，馬麗杰1，袁玲2,3,4,5Δ

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué) 回醫(yī)藥現(xiàn)代化省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，寧夏 銀川 750004；3.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；4.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750004；5.寧夏回醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心，寧夏 銀川 750004)

目的 探討回回甘松飲(Hui-hui Gan-song Yin，HGY)含藥血清對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞(mesangial cells，MCs)外基質(zhì)堆積的影響。方法 健康雄性SD大鼠40只隨機(jī)分為正常對(duì)照組(蒸餾水)、格列喹酮組(10 mg/kg)、HGY(5、10 g/kg)組，每組各10只，每天給藥2次，連續(xù)3 d后制備含藥血清用于體外培養(yǎng)大鼠MCs，分為正常對(duì)照組(10%正常對(duì)照組大鼠血清)、高糖組(30 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清)、格列喹酮組(30 mmol/L葡萄糖+10%格列喹酮組大鼠血清)、HGY高劑量組(30 mmol/L葡萄糖+10%HCY高劑量組大鼠血清)、HGY低劑量組(30 mmol/L葡萄糖+10%HCY低劑量組大鼠血清)。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，采用Western blot方法檢測(cè)纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)、Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)及Ⅳ型膠原蛋白(ColⅣ)含量。結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，高糖組FN、ColⅠ及ColⅣ表達(dá)量上調(diào)(P<0.01)；HGY含藥血清可降低在高糖誘導(dǎo)的MCs中FN、ColⅠ及ColⅣ表達(dá)量(P<0.05)。結(jié)論 HGY含藥血清可降低MCs在高糖環(huán)境下的FN、ColⅠ及ColⅣ蛋白表達(dá)水平，從而減少了ECM堆積，保護(hù)腎小球，延緩糖尿病腎病進(jìn)程。

回回甘松飲；腎小球系膜細(xì)胞；細(xì)胞外基質(zhì)堆積；纖維連接蛋白；ColⅠ；ColⅣ

腎臟由固有細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成，細(xì)胞外基質(zhì)是支撐腎臟的基礎(chǔ)，固有細(xì)胞是腎臟的功能構(gòu)成。腎臟固有細(xì)胞包括：內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和間質(zhì)成纖維細(xì)胞，而腎小球系膜細(xì)胞(mesangial cells, MCs)能合成和分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，對(duì)腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)起到支撐作用，在腎小球中反應(yīng)最活躍。糖尿病腎病(diabetic kidney disease，DKD)最早出現(xiàn)且最明顯的變化就是MCs增生，細(xì)胞外基質(zhì)增多，腎小球增大，從而出現(xiàn)腎小球高濾過(guò)現(xiàn)象[1]。

“回回甘松飲”(Hui-hui Gan-song Yin，HGY)是在回族醫(yī)學(xué)典籍《回回藥方》原方“甘松丸子”基礎(chǔ)上，基于“四性學(xué)說(shuō)”[2]理論，根據(jù)益稟補(bǔ)腎、化痰通絡(luò)的治則，選用甘松、木香、茴香、丁香等13味藥物組成的特色“香藥”[3]方劑。前期研究已證實(shí)[4-6]：HGY對(duì)DKD大鼠的腎臟具有保護(hù)作用，并可使MCs細(xì)胞周期在高糖環(huán)境下發(fā)生G1/S期阻滯，抑制MCs細(xì)胞增殖。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)血清藥理學(xué)的方法，研究HGY含藥血清對(duì)高糖誘導(dǎo)的MCs細(xì)胞外基質(zhì)堆積的影響，探討HGY在治療DKD中的藥理作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物：健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,6～7周齡，體質(zhì)量180～200 g， SPF級(jí)，購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，許可證號(hào)：SCXK(京)2011-0012。實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由攝食和飲水，嚴(yán)格遵循《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)條例》相關(guān)規(guī)定。

1.1.2 細(xì)胞株：大鼠腎小球系膜細(xì)胞株(HBZY-1)購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心，資源編號(hào)：3111C0001CCC000375。

1.1.3 藥物與試劑：HGY(專(zhuān)利號(hào)：ZL201310205739.1)由甘松10 g、枸杞15 g、茴香12 g、木香9 g、丁香6 g、藿香3 g、松蕈5 g、菟絲子10 g、大黃5 g、蘆薈8 g、人參15 g、肉蓯蓉10 g、紅花5 g組成。方中各藥材經(jīng)寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院鑒定并按照原方配比，70%乙醇提取，石油醚萃取，大孔樹(shù)脂富集分離、濃縮，用蒸餾水配制成實(shí)驗(yàn)所需生藥濃度為0.5、1 g/mL的藥液。格列喹酮(gliquidone)，北京萬(wàn)輝雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)：1120536，臨用前用蒸餾水配制成濃度為1 mg/mL藥物溶液。MEM-EBSS培養(yǎng)基(美國(guó)，Gibco公司)，胎牛血清(美國(guó)，Gibco公司)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶(板)(美國(guó)，Corning公司)，纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)一抗(美國(guó)，Abcam公司)，Ⅰ型及Ⅳ型膠原蛋白(ColⅠ、ColⅣ)一抗(美國(guó)，Abcam公司)，山羊抗兔IgG(H+L)二抗(上海基因公司)。

1.1.4 儀器：SW-CJ-1FD型超凈工作臺(tái)(中國(guó)蘇潔凈化公司)，5804R型超速低溫冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)，電泳儀(北京六一儀器廠)，電泳槽(北京君意東方電泳設(shè)備有限公司)XP205分析天平(瑞士Mettler Toledo)，CKX41型倒置相差顯微鏡(日本OLYMPUS公司)，Allgre 21R高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Beckman公司)，F(xiàn)lexStation-3多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Molecular Devices公司)。

1.2 方法

1.2.1 含藥血清的制備[7]：健康雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組，即正常對(duì)照組、格列喹酮組(10 mg/kg)、HGY(5、10 g/kg)組各10只。HGY組和格列喹酮組大鼠每天分別按照相應(yīng)劑量灌胃給藥，正常對(duì)照組灌胃給予等體積的蒸餾水，每天給藥2次，連續(xù)3 d，于末次給藥1 h后股動(dòng)脈取血，離心，取血清，56 ℃水浴30 min滅活補(bǔ)體，過(guò)濾除菌后，分裝凍存于-20 ℃。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)：采用含10%胎牛血清的MEM-EBSS培養(yǎng)基，于37 ℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組：選取第3～8代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，共分為5組：①正常對(duì)照組(NG)：給予10%正常對(duì)照組大鼠血清；②高糖組(HG)：給予30 mmol/L葡萄糖+10%正常對(duì)照組大鼠血清；③格列喹酮組(HG+Gli)：給予30 mmol/L葡萄糖+10%格列喹酮(10 mg/kg)組大鼠血清；④HGY-H組(HG+HGY)：給予30 mmol/L葡萄糖+10%HGY(10 g/kg)組大鼠血清；⑤HGY-L組：30 mmol/L葡萄糖+10%HGY(5 g/kg)組大鼠血清。

1.2.4 藥物干預(yù)：待生長(zhǎng)至70%～80%細(xì)胞融合時(shí)，采用0.05%胰酶消化，制成細(xì)胞懸液，并常規(guī)進(jìn)行細(xì)胞傳代，于37 ℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)24 h后，吸取上清液，加入無(wú)胎牛血清的MEM-EBSS培養(yǎng)液，37 ℃、5%C02恒溫培養(yǎng)24 h，使細(xì)胞同步于G0期；同步化后，將細(xì)胞分為上述5組，每組設(shè)置3孔重復(fù)，為減少實(shí)驗(yàn)誤差,將制備的大鼠含藥血清按組別富集合并，按照上述分組方法進(jìn)行干預(yù)，干預(yù)過(guò)程中均采用只含有大鼠血清的MEM-EBSS培養(yǎng)基培養(yǎng)，在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)取樣本進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.5 Western blot法檢測(cè)FN、ColⅠ及ColⅣ蛋白表達(dá)的影響：提取各組細(xì)胞總蛋白，通過(guò)BCA法檢測(cè)總蛋白含量后，以RIPA調(diào)整蛋白濃度，加入5×樣品緩沖液后樣品蛋白終濃度為2 mg/mL。煮沸變性5 min，進(jìn)行10% SDS-PAGE膠電泳分離蛋白樣本，細(xì)胞樣品的上樣量為10 μg/孔，電泳(濃縮膠恒壓90 V，約20 min；分離膠恒壓160 V，約80 min)，后經(jīng)轉(zhuǎn)膜儀(恒流300 mA，2.5 h)轉(zhuǎn)膜完成后麗春紅染色試劑對(duì)膜進(jìn)行染色，將膜在室溫中封閉30 min。用3% BSA-TBST稀釋FN(1:4000)、ColⅠ(1:5000)及ColⅣ(1:1000)一抗，于4 ℃孵育過(guò)夜，TBST洗膜5次，每次3 min。用5%脫脂奶粉-TBST稀釋HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG(H+L)二抗(1:20000)，室溫反應(yīng)40 min。TBST洗膜6次，每次3 min。ECL加到膜上后反應(yīng)3～5 min，膠片曝光10s～5 min(曝光時(shí)間隨光強(qiáng)度調(diào)整)，顯影2 min，定影，進(jìn)行膠片掃描。采用Bio-Rad圖像分析系統(tǒng)掃描目的條帶印跡，然后用Quantity One軟件對(duì)內(nèi)參條帶的光密度值進(jìn)行分析，目的蛋白表達(dá)量的改變用相對(duì)光密度進(jìn)行檢測(cè)，最后采用目的條帶光密度值與內(nèi)參條帶光密度值的比值來(lái)計(jì)算蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 Western blot檢測(cè)HGY對(duì)高糖誘導(dǎo)的MCs中FN蛋白表達(dá)的影響 Western blot檢測(cè)結(jié)果表明，5組間MCs中FN蛋白表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.654，P<0.01)。與正常對(duì)照組(1.000±0.224)MCs比較，高糖組(2.506±0.357)MCs中FN蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)；與高糖組比較，給予格列喹酮(1.959±0.362)含藥血清干預(yù)后，MCs中FN蛋白的表達(dá)水平雖有所降低，但未見(jiàn)顯著性差異；給予HGY高(1.585±0.251)、低劑量(1.599±0.478)含藥血清干預(yù)后，F(xiàn)N蛋白的表達(dá)水平下降明顯(P<0.01)。由此可知，HGY含藥血清可以下調(diào)高糖誘導(dǎo)的MCs中FN蛋白表達(dá)水平，且HGY優(yōu)于格列喹酮含藥血清的作用。見(jiàn)圖1。

圖1 HGY對(duì)高糖誘導(dǎo)的MCs中FN蛋白表達(dá)的影響**P<0.01，與NG組比較；##P<0.01，與HG組比較Fig.1 FN protein expressions in high glucose- induced MCs(±s，n=3)**P<0.01，compared with NG group；##P<0.01，compared with HG group

2.2 Western blot檢測(cè)HGY對(duì)高糖誘導(dǎo)的MCs中ColⅠ蛋白表達(dá)的影響 Western blot檢測(cè)結(jié)果表明，5組間MCs中ColⅠ蛋白表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.774，P<0.01)。與正常對(duì)照組(1.000±0.089)MCs比較，高糖組(2.141±0.302)MCs中ColⅠ蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)；與高糖組比較，給予格列喹酮(1.650±0.225)含藥血清干預(yù)后，MCs中ColⅠ蛋白的表達(dá)顯著降低(P<0.01)；給予HGY高(1.683±0.237)、低劑量(1.724±0.225)含藥血清干預(yù)后，ColⅠ蛋白的表達(dá)亦顯著降低(P<0.01)。由此可知，HGY含藥血清可以下調(diào)高糖誘導(dǎo)的MCs中ColⅠ蛋白表達(dá)水平，且HGY與格列喹酮含藥血清的作用相近。見(jiàn)圖2。

圖2 HGY對(duì)高糖誘導(dǎo)的MCs中CollagenⅠ蛋白表達(dá)的影響**P<0.01，與NG組比較；##P<0.01，與HG組比較Fig.2 ColⅠ protein expressions in high glucose-induced MCs(±s，n=3)**P<0.01，compared with NG group; ##P<0.01，compared with HG group

2.3 Western blot檢測(cè)HGY對(duì)高糖誘導(dǎo)的MCs中ColⅣ蛋白表達(dá)的影響 Western blot檢測(cè)結(jié)果表明，5組間MCs中ColⅣ蛋白表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=16.128，P<0.01)。與正常對(duì)照組(0.999±0.209)MCs比較，高糖組(4.035±0.644)MCs中ColⅣ蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)；與高糖組比較，給予格列喹酮(2.204±0.463)含藥血清干預(yù)后，MCs中ColⅣ蛋白的表達(dá)顯著降低(P<0.01)；給予HGY高(2.322±0.478)、低劑量(2.790±0.466)含藥血清干預(yù)后，ColⅣ蛋白的表達(dá)亦顯著降低(P<0.01)。由此可知，HGY含藥血清可以下調(diào)高糖誘導(dǎo)的MCs中ColⅣ蛋白表達(dá)水平，且HGY與格列喹酮含藥血清的作用相近。見(jiàn)圖3。

圖3 HGY對(duì)高糖誘導(dǎo)的MCs中CollagenⅣ蛋白表達(dá)的影響**P<0.01，與NG組比較；##P<0.01，與HG組比較Fig.3 ColⅣ protein expressions in high glucose-induced MCs(±s，n=3)**P<0.01,compared with NG group;##P<0.01,compared with HG group

3 討論

糖尿病腎病是指由糖尿病(diabetic mellitus，DM)引起的慢性腎臟疾病[8]，DKD是DM的主要(重要)并發(fā)癥之一，高血糖與DKD的發(fā)生、發(fā)展有著重要的聯(lián)系,很多研究，如著名的“糖尿病干預(yù)和并發(fā)癥研究”(epidemiology of diabetes interventions and complications，EDIC)、“糖尿病控制與并發(fā)癥實(shí)驗(yàn)”(diabetes control and complications trial，DCCT)都證明了合理有效地控制高血糖的發(fā)生可以降低DKD并發(fā)癥的危險(xiǎn)系數(shù)[9-10]。DKD臨床主要表現(xiàn)為糖尿病性腎小球硬化癥，而腎小球硬化主要是由于腎小球細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)堆積所造成。因此，阻止或延緩DKD發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程最有效的途徑就是減少ECM堆積[11]。

MCs是研究腎臟疾病發(fā)生發(fā)展機(jī)制的常用細(xì)胞模型[12-13]，在DKD的病理改變中起到舉足輕重的作用。MCs增殖是DKD發(fā)生、發(fā)展的病理基礎(chǔ)，該細(xì)胞外的基質(zhì)堆積嚴(yán)重影響著腎小球硬化的進(jìn)程。高糖環(huán)境可以刺激MCs增殖，引起細(xì)胞外基質(zhì)堆積。通過(guò)體外培養(yǎng)MCs進(jìn)行研究，不僅可以探索DKD細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)，還可為探討相關(guān)的藥理作用機(jī)制提供方便。因此，深入研究HGY對(duì)高糖條件下MCs的ECM堆積發(fā)生的藥理作用機(jī)制，對(duì)防治DKD具有重要意義。

格列喹酮是WHO推薦的腎功能損害DM患者的首選藥之一。格列喹酮的體內(nèi)代謝產(chǎn)物95%不經(jīng)腎臟排泄，是具有良好的保護(hù)腎臟的口服降糖藥。其在降低血糖的同時(shí)，還可以減少腎臟組織中炎癥反應(yīng)的發(fā)生，減少尿蛋白生成，并能夠改善腎小球基底膜及足細(xì)胞的損傷程度[14]，其與HGY治療DKD的藥理作用基本一致，故在本研究中選用格列喹酮作為陽(yáng)性對(duì)照藥。

在生理狀態(tài)下,腎組織借助降解酶系統(tǒng)而維持ECM降解的動(dòng)態(tài)平衡；在病理狀態(tài)下,一方面，ECM降解酶系統(tǒng)失衡以及相關(guān)調(diào)控機(jī)制紊亂,可導(dǎo)致腎小球ECM降解減少,形成腎小球硬化或腎纖維化；另一方面，即ECM的組成成分合成增加所致[15]。本實(shí)驗(yàn)研究主要從ECM合成增加這一角度考察細(xì)胞外基質(zhì)堆積的機(jī)制。

細(xì)胞外基質(zhì)蛋白是ECM的主要成分,主要包括纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)和膠原蛋白(collagen，Col)等。FN是一種糖蛋白，由腎小球固有細(xì)胞分泌，是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成成分。正常情況下，F(xiàn)N以非可溶性形式，存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，與整合素結(jié)合影響細(xì)胞外基質(zhì)的生理功能。DKD發(fā)生后，F(xiàn)N過(guò)度積聚在系膜區(qū)，可以加速腎小球硬化，被認(rèn)為是加速腎纖維化及硬化的重要因素。由于在DKD的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中，F(xiàn)N含量的升高出現(xiàn)得早而明顯，所以FN被認(rèn)為是反映腎小球病變的客觀指標(biāo)[16]。膠原蛋白是一種纖維狀的蛋白質(zhì)，主要存在于細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜中，其中Ⅰ型膠原屬于纖維形成膠原蛋白，Ⅳ型膠原蛋白為基底膜膠原蛋白，分布于腎小球和腎小管基底膜及系膜基質(zhì)中。前期研究發(fā)現(xiàn)[6]：在高糖誘導(dǎo)條件下，MCs中Ⅰ型及Ⅳ型膠原蛋白的mRNA水平明顯升高，此效應(yīng)可能是多元醇通路活性增強(qiáng)、蛋白激酶C激活的結(jié)果。在高血糖條件下，葡萄糖可不依賴(lài)胰島素調(diào)節(jié)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞內(nèi)葡萄糖濃度增高，從而激活醛糖還原酶，促使葡萄糖轉(zhuǎn)變?yōu)樯嚼娲?，在山梨醇氧化成果糖過(guò)程中，激活蛋白激酶C，而蛋白激酶C可使膠原蛋白合成增加[17]。所以，早期檢測(cè)FN及Col能較好地判斷ECM堆積情況，并能作為衡量腎小球硬化的重要指標(biāo)。

在體外實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)：在高糖誘導(dǎo)的條件下，MCs中纖維連接蛋白及膠原蛋白的含量均增加(P<0.01)；給藥干預(yù)后，HGY含藥血清能明顯降低高糖誘導(dǎo)條件下的MCs中FN、ColⅠ及ColⅣ的蛋白表達(dá)量(P<0.01)，且在調(diào)節(jié)FN、ColⅠ及ColⅣ的蛋白表達(dá)水平上，基本與格列喹酮含藥血清的作用相當(dāng)，這可能是其抑制細(xì)胞外基質(zhì)堆積，保護(hù)腎小球的重要機(jī)制之一。ECM堆積可以是合成增加的結(jié)果,亦可以是降解減少的結(jié)果。HGY延緩DKD進(jìn)程，保護(hù)腎臟的藥理作用機(jī)制可能是抑制ECM的合成增加，亦有可能是促進(jìn)ECM的降解，本研究的不足之處在于未檢測(cè)高糖誘導(dǎo)條件下MCs中ECM降解酶系統(tǒng)的水平，當(dāng)然這還需要進(jìn)一步研究去證實(shí)。

綜上所述，HGY可通過(guò)調(diào)節(jié)FN、ColⅠ及ColⅣ的蛋白表達(dá)水平，減少ECM堆積，從而減輕DKD腎小球硬化的程度，延緩DKD的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，保護(hù)腎臟功能。

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(編校：王儼儼)

Effects of Hui-hui Gan-song Yin on accumulation of extracellular matrix of glomerular mesangial cells induced by high glucose

NAN Yi1,2, MA LI-jie1, YUAN Ling2,3,4,5Δ

(1. School of Traditional Chinese Medicine, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China; 2. Key Laboratory ofHui Medicine Modernization, Ministry of Education, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China; 3. College of Pharmacy, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China; 4. Ningxia Engineering and Technology Research Center of Hui Medicine Modernization,Yinchuan 750004, China; 5. Ningxia Collaborative Innovation Center of Hui Medicine, Yinchuan 750004, China)

ObjectiveTo investigate the effects of Hui-hui Gan-song Yin(HGY) on the accumulation of extracellular matrix of rat glomerular mesangial cells(MCs) induced by high glucose.MethodsThe 40 SD rats were randomly divided into normal control group(distilled water), glurenorm group(10 mg/kg), HGY high-dose group(10 g/kg) and HGY low-dose group(5 g/kg), 10 rats in each group. The rats in each group were treated with corresponding drugs, twice a day. After 3 days, the serum containing each drug were prepared to culture rat MCsinvitro. The MCs were divided into the normal control group(10% serum of rats in normal control group), high glucose group(30 mmol/L glucose+ 10% serum of rats in normal control group), glurenorm group(30 mmol/L glucose+ 10% serum of rats in glurenorm group), HGY high-dose group(30 mmol/L glucose+ 10% serum of rats in HGY high-dose group) and HGY low-dose group(30 mmol/L glucose+ 10% serum of rats in HGY low-dose group). The fibronectin(FN), ColⅠand ColⅣ levels were detected by Western blot.ResultsCompared with normal control group, the expression of FN, ColⅠand ColⅣ in high glucose group increased(P<0.01). The HCY suppressed the protein expression of FN, ColⅠand ColⅣ significantly(P<0.05).ConclusionThe serum containing HGY could suppressed protein expression of FN, ColⅠand ColⅣ and inhibit the accumulation of extracellular matrix of MCs induced by high glucose, which could protect glomerulus and delay the development of diabetic nephropathy.

Hui-hui Gan-song Yin; glomerular mesangial cell; accumulation of extracellular matrix; fibronectin;ColⅠ; ColⅣ

2012國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81202774)

南一，男，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：糖尿病及其并發(fā)癥的中醫(yī)藥防治研究，E-mail：nanyiailing@sina.com；袁玲，通信作者，女，博士，講師，研究方向：中藥藥理學(xué)研究，E-mail：nxykdx@qq.com。

R692.6

A

1005-1678(2015)11-0015-04