電化學(xué)指紋圖譜法測(cè)定復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┖竣?/h1>
2015-06-27 05:52:50祁永華彭玉生李守君
黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2015年2期 關(guān)鍵詞：中藥
祁永華，吳 迪，劉 麗，張 玲，方 丹，彭玉生，李守君
(1.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)
電化學(xué)指紋圖譜法測(cè)定復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┖竣?/p>
祁永華1,2，吳 迪2，劉 麗1，張 玲1，方 丹1，彭玉生1，李守君1
(1.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)
目的：建立一種應(yīng)用電化學(xué)指紋圖譜技術(shù)測(cè)定復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┖康姆椒?。方法：采用電化學(xué)指紋圖譜技術(shù)，以誘導(dǎo)時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┖窟M(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：中藥浸膏粉檢測(cè)范圍6～34mg/mL，回歸方程：t=6898-183.5c，R=0.9970，日內(nèi)RSD為1.07%，日間RSD為1.68%，加樣回收率RSD<1%，三批樣品含量(相當(dāng)標(biāo)示量)在98.6%～101.4%，符合要求。結(jié)論：通過(guò)方法學(xué)考察，建立一種有效、便捷、可靠、準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)中藥軟膏劑的方法。
電化學(xué)指紋圖譜；復(fù)方中藥?kù)疃卉浉啵豢鄥?；黃芩；蘆薈
復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┦怯煽鄥ⅰⅫS芩和蘆薈三種中藥按等比例混合所得浸膏粉，與基質(zhì)制備成O/W型軟膏劑。基質(zhì)成分主要為有機(jī)物，與主藥分離困難，測(cè)量時(shí)會(huì)產(chǎn)生干擾，很難準(zhǔn)確測(cè)定含量，因此，為測(cè)得軟膏劑準(zhǔn)確含量，不得不研究主藥與基質(zhì)的分離方法，費(fèi)時(shí)且專業(yè)技術(shù)要求高，增加了軟膏劑分析的難度[1～3]。電化學(xué)指紋圖譜在中藥領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，是一種方便快捷鑒別中藥的方法[4,5]。李守君等人采用電化學(xué)指紋圖譜技術(shù)優(yōu)化大黃提取工藝及鑒別黃連真?zhèn)蝃6,7]，張海珍等人采用電化學(xué)指紋圖譜(Electrochemicalfingerprint)技術(shù)測(cè)定蜂蜜中糖含量[8]。本文利用中藥活性成分參與電化學(xué)振蕩反應(yīng)而軟膏劑基質(zhì)不參與這種反應(yīng)這一原理，對(duì)復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┙喾酆窟M(jìn)行測(cè)定。該方法不需要分離主藥和基質(zhì)[9]，操作簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確,為中藥軟膏劑質(zhì)量檢測(cè)研究開拓新思路。
1 材料
數(shù)控超級(jí)恒溫器(SC-15型，寧波海曙天恒儀器廠)；電化學(xué)工作站(LK2005型，天津蘭力克科技有限公司)；電子天平(BP211D，德國(guó)Sartorius)；硫酸、硫酸錳、丙酮、溴酸鉀均為分析純，水均為二次蒸餾水；苦參、黃芩、蘆薈購(gòu)于藥材市場(chǎng)(由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)陳效忠教授鑒定)。
2 方法
2.1 樣品制備
取中藥浸膏粉1.0021g，用20mL蒸餾水稀釋，置于25mL容量瓶中定容，吸取上述溶液1、2、3、4、5mL分別置于25mL容量瓶中定容，作為對(duì)照品溶液；取空白基質(zhì)和復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤└?g，置于25mL容量瓶中定容。
2.2 電化學(xué)指紋圖譜測(cè)定方法
開啟B-Z振蕩系統(tǒng)，當(dāng)溫度達(dá)到(37±0.02)℃時(shí)，依次加入硫酸溶液、硫酸錳溶液、丙酮溶液各10mL，加入待測(cè)溶液4mL，攪拌15min，加入KBrO3溶液10mL開始計(jì)時(shí)，由電化學(xué)工作站記錄電勢(shì)(E)隨時(shí)間(t)的變化，繪制指紋圖譜。
2.3 精密度考察
精密稱取濃度為70mg/g復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤?0g，按2.2方法進(jìn)行測(cè)量，重復(fù)測(cè)量5次，隔日同法測(cè)量5次。
2.4 加樣回收率考察
精密稱取浸膏粉和空白基質(zhì)，配制成含量為50mg/g、70mg/g、90mg/g軟膏，每種軟膏精密稱取5g，按2.2方法進(jìn)行測(cè)量，每個(gè)樣品平行測(cè)量3次。
2.5 復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┲兴幗嗪繙y(cè)定
按照2.2方法，對(duì)三批樣品進(jìn)行測(cè)量，每批樣品平行測(cè)量3次。
3 結(jié)果
3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以誘導(dǎo)時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)，繪制誘導(dǎo)時(shí)間(t)與濃度(c)的曲線，得回歸方程：t=6898-183.5c，R=0.9970，由圖1可知，不同含量復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┑恼T導(dǎo)時(shí)間隨含量增大而減小，中藥浸膏濃度在6～34mg/mL范圍內(nèi)線性相關(guān)良好。
圖1 復(fù)方中藥軟膏劑標(biāo)準(zhǔn)曲線
3.2 空白對(duì)照品與供試品的電化學(xué)指紋圖譜比較
由圖2可知，空白基質(zhì)的電化學(xué)指紋圖譜在0～8000s內(nèi)沒(méi)有產(chǎn)生振蕩波形，是一條平滑曲線，而供試樣品在5000～7000s產(chǎn)生振蕩圖譜，表明空白基質(zhì)在軟膏劑檢測(cè)計(jì)量范圍內(nèi)不產(chǎn)生電化學(xué)振蕩，不會(huì)對(duì)中藥軟膏劑含量測(cè)定產(chǎn)生影響。
圖2 空白對(duì)照品與供試品的電化學(xué)指紋圖譜比較
a.復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤?；b.空白基質(zhì)
3.3 精密度加樣回收率結(jié)果
日內(nèi)RSD為1.07%，日間RSD為1.68%，回收率在98%～102%，均符合方法學(xué)要求。對(duì)三批樣品進(jìn)行測(cè)量，每批樣品平行測(cè)量3次，由表1可知，三批樣品的含量檢測(cè)限度在98.6%～101.4%，均在90%～110%，符合藥典軟膏劑含量限度的規(guī)定，達(dá)到試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求。
表1 樣品測(cè)定結(jié)果 (n=3)
4 討論
4.1 攪拌速度對(duì)復(fù)方中藥軟膏劑電化學(xué)指紋圖譜的影響
攪拌速度主要影響反應(yīng)溶液體系物質(zhì)混合的均勻程度。由于軟膏劑制備時(shí)原料大多為油脂類，具有一定的黏稠性，當(dāng)被加入反應(yīng)溶液體系時(shí)，提高了溶液的黏度，增加溶液均勻混合的難度。因此采用電化學(xué)指紋圖譜測(cè)量軟膏劑時(shí)，攪拌速度的選擇較為重要，攪拌速度過(guò)低或過(guò)高，都會(huì)產(chǎn)生混合不均勻現(xiàn)象，獲得的指紋圖譜不理想。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為600r/min時(shí)，獲得指紋圖譜較理想。
4.2 電化學(xué)指紋圖譜鑒別復(fù)方中藥軟膏劑真?zhèn)蔚奶接?/p>
軟膏劑含量測(cè)定的難點(diǎn)在于基質(zhì)的干擾，采用高效液相色譜測(cè)定時(shí)，需要選擇適當(dāng)?shù)娜苊饺芙饣|(zhì)或主藥[1]，將主藥與基質(zhì)分離。電化學(xué)指紋圖譜法在中藥應(yīng)用中的特點(diǎn)是，在分析過(guò)程中是對(duì)中藥群集信息的研究[10]，不必分離有效部位，尤其在復(fù)方中藥分析研究時(shí)，這一特點(diǎn)表現(xiàn)出極大的優(yōu)勢(shì)。本文綜合考慮上述因素，挖掘出，電化學(xué)指紋圖譜技術(shù)具有解決上述問(wèn)題的優(yōu)勢(shì)。通過(guò)對(duì)比基質(zhì)、單味藥和成品指紋圖譜的區(qū)別，可以用來(lái)鑒別復(fù)方中藥軟膏劑是否含有處方藥材，從而，可建立一種鑒別復(fù)方中藥軟膏劑真?zhèn)蔚谋憬菪路椒ā?/p>
[1]葛德升,劉漣,莊衛(wèi)紅.鹽酸環(huán)丙沙星軟膏劑的含量測(cè)定及穩(wěn)定性研究[J].安徽醫(yī)藥,2004,8(3):170-172
[2]華玉鈴,賀祝英,張建玲，等.中藥軟膏劑制備方法的研究進(jìn)展[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,30(2):66-69
[3]游燕. 中藥軟膏劑制備及質(zhì)量控制研究進(jìn)展[J] . 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2010,6(8):150-151
[4]陳效忠,鄒桂華,宗希明，等.電化學(xué)指紋圖譜鑒別中藥大黃、虎杖和何首烏[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2010,33(2):45
[5]張秀莉,佟德成,李守君.中藥大黃電化學(xué)指紋圖譜的研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2010,33(2):21-22
[6]沈德鳳,黃金寶,李守君，等.應(yīng)用電化學(xué)指紋圖譜優(yōu)化大黃水提取工藝[J].遼寧中醫(yī)雜志,2010,37(6):1105-1107
[7]李守君,黃金寶,蘭煥，等.應(yīng)用電化學(xué)指紋圖譜鑒別黃連及其偽品[J].遼寧中醫(yī)雜志,2010,37(5):902-903
[8]張海珍,肖長(zhǎng)龍,唐愛(ài)東.采用非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)測(cè)定蜂蜜中糖含量的新方法[J].福建分析測(cè)試,2012,21(4):7-12
[9]李繼睿,丁峰,禹練英，等.電化學(xué)指紋圖譜用于中藥的質(zhì)量控制[J].現(xiàn)代儀器,2011,17(93) :77-79
[10]袁斌.電化學(xué)指紋圖譜與中藥群集信息表征[D].天津:南開大學(xué),2007，7-8
The Determination of electrochemical fingerprint on compound Chinese medicine acne ointments content
QIYong-hua1,2,WUDi2,LIULi1,ZHANGLing1,FANGDan1,PENGYu-sheng1,LIShou-jun1
(1.College of Pharmacy of Jiamusi University,Jiamusi 154007, China;2.Heilongjiang University of Chinese Medicine Jiamusi School, Jiamusi 154007,China)
Objective: To establish a method in which an electrochemical fingerprint technology is used to determine the content of the compound medicine acne ointments. Methods: Electrochemical fingerprint technology was used to determine the acne ointment of Chinese medicine with the induction time as the evaluation index. Results: The detection range of Chinese medicine extract powder was 6～34mg/mL. The regression equation is t=6898-183.5c, R=0.9970, days’ RSD 1.07%, daytime RSD 1.68%, Recoveries RSD <1%. The content of the sample batches (The content of the equivalent amount of marked out) ranged between 98.6%～101.4%. Conclusion: By the methodological study, an effective, convenient, reliable, and accurate evaluation of Chinese medicine ointment approach is established.
electrochemical fingerprint; acne ointment of Chinese medicine; Sophora; skullcap; aloe
佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào)：LM2014_059。
祁永華(1982～)女，寧夏固原人，在讀碩士研究生。
李守君(1962～)男，黑龍江綏化人，碩士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:lishoujun1962@163.com。
R
A
1008-0104(2015)02-0064-02
2014-12-03)
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祁永華，吳 迪，劉 麗，張 玲，方 丹，彭玉生，李守君
(1.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)
電化學(xué)指紋圖譜法測(cè)定復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┖竣?/p>
祁永華1,2，吳 迪2，劉 麗1，張 玲1，方 丹1，彭玉生1，李守君1
(1.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)
目的：建立一種應(yīng)用電化學(xué)指紋圖譜技術(shù)測(cè)定復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┖康姆椒?。方法：采用電化學(xué)指紋圖譜技術(shù)，以誘導(dǎo)時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┖窟M(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：中藥浸膏粉檢測(cè)范圍6～34mg/mL，回歸方程：t=6898-183.5c，R=0.9970，日內(nèi)RSD為1.07%，日間RSD為1.68%，加樣回收率RSD<1%，三批樣品含量(相當(dāng)標(biāo)示量)在98.6%～101.4%，符合要求。結(jié)論：通過(guò)方法學(xué)考察，建立一種有效、便捷、可靠、準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)中藥軟膏劑的方法。
電化學(xué)指紋圖譜；復(fù)方中藥?kù)疃卉浉啵豢鄥?；黃芩；蘆薈
復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┦怯煽鄥ⅰⅫS芩和蘆薈三種中藥按等比例混合所得浸膏粉，與基質(zhì)制備成O/W型軟膏劑。基質(zhì)成分主要為有機(jī)物，與主藥分離困難，測(cè)量時(shí)會(huì)產(chǎn)生干擾，很難準(zhǔn)確測(cè)定含量，因此，為測(cè)得軟膏劑準(zhǔn)確含量，不得不研究主藥與基質(zhì)的分離方法，費(fèi)時(shí)且專業(yè)技術(shù)要求高，增加了軟膏劑分析的難度[1～3]。電化學(xué)指紋圖譜在中藥領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，是一種方便快捷鑒別中藥的方法[4,5]。李守君等人采用電化學(xué)指紋圖譜技術(shù)優(yōu)化大黃提取工藝及鑒別黃連真?zhèn)蝃6,7]，張海珍等人采用電化學(xué)指紋圖譜(Electrochemicalfingerprint)技術(shù)測(cè)定蜂蜜中糖含量[8]。本文利用中藥活性成分參與電化學(xué)振蕩反應(yīng)而軟膏劑基質(zhì)不參與這種反應(yīng)這一原理，對(duì)復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┙喾酆窟M(jìn)行測(cè)定。該方法不需要分離主藥和基質(zhì)[9]，操作簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確,為中藥軟膏劑質(zhì)量檢測(cè)研究開拓新思路。
1 材料
數(shù)控超級(jí)恒溫器(SC-15型，寧波海曙天恒儀器廠)；電化學(xué)工作站(LK2005型，天津蘭力克科技有限公司)；電子天平(BP211D，德國(guó)Sartorius)；硫酸、硫酸錳、丙酮、溴酸鉀均為分析純，水均為二次蒸餾水；苦參、黃芩、蘆薈購(gòu)于藥材市場(chǎng)(由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)陳效忠教授鑒定)。
2 方法
2.1 樣品制備
取中藥浸膏粉1.0021g，用20mL蒸餾水稀釋，置于25mL容量瓶中定容，吸取上述溶液1、2、3、4、5mL分別置于25mL容量瓶中定容，作為對(duì)照品溶液；取空白基質(zhì)和復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤└?g，置于25mL容量瓶中定容。
2.2 電化學(xué)指紋圖譜測(cè)定方法
開啟B-Z振蕩系統(tǒng)，當(dāng)溫度達(dá)到(37±0.02)℃時(shí)，依次加入硫酸溶液、硫酸錳溶液、丙酮溶液各10mL，加入待測(cè)溶液4mL，攪拌15min，加入KBrO3溶液10mL開始計(jì)時(shí)，由電化學(xué)工作站記錄電勢(shì)(E)隨時(shí)間(t)的變化，繪制指紋圖譜。
2.3 精密度考察
精密稱取濃度為70mg/g復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤?0g，按2.2方法進(jìn)行測(cè)量，重復(fù)測(cè)量5次，隔日同法測(cè)量5次。
2.4 加樣回收率考察
精密稱取浸膏粉和空白基質(zhì)，配制成含量為50mg/g、70mg/g、90mg/g軟膏，每種軟膏精密稱取5g，按2.2方法進(jìn)行測(cè)量，每個(gè)樣品平行測(cè)量3次。
2.5 復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┲兴幗嗪繙y(cè)定
按照2.2方法，對(duì)三批樣品進(jìn)行測(cè)量，每批樣品平行測(cè)量3次。
3 結(jié)果
3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以誘導(dǎo)時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)，繪制誘導(dǎo)時(shí)間(t)與濃度(c)的曲線，得回歸方程：t=6898-183.5c，R=0.9970，由圖1可知，不同含量復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┑恼T導(dǎo)時(shí)間隨含量增大而減小，中藥浸膏濃度在6～34mg/mL范圍內(nèi)線性相關(guān)良好。
圖1 復(fù)方中藥軟膏劑標(biāo)準(zhǔn)曲線
3.2 空白對(duì)照品與供試品的電化學(xué)指紋圖譜比較
由圖2可知，空白基質(zhì)的電化學(xué)指紋圖譜在0～8000s內(nèi)沒(méi)有產(chǎn)生振蕩波形，是一條平滑曲線，而供試樣品在5000～7000s產(chǎn)生振蕩圖譜，表明空白基質(zhì)在軟膏劑檢測(cè)計(jì)量范圍內(nèi)不產(chǎn)生電化學(xué)振蕩，不會(huì)對(duì)中藥軟膏劑含量測(cè)定產(chǎn)生影響。
圖2 空白對(duì)照品與供試品的電化學(xué)指紋圖譜比較
a.復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤?；b.空白基質(zhì)
3.3 精密度加樣回收率結(jié)果
日內(nèi)RSD為1.07%，日間RSD為1.68%，回收率在98%～102%，均符合方法學(xué)要求。對(duì)三批樣品進(jìn)行測(cè)量，每批樣品平行測(cè)量3次，由表1可知，三批樣品的含量檢測(cè)限度在98.6%～101.4%，均在90%～110%，符合藥典軟膏劑含量限度的規(guī)定，達(dá)到試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求。
表1 樣品測(cè)定結(jié)果 (n=3)
4 討論
4.1 攪拌速度對(duì)復(fù)方中藥軟膏劑電化學(xué)指紋圖譜的影響
攪拌速度主要影響反應(yīng)溶液體系物質(zhì)混合的均勻程度。由于軟膏劑制備時(shí)原料大多為油脂類，具有一定的黏稠性，當(dāng)被加入反應(yīng)溶液體系時(shí)，提高了溶液的黏度，增加溶液均勻混合的難度。因此采用電化學(xué)指紋圖譜測(cè)量軟膏劑時(shí)，攪拌速度的選擇較為重要，攪拌速度過(guò)低或過(guò)高，都會(huì)產(chǎn)生混合不均勻現(xiàn)象，獲得的指紋圖譜不理想。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為600r/min時(shí)，獲得指紋圖譜較理想。
4.2 電化學(xué)指紋圖譜鑒別復(fù)方中藥軟膏劑真?zhèn)蔚奶接?/p>
軟膏劑含量測(cè)定的難點(diǎn)在于基質(zhì)的干擾，采用高效液相色譜測(cè)定時(shí)，需要選擇適當(dāng)?shù)娜苊饺芙饣|(zhì)或主藥[1]，將主藥與基質(zhì)分離。電化學(xué)指紋圖譜法在中藥應(yīng)用中的特點(diǎn)是，在分析過(guò)程中是對(duì)中藥群集信息的研究[10]，不必分離有效部位，尤其在復(fù)方中藥分析研究時(shí)，這一特點(diǎn)表現(xiàn)出極大的優(yōu)勢(shì)。本文綜合考慮上述因素，挖掘出，電化學(xué)指紋圖譜技術(shù)具有解決上述問(wèn)題的優(yōu)勢(shì)。通過(guò)對(duì)比基質(zhì)、單味藥和成品指紋圖譜的區(qū)別，可以用來(lái)鑒別復(fù)方中藥軟膏劑是否含有處方藥材，從而，可建立一種鑒別復(fù)方中藥軟膏劑真?zhèn)蔚谋憬菪路椒ā?/p>
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The Determination of electrochemical fingerprint on compound Chinese medicine acne ointments content
QIYong-hua1,2,WUDi2,LIULi1,ZHANGLing1,FANGDan1,PENGYu-sheng1,LIShou-jun1
(1.College of Pharmacy of Jiamusi University,Jiamusi 154007, China;2.Heilongjiang University of Chinese Medicine Jiamusi School, Jiamusi 154007,China)
Objective: To establish a method in which an electrochemical fingerprint technology is used to determine the content of the compound medicine acne ointments. Methods: Electrochemical fingerprint technology was used to determine the acne ointment of Chinese medicine with the induction time as the evaluation index. Results: The detection range of Chinese medicine extract powder was 6～34mg/mL. The regression equation is t=6898-183.5c, R=0.9970, days’ RSD 1.07%, daytime RSD 1.68%, Recoveries RSD <1%. The content of the sample batches (The content of the equivalent amount of marked out) ranged between 98.6%～101.4%. Conclusion: By the methodological study, an effective, convenient, reliable, and accurate evaluation of Chinese medicine ointment approach is established.
electrochemical fingerprint; acne ointment of Chinese medicine; Sophora; skullcap; aloe
佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào)：LM2014_059。
祁永華(1982～)女，寧夏固原人，在讀碩士研究生。
李守君(1962～)男，黑龍江綏化人，碩士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:lishoujun1962@163.com。
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A
1008-0104(2015)02-0064-02
2014-12-03)
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