任鳳偉，范宗憲

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科，黑龍江 佳木斯 154003)

CXCL12及CXCR7在鼻內翻性乳頭狀瘤中的表達及意義①

任鳳偉，范宗憲

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討趨化因子CXCL12及趨化因子受體CXCR7在鼻內翻性乳頭狀瘤(NIP)中的表達情況，及其在該病的發(fā)生、發(fā)展中的意義。方法：采用免疫組織化學染色方法檢驗44例鼻內翻性乳頭狀瘤(NIP)，32例慢性肥厚性鼻炎(CHR)及15例鼻鱗狀細胞癌(NSCC)組織中趨化因子CXCL12及趨化因子受體CXCR7的表達情況。結果：(1)CXCL12在CHR、NIP、NSCC中表達陽性率分別為6.25%，54.54%，86.67%，呈遞增型；(2)CXCR7在CHR、NIP、NSCC中表達陽性率分別為9.38%，52.28%，93.3%，呈遞增型；(3)spearman秩相關分析顯示兩者在鼻內翻性乳頭狀瘤中的表達呈正相關(rs=0.762,P<0.05)。結論：CXCL12和CXCR7均參與NIP的發(fā)生、發(fā)展過程,并且二者在NIP的發(fā)生、發(fā)展過程中起協(xié)同作用。

鼻內翻性乳頭狀瘤；趨化因子CXCL12；趨化因子受體CXCR7；免疫組織化學

鼻內翻性乳頭狀瘤(NIP)為鼻腔及鼻竇常見的良性腫瘤。術后復發(fā)率與其他良性腫瘤比較高，在5%～47%。反復手術易誘發(fā)惡變，惡變率為7%[1]?，F(xiàn)本病病因及惡變誘因有待明確[2]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病可能與HPV、EB病毒感染，慢性炎癥刺激，過敏反應等有關。根據(jù)本病的發(fā)生部位，侵及范圍選擇適當?shù)氖中g徑路及手術方式，并且對有伴隨惡性病變者采取放射治療及化學治療等綜合治療方法，不僅能夠增加治愈比率，而且可有效的降低腫瘤再生[3]。但是否能夠長時期控制本病的復發(fā)及降低惡變率，還需要不斷地進行長期隨訪和研制出行之有效的藥物控制本病的繼續(xù)發(fā)展。趨化因子CXCL12及其受體CXCR7在與多種腫瘤密切相關。本實驗采用免疫組織化學方法檢驗趨化因子CXCL12及其受體CXCR7在實驗組(鼻內翻性乳頭狀瘤)、對照組(慢性肥厚性鼻炎及鼻鱗狀細胞癌)組織中的表達情況，并對CXCL12及CXCR7的表達情況進行分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本

實驗組：收集佳木斯大學附屬第一醫(yī)院耳鼻咽喉科2010-07～2014-10手術切除的44例鼻內翻性乳頭狀瘤(NIP)組織。對照組：①收集佳木斯大學附屬第一醫(yī)院耳鼻咽喉科2013-12～2014-09手術切除的32例慢性肥厚性鼻炎下鼻甲黏膜(CHR)組織。②收集佳木斯大學附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科2008-06～2014-10手術切除的15例鼻鱗狀細胞癌(NSCC)組織。

1.1.2 試劑

主要試劑：兔抗人CXCL12多克隆抗體，兔抗人CXCR7多克隆抗體(以上試劑購自武漢三鷹生物技術有限公司)。即用型免疫組化S-P試劑盒(試劑購自福建邁新生物技術有限公司)等。

1.2 方法

1.2.1 采用SABC免疫組織化學法

用常規(guī)石蠟切片做CXCL12和CXCR7 的免疫組織化學方法檢測。PBS液代替一抗為陰性對照，同一張切片非染色部位作為陽性部位自身對照。

1.2.2 結果判斷

結果判定人員為2名對患者的臨床資料不知情的病理科醫(yī)師，兩名醫(yī)師同時進行光學顯微鏡觀察。對陽性細胞百分數(shù)和細胞質染色強度兩個方面進行判斷。根據(jù)陽性腫瘤細胞占總的觀察細胞的百分比率分類：0分為≤10% ；1分為11%～50%；2分為51%～75%；3分為>76% 。細胞質染色強度分類：0分為無色；1分為黃色；2分為棕黃色；3分為棕褐色(腫瘤細胞胞質與背景染色相對比 )。二項記分相乘， 0～1 分為陰性，≥2分為陽性，其中 2 分為弱陽性(+)，3～4分為中等陽性()，5～6 分為強陽性()。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行處理，對實驗結果進行χ2檢驗和Spearman秩相關分析，以P<0.05作為差異有統(tǒng)計學意義標準。

2 結果

2.1CXCL12在CHR、NIP、NSCC中的表達

CXCL12在組織中的陽性表達為主要在胞質中出現(xiàn)細胞質內出現(xiàn)黃色、棕黃色或棕褐色著色顆粒。在32例CHR組織中2例陽性表達，陽性率6.25%，44例NIP組織中24例陽性表達，陽性率54.54%，15例NSCC組織中13例陽性表達，陽性率86.67%。CXCL12在CHR、NIP、NSCC中的表達兩兩比較，進行χ2檢驗后，均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1、圖1～2。

表1 CXCL12在CHR、NIP、NSCC中的表達

圖1 CXCL12在鼻內翻性乳頭狀瘤組織中呈中等陽性表達×200

圖2 CXCL12在慢性肥厚性鼻炎組織中部分弱陽性表達×200

2.2CXCR7在CHR、NIP、NSCC中的表達

CXCR7在組織中的陽性表達為主要在胞質出現(xiàn)黃色、棕黃色或棕褐色著色顆粒。在32例CHR組織中3例陽性，陽性率9.38%，44例NIP組織中23例陽性表達，陽性率52.28%，15例NSCC組織中14例陽性表達，陽性率93.3%。CXCR7在CHR、NIP、NSCC中的表達兩兩比較，進行χ2檢驗后，均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2、圖3～4。

表2 CXCR7在CHR、NIP、NSCC中的表達

圖3 CXCR7在鼻腔鱗狀細胞癌組織中呈強陽性表達×200

圖4 CXCR7在慢性肥厚性鼻炎組織中部分弱陽性表達×200

2.3 在NIP中CXCL12和CXCR7表達的相關性

見表3。CXCL12陽性表達的24例NIP組織中,CXCR7陽性表達20例，在20例CXCL12陰性表達的NIP組織中，CXCR7陰性表達17例，兩組表達一致性較高，數(shù)據(jù)Spearman秩相關分析后，得相關系數(shù)rs=0.762，故CXCL12和CXCR7之間的表達呈正相關。

表3 NIP中CXCL12與CXCR7表達相關性

3 討論

鼻腔和鼻竇乳頭狀瘤(papilloma)是一種較為常見的來源于上皮組織良性腫瘤，約占全部鼻腔及鼻竇腫瘤的0.5%～4%。本病的臨床特征：較易復發(fā)，造成周圍組織結構破壞，并形成骨質重構，且與鼻腔鱗狀細胞癌密切相關[4]。本病發(fā)病年齡在6～89歲，以中年男性患者(50～70歲，平均54歲)多見?；颊咦畛Ｒ詥蝹缺侨驮\，其次以流涕，頭痛及鼻出血就診。少數(shù)患者還可以出現(xiàn)嗅覺減退及面部疼痛。本病多累及單側，極少雙側受累。腫瘤生長部位一般位于鼻腔，以鼻腔外側壁常見，其次累及上頜竇和篩竇，極少位于額竇，蝶竇和中隔。鼻內翻性乳頭狀瘤原發(fā)部位通常只有一個，多部位來源的極少見。本病治療主要以早診斷，手術徹底，遠期療效較好[5]。

鼻腔內翻性乳頭狀瘤雖然屬上皮組織來源的良性腫瘤，但因其較其他良性腫瘤復發(fā)率高，較易惡變，且生物學特點為侵襲性生長，預后需長期的隨訪才可以知其生物學轉歸的特征，故被歸于邊緣性腫瘤，亦或稱之為交界性腫瘤。腫瘤的發(fā)生，生長，侵襲，惡變，轉移等過程需要多種因素的共同作用。筆者查閱資料發(fā)現(xiàn)腫瘤與趨化因子之間的研究呈逐年增多的趨勢。趨化因子是能吸引白細胞發(fā)生定向運動的化學物質[6]。趨化因子(chemokine)根據(jù)其半胱氨酸排列順序將其分為 4 大類：CXC、CC、C、CX3C，相對應的受體為CXCR、CCR、CR、CX3CR。趨化因子是分泌蛋白家族成員之一，是一類能使細胞產(chǎn)生定向移動的小分子分泌蛋白，可由多種細胞產(chǎn)生。能使參與炎癥及免疫反應的白細胞發(fā)生趨化作用，定向移動至病變部位。CXCL12又稱基質細胞衍生因子1(stromalcell-derivedfactor1，SDF-1) 或前B細胞刺激因子(pre-Bcellstimulatoryfactor，PBSF)，是CXC家族中的一份子。CXCL12與其他趨化因子區(qū)別是：趨化因子CXCL12是由基質細胞在無外界炎癥等刺激時持續(xù)產(chǎn)生并表達。研究顯示，趨化因子CXCL12可調節(jié)胚胎形成，動員干細胞和促進腫瘤惡性進展。CXCL12廣泛地表達于人類多種細胞和組織中,包括免疫細胞、腦、心臟、腎、肝、肺和脾等[7]。其生理功能的發(fā)揮需要與相應的配體相結合，2005年以前，人們一直認為，CXCL12只能與受體CXCR4特異性結合，從而發(fā)揮生物學效應。但自學者Balabanian等[8]發(fā)現(xiàn)CXCL12不僅可以與趨化因子受體CXCR4結合，且可以與CXCR7更為緊密的結合，并發(fā)揮生理學作用。

趨化因子受體一般為七次跨膜受體，大多數(shù)受體其中一個胞內鏈偶聯(lián)G蛋白，介導配體激起的信號級聯(lián)反應[9]。趨化因子受體CXCR7活化后發(fā)揮生物學功能的作用機制與CXCR4不同，并不產(chǎn)生鈣離子內流現(xiàn)象，而是通過清除配基發(fā)揮作用。這是一種與達菲抗原趨化因子受體(antigenreceptorforchemokine,DARC)、D6 等非典型性趨化因子結合物的作用類似的效應，故被歸入“誘騙受體(decoyreceptor)”之列。CXCR7與CXCL12的親和力比CXCR4與CXCL12親和力高很多[10]。趨化因子受體CXCR7不僅僅可以與CXCL12相結合，且可以與CXCL11結合，但緊密程度遠不及CXCL12[11]。

近年來CXCR7在腫瘤的發(fā)生，發(fā)展及惡變中的病理生理功能研究逐漸增多。研究顯示，在涎腺腺樣囊性癌,口腔鱗癌，乳腺癌、肺癌(包括鱗癌與腺癌)、橫紋肌肉瘤、宮頸癌、腎癌、食管癌、黑色素瘤原位灶都有CXCR7的高表達[12～14]，上述結果都證實趨化因子受體CXCR7與腫瘤的關系密切，可能參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程。Burns等[11]通過實驗證實腫瘤細胞與內皮細胞的黏附能力與CXCR7的表達情況正相關。另外有實驗證實CXCR7可促進腫瘤血管的生成。與綜合上述研究結果及其他研究成果資料表明CXCR7在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用主要包括以下幾個方面：①可能有促進腫瘤細胞的增殖。②抑制腫瘤細胞的死亡的作用。③促進腫瘤組織血管的生成以增加腫瘤組織的血液供應。④增加腫瘤細胞與周圍組織的黏附能力。

本實驗對收集的44例鼻內翻性乳頭狀瘤，32例慢性肥厚性鼻炎術中切除的鼻甲黏膜，15例鼻腔鱗狀細胞癌組織分別進行免疫組織化學染色，結果發(fā)現(xiàn)趨化因子CXCL12在三者中的表達陽性率逐漸增高，受體CXCR7與CXCL12表達趨勢高度一致，且在鼻內翻性乳頭狀瘤中表達呈正相關。實驗結果提示：①趨化因子CXCL12及其受體CXCR7均參與鼻內翻性乳頭狀瘤的發(fā)生發(fā)展過程。②趨化因子CXCL12及受體CXCR7在鼻內翻性乳頭狀瘤乳頭狀瘤向惡性腫瘤(鼻腔鱗狀細胞癌)轉變中可能起協(xié)同作用。故有望將CXCL12/CXCR7生物學軸作為鼻內翻性乳頭狀瘤治療的新靶點，臨床應用受體抑制劑以減緩鼻內翻性乳頭狀瘤的生長，減少復發(fā)，并抑制其惡變，給鼻內翻性乳頭狀瘤患者帶來福音。

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The expressions of the CXCL12 and the CXCR7 in nasal inverted papilloma

RENFeng-wei，F(xiàn)ANZong-xian

(E.N.T.Department, Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China)

Objective: To explore the expression of chemotactic factor CXCL12 and chemokine receptor CXCR7 in nasal inverted papilloma (NIP)and their effect in the occurrence and development of NIP. Methods: The expressions of CXCL12 and CXCR7 in tissue samples of 44 cases of NIP, 32 cases of Chronic hypertrophic rhinitis(CHR) and 15 cases of nasal prickle cell carcinoma (NSCC) were detected by using immunohistochemistry methods.Results:①The expression positive rate of the CXCL12 in CHR,NIP and NSCC is 6.25%，54.54%，86.67%，it’s show an increasing tend step by step.②The expression positive rate of CXCR7 in CHR, NIP and NSCC were 9.38%, 52.28%, 93.3%, which showed an increasing tend.③Spearman rank correlation analysis showed that both expressions in the inverted papilloma of the nasal turn sexual were positively correlated(rs=0.762,P<0.05). Conclusion: The result suggested that the CXCL12 and CXCR7 both participated in the genesia and growth of NIP. They both jointly contributed to the formation of the NIP.

nasal inverted papilloma; chemotactic factor CXCL12; chemokine receptor CXCR7；immunohistochemical

佳木斯大學研究生科技創(chuàng)新項目，編號：LM2014_017。

任鳳偉(1986～)女,黑龍江鶴崗人,在讀碩士研究生。

范宗憲(1963～)男,黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導師。E-mail:renfengwei1986@163.com。

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1008-0104(2015)01-0044-03

2014-12-09)