韓雪冰，于 蓮，喬 越，張靈芝

(1.雙鴨山煤炭總醫(yī)院，黑龍江 雙鴨山 155100；2.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

白樺脂醇脂質(zhì)體的制備及其制劑學(xué)研究①

韓雪冰1,2，于 蓮2，喬 越2，張靈芝2

(1.雙鴨山煤炭總醫(yī)院，黑龍江 雙鴨山 155100；2.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：制備白樺脂醇脂質(zhì)體，優(yōu)化其工藝并進(jìn)行制劑學(xué)研究。方法：采用薄膜分散法制備白樺脂醇脂質(zhì)體。進(jìn)行單因素考察并采用L9(34) 正交試驗(yàn)優(yōu)化工藝。結(jié)果：最佳制備處方為白樺脂醇16mg，卵磷脂80mg，膽固醇35mg，PBS pH為7.0。由此制備的白樺脂醇脂質(zhì)體溶液為乳白色半透明液體，觀察到其脂質(zhì)體為類球形粒子，形態(tài)圓整，分布均勻，平均粒徑為200～500nm，ζ電位為-25mv，包封率為43%，載藥量為1.22%，體外釋放試驗(yàn)結(jié)果表明其具有一定的緩釋作用。結(jié)論：薄膜分散法制備白樺脂醇脂質(zhì)體粒徑較小，方法簡便，重復(fù)性高，適用于白樺脂醇脂質(zhì)體的制備。

白樺脂醇；脂質(zhì)體；薄膜分散法；制劑學(xué)研究

白樺脂醇(Betulin)，又稱白樺酯醇、樺木醇、樺木腦，為白樺樹皮的主要成分，含量為11%～30%左右[1]，屬于五元環(huán)的三萜類化合物[2,4]，具有羽扇豆烷型骨架，在自然資源中含量豐富。且白樺三萜類化合物具有抗真菌、消炎、抗HIV和抗腫瘤活性[5]。脂質(zhì)體屬于膠體系統(tǒng)，具有緩釋和靶向，減輕毒性和增加細(xì)胞通透性作用[6]。因此本研究以白樺脂醇為模型藥物，以大豆卵磷脂和膽固醇為輔料，采用薄膜分散法制備白樺脂醇脂質(zhì)體靶向制劑，通過工藝的優(yōu)化及制劑學(xué)研究，以期更多藥物制劑應(yīng)用于腫瘤治療。

1 材料

白樺脂醇標(biāo)準(zhǔn)品(國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))；白樺脂醇原料藥(寶雞市方晟生物開發(fā)有限公司)；注射用大豆卵磷脂(上海晶純實(shí)業(yè)有限公司)；膽固醇(上海晶純實(shí)業(yè)有限公司)；甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；無水乙醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)。

2 方法

2.1 白樺脂醇脂質(zhì)體的制備

2.1.1 薄膜分散法制備脂質(zhì)體

稱取處方量的磷脂、膽固醇和白樺脂醇，置于 250mL的茄形瓶中，加入20mL的有機(jī)溶劑超聲溶解，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機(jī)溶劑(乙醇)，向茄形瓶中加入適量的PBS，30℃水浴洗膜，水浴超聲后過0.45μm濾膜，即得脂質(zhì)體。

2.1.2 單因素考察及工藝的優(yōu)化

進(jìn)行處方單因素考察，選擇白樺脂醇質(zhì)量、白樺脂醇與卵磷脂質(zhì)量比、卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比及PBS的pH值4個(gè)因素,見表1，以包封率EE(%)為考察指標(biāo)，進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)化工藝。

表1 四因素三水平表

2.2 白樺脂醇脂質(zhì)體的制劑學(xué)研究

2.2.1 外觀形態(tài)觀察

在真空條件下將平鋪于雙面導(dǎo)電膠上白樺脂醇脂質(zhì)體凍干粉末的表面噴金處理，掃描電鏡觀察其形態(tài)。

2.2.2 粒度分布

室溫條件下，用水稀釋按最佳處方制備的白樺脂醇脂質(zhì)體溶液，置于樣品池中測定粒徑大小及分布。

2.2.3 ζ電位的測定

取2mL用0.01M磷酸鹽緩沖溶液(最佳pH)稀釋10倍的按最佳處方制備的白樺脂醇脂質(zhì)體溶液置于樣品池中，采用ζ電位分析儀測定脂質(zhì)體表面的ζ電位，每個(gè)樣品測5次。

2.2.4 包封率及載藥量的測定

制備3批白樺脂醇脂質(zhì)體以離心法測定脂質(zhì)體內(nèi)包封的藥物量和未包封的游離藥物量，用下式計(jì)算包封率和載藥量。

式中，EE%-包封率；We-脂質(zhì)體內(nèi)包封的藥物量；Wo-未包封的游離藥物量。

2.2.5 體外釋放測定

2.2.5.1 體外釋放標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱取白樺脂醇標(biāo)準(zhǔn)品1mg，用PBS(pH7.4)的緩沖液作為溶劑，制備出100μg·mL-1的白樺脂醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別40、60、100、140、160、220μL。得到4、6、10、14、16、22μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在200～400nm 的波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。

2.2.5.2 體外釋放曲線的繪制

量取適量白樺脂醇脂質(zhì)體溶液，置于處理過的透析袋中并扎緊袋兩端，放入裝有釋放介質(zhì)(pH 7.4磷酸鹽緩沖液)的100 mL溶出杯中，置于攪拌速度為100rpm·min-1，溫度為37℃的溶出度測定儀中。分別于0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24h時(shí)取樣5mL，測定藥物含量，同時(shí)補(bǔ)加新鮮釋放介質(zhì)5mL。在相同的條件下考察白樺脂醇原料藥的釋放，以累積釋藥百分率對(duì)時(shí)間作圖，分別繪制白樺脂醇脂質(zhì)體和原料藥的體外釋放曲線。

3 結(jié)果

3.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2分析可知：根據(jù)R=|Kmax-Kmin|，本次實(shí)驗(yàn)的各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)影響的大小排序?yàn)椋篜BS的pH>卵磷脂的用量>白樺脂醇的用量>膽固醇的用量，即D1>B1>A1>C2。所以，最優(yōu)處方為白樺脂醇質(zhì)量為16mg，卵磷脂的質(zhì)量為80mg，膽固醇的質(zhì)量為35mg，PBS的pH為7.0。

表2 L9 3(4)正交試驗(yàn)結(jié)果

3.2 制劑學(xué)研究結(jié)果

3.2.1 外觀形態(tài)觀察

由圖1可觀察到脂質(zhì)體的大小均一，粒子較圓整。

圖1 白樺脂醇脂質(zhì)體凍干粉掃描電鏡圖

3.2.2 粒度分布測定

由圖2可見白樺脂醇脂質(zhì)體的粒徑大部分都集中200～500nm。

圖2 白樺脂醇脂質(zhì)體的粒度分布圖

3.2.3 ζ電位測定

由圖3可見白樺脂醇脂質(zhì)體的表面顯負(fù)電性。

3.2.4 包封率和載藥量

由表3可見平均包封率為43%，載藥量為1.22%。

表3 白樺脂醇脂質(zhì)體的包封率和載藥量 (n=3)

圖3 白樺脂醇脂質(zhì)體的ζ電位的測定

3.2.5 體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別對(duì)不同濃度的白樺脂醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，以吸光度(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得方程：A=0.0193C+0.0669(r=0.9994)，結(jié)果表明白樺脂醇在6～34μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖4。

3.2.5.2 體外釋放結(jié)果

由圖5可見脂質(zhì)體溶液在12h累積釋放達(dá)64%，說明其與原料藥相比有一定的緩釋效果。

圖4 白樺脂醇在PBS(pH7.4)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖5 體外累積釋放曲線(n=3)

4 討論

白樺脂醇作為一種天然抗腫瘤藥物，其靶向制劑擁有廣闊的開發(fā)前景。而脂質(zhì)體是目前研究比較廣泛的微粒給藥系統(tǒng)，其制備方法有超聲分散法、薄膜分散法、乙醚注入法等[7]。本文采用薄膜分散法制備白樺脂醇脂質(zhì)體，粒徑小，質(zhì)量佳，且簡便易行，重復(fù)性高，為白樺脂醇的靶向應(yīng)用提供了可靠的依據(jù)。 脂質(zhì)體的包封率和穩(wěn)定性與藥脂比有著直接關(guān)

系[6]。實(shí)驗(yàn)通過單因素考察選定白樺脂醇質(zhì)量、白樺脂醇與卵磷脂質(zhì)量比、卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比及PBS的pH值4個(gè)因素，以包封率為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法將工藝進(jìn)一步優(yōu)化，得到最佳處方為：白樺脂醇16mg，卵磷脂80mg，膽固醇35mg，PBS pH為7.0。由此制得的白樺脂醇脂質(zhì)體在電鏡下觀察可見大小均一，形態(tài)圓整，且具有一定緩釋效果。為進(jìn)一步觀察其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用奠定了基礎(chǔ)。

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國家自然基金項(xiàng)目，編號(hào)：8127401

韓雪冰(1986～)女，黑龍江七臺(tái)河人，在讀碩士研究生。

于蓮(1963～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail：jdyulian@163.com。

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1008-0104(2015)01-0001-03

2015-01-08)