胡劉平，杜玉珍，余偉模，常貫成，吳旺喜

·臨床醫(yī)學··短篇論著·

XE-2100全自動血細胞分析儀不同檢測方法對低值血小板標本的檢測準確度比較

胡劉平，杜玉珍，余偉模，常貫成，吳旺喜

血小板；全血細胞分析儀；檢測方法

XE-2100全自動血細胞分析儀在對低值血小板標本檢測時,當其血小板相關參數(shù)可測出且相應的血小板直方圖曲線基本規(guī)則時,對血小板計數(shù)結果準確。而當血小板相關參數(shù)測不出且相應的血小板直方圖曲線不規(guī)則呈現(xiàn)時,應選用流式細胞激光法進行復查。尤其當遇到血小板直方圖曲線呈顯著不規(guī)則抬高或左移,而血涂片鏡檢又有較多巨大、微小的標本時都應進行手工顯微鏡法計數(shù),盡量為臨床提供一個準確可靠的血小板計數(shù)結果。

目前全自動血液分析儀計數(shù)多采用電阻抗法,然而由于電阻抗法存在干擾因素較多,致使其結果的準確性也受到一定程度的干擾,按本科室復檢規(guī)則要求當血小板(PLT)＜90 ×109/L時需進行手工顯微鏡法計數(shù)復檢。然而,筆者在日常工作中發(fā)現(xiàn)在低值血小板標本中其血小板相關參數(shù)與其計數(shù)準確性方面有一定關系。本文主要探討電阻抗法和流式細胞激光法2種技術與手工顯微鏡法計數(shù)法對低值血小板標本統(tǒng)計的準確性。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 300例低值血小板樣本取自本院住院及門診患者,受檢者抽血2 ml置EDTAK2真空抗凝管,混勻,室溫放置,所有標本檢測均在標本采集后4 h內(nèi)完成。其中PLT參數(shù)不可測100例為A組、PLT參數(shù)可疑100例為B組、PLT參數(shù)可測出100例為C組。

1.2 儀器與試劑 XE-2100全自動血細胞分析儀(日本東亞公司)。Olympus CX21雙目顯微鏡(日本Olympus公司)。XE-2100原裝進口試劑及專門配用的全血質控物(日本東亞公司)。靜脈血用乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2)真空抗凝管(BD公司)。血小板稀釋液按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版［1］的要求配制。瑞吉染色液(珠海貝索生物技術有限公司)。實驗前用XE-2100專門配用的質控物校準儀器,并且每日都用XE-2100配套的進口質控品(3個溶度)作室內(nèi)質控,各參數(shù)檢測值必須在控,才能進行日常標本檢測。

1.3 實驗方法 每份標本同時采用XE-2100全自動血細胞分析儀的電阻抗法和流式細胞激光法進行檢測。按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版的要求,每份標本由2名檢驗師使用草酸銨稀釋液對其稀釋并進行手工顯微鏡法計數(shù),如兩者結果相差小于10%,則取其平均值,如大于10%,則重新取樣充池計數(shù)［2-4］。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 19.0軟件統(tǒng)計,實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示,應用兩樣本配對t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

A組3例巨大血小板標本未記錄,B組1例EDTA依賴性聚集標本未記錄。XE-2100全自動血細胞分析儀電阻抗法、流式細胞激光法與手工顯微鏡計數(shù)法血小板數(shù)比較及相關性分析結果見表1、表2。

表1 XE-2100全自動血細胞分析儀電阻抗法、流式細胞激光法與手工顯微鏡計數(shù)法檢測血小板數(shù)的比較(×109/L，±s)

表1 XE-2100全自動血細胞分析儀電阻抗法、流式細胞激光法與手工顯微鏡計數(shù)法檢測血小板數(shù)的比較(×109/L，±s)

注:與手工計數(shù)法比較aP＜0.01；A為血小板不可測組,B為可疑組,C為可測組

組別 例數(shù) 手工計數(shù)法 電阻抗法 流式細胞激光法A組 97 47.69±30.81 47.35±30.73 45.65±30.94aB組 99 63.51±19.98 58.94±18.55a64.05±19.74 C組 100 63.09±22.68 62.68±22.46a63.44±23.15a

表2 XE-2100全自動血細胞分析儀電阻抗法、流式細胞激光法與手工顯微鏡計數(shù)法的相關性分析

3 討論

PLT是多功能細胞,在生理性凝血和纖溶過程中起著重要的作用,它也是研究患者凝血功能障礙眾多血液檢測項目之中最為重要的指標之一。在臨床上,PLT減低是引起出血的常見原因。當患者PLT＜20×109/L,可有較嚴重的出血,當PLT＜5×109/L時常嚴重出血,可危及患者生命［4］,所以其計數(shù)的準確性具有重要的臨床意義。

隨著血液分析儀的推廣和普及,血液分析儀越來越廣泛地應用于臨床血常規(guī)分析中。目前臨床實驗室用于PLT檢測的主流全血細胞分析儀是以電阻抗法為主。而本實驗室的XE-2100全血細胞分析儀同時擁有電阻抗法和光學法兩種檢測PLT的方法。PLT-I在其血小板直方圖正常的情況下,通常是可以得到準確且重復性好的結果,但此方法易受到干擾因素的影響,尤其在低血小板標本且直方圖異常的情況下更為顯著。而光學法采用半導體激光和流式細胞儀技術(FCM),對電阻抗法易受到的常見干擾因素可以起到很好的抗干擾作用,從而得到準確的血小板計數(shù)結果。手工顯微鏡計數(shù)法雖然為PLT計數(shù)的參考方法,但其缺陷就是重復性差。有文獻報道,手工顯微鏡計數(shù)法在不同的操作者之間的變異系數(shù)可達10%～25%［5］。所以本文研究的手工計數(shù)結果是由本室臨檢組經(jīng)驗豐富的技術人員計數(shù)2次取其均值。

為了給臨床提供一個準確的PLT計數(shù)結果,根據(jù)復檢規(guī)則當PLT＜90×109/L時需要推片復檢,而當PLT＜30×109/ L時還需向臨床報告危急值。然而筆者在日常工作中卻發(fā)現(xiàn),PLT直方圖發(fā)現(xiàn)曲線右側上翹但整條曲線可不規(guī)則,特別是右側曲線出現(xiàn)鋸齒狀。由于曲線尾部上翹以至于血小板直方圖出現(xiàn)PU＞20%或PU＞40%,從而造成了儀器無法識別。這提示,在此情況下當儀器檢測低值血小板標本時, PLT計數(shù)的準確性可能受到多種因素的影響。一些體積較大和巨大血小板、畸形血小板、血小板聚集、血小板衛(wèi)星現(xiàn)象［6］導致電阻抗法都未能正常計數(shù),造成血小板假性減少。血涂片及手工法計數(shù)也證實了這一點。而光學法卻能克服這些電阻抗法計數(shù)血小板的干擾因素。另外,當PLT直方圖發(fā)現(xiàn)曲線右側上翹但整條曲線也可不規(guī)則,曲線右側與X軸接近但并不重合,在這種情況下,經(jīng)血涂片染色鏡檢易見到部分脫顆粒的血小板,微小血小板及血小板大小不一性較顯著。所以此情況可能導致電阻抗法血小板計數(shù)的結果更接近手工計數(shù)結果。當其相應的血小板直方圖曲線基本光滑且右側曲線均與X軸重合,尾部無上翹現(xiàn)象,其PLT手工計數(shù)都明顯高于相應的電阻抗法及光學法。分析其原因,可能是由于電阻抗法及光學法都未把那些巨大血小板準確計數(shù),與張偉紅等［7］報道相符。

總之,PLT的準確計數(shù)對臨床疾病尤其是血液性疾病的診治極為重要,它也是血常規(guī)檢查中的一個常規(guī)指標。然而PLT的準確計數(shù)實非易事,雖然XE-2100全自動血細胞分析儀計數(shù)血小板具有較高的準確性和重復性,并且其計數(shù)的準確性隨著樣本中PLT數(shù)量增多而增高,但是在低血小板標本計數(shù)中其準確性是隨著樣本中PLT數(shù)量減少而減低的［8-9］。因此在日常低血小板標本檢測中尤其是伴隨著PLT直方圖異常時,需用光學法或手工方法進行復查,然而手工方法復查在大型三甲醫(yī)院日常工作中是很難實施的,用流式細胞術成本太高也難以在日常工作中實施。實踐工作中發(fā)現(xiàn)在低值血小板樣本中,當儀器出現(xiàn)異常報警信息及PLT相關參數(shù)無結果時,其電阻抗法的結果不可靠,此時為了保證PLT檢驗結果的準確性和可靠性,宜結合血涂片鏡檢選用流式細胞激光法復查,結合血小板直方圖及血涂片鏡檢綜合判斷分析,血涂片鏡檢可直接觀察PLT的分布和體積大小,同時也可觀察到是否有小紅細胞、紅細胞碎片、大/巨大血小板和血小板聚集對PLT計數(shù)的干擾［10］。本次實驗標本量較小,而用于PLT檢測的電阻法與激光法各自優(yōu)越性的適用范圍還需要更多的實驗和數(shù)據(jù)加以論證。綜上分析可見XE-2100全自動血細胞分析儀PLT相關參數(shù)結合其直方圖在判斷低值PLT標本計數(shù)準確性方面具有一定的參考價值。

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10.3969/j.issn.1009-0754.2015.06.029

2015-03-20)

(本文編輯:張陣陣)

201306 上海,上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院東院檢驗科

杜玉珍,電子信箱:duyuzhen2005@163.com