李兵，盧汝梅，黃志其，潘立衛(wèi)，閻莉

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530001；2.河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，河池 546300)

·藥物制劑與藥品質(zhì)量控制·

九龍盤(pán)藥材質(zhì)量控制*

李兵1，盧汝梅1，黃志其1，潘立衛(wèi)2，閻莉1

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530001；2.河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，河池 546300)

目的 建立壯藥九龍盤(pán)藥材的質(zhì)量控制方法。方法 采用薄層色譜法對(duì)九龍盤(pán)進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定其中沒(méi)食子酸的含量，色譜柱為Aichrom Reliasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(4：96)，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，柱溫26 ℃。結(jié)果 九龍盤(pán)藥材薄層色譜鑒別特征明顯，專(zhuān)屬性強(qiáng)；沒(méi)食子酸進(jìn)樣量在0.08～0.56 μg之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=1.000 0)，平均加樣回收率101.12%，RSD 2.20% (n=6)。結(jié)論 所建立的定性定量測(cè)定方法簡(jiǎn)單可行，準(zhǔn)確可靠，可用于九龍盤(pán)藥材的質(zhì)量控制參考。

九龍盤(pán)；沒(méi)食子酸；質(zhì)量控制

壯藥九龍盤(pán)為蓼科植物金線草[Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier]的全草，具有涼血止血、清熱利濕、散瘀止痛之功效。主治咳血、吐血、便血、血崩、痢疾、胃痛、經(jīng)期腹痛、跌打損傷、風(fēng)濕痹痛、癰腫等癥[1-2]。九龍盤(pán)在廣西壯族自治區(qū)多有分布，是壯醫(yī)臨床常用解毒藥。該藥具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗凝血等藥理作用[3]，但其化學(xué)成分的研究筆者未見(jiàn)報(bào)道。文獻(xiàn)顯示，同屬植物短毛金線草中含有沒(méi)食子酸、(-)-兒茶-精、(-)-表兒茶精、(-)-表兒茶精-3-O-沒(méi)食子酸酯、原矢車(chē)菊素等酚類(lèi)成分[2]。筆者通過(guò)化學(xué)成分初步研究，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的九龍盤(pán)藥材中均含有沒(méi)食子酸，該成分味澀，具有收斂、止血、抑制白念珠菌生物膜[4]等作用，與九龍盤(pán)的藥效具有一定的相關(guān)性，如臨床上常用的涼血止血藥地榆飲片就測(cè)定沒(méi)食子酸的含量來(lái)控制質(zhì)量[5]。目前沒(méi)食子酸的測(cè)定方法較多，主要是通過(guò)高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定，如阿米樂(lè)努西達(dá)日蜜膏中沒(méi)食子酸的含量測(cè)定[6]、反相高效液相色譜法測(cè)定柿蒂中沒(méi)食子酸的含量[7]等。筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用沒(méi)食子酸對(duì)照品，用薄層色譜法對(duì)不同產(chǎn)地九龍盤(pán)藥材進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法測(cè)定其中沒(méi)食子酸的含量，建立九龍盤(pán)藥材的質(zhì)量控制方法，以期為其質(zhì)量控制和制劑開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-20A高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器)；Aichrom Reliasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。Millipore Simplicity- 185 超純水儀( 美國(guó)密里博公司)。天平(德國(guó)塞多利斯BP211D，感量：0.1 mg)。

1.2 試藥 沒(méi)食子酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110831-200803，含量≥98%)；水為自制超純水，甲醇(色譜純，批號(hào)：A452-4)、乙腈(色譜純，批號(hào)：A998-4)均購(gòu)買(mǎi)于西隴化工股份有限公司。廣西不同產(chǎn)地九龍盤(pán)藥材(表1)，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為蓼科植物金線草[Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier]的全草，標(biāo)本保存于廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室。

表1 10批不同產(chǎn)地九龍盤(pán)藥材及其沒(méi)食子酸含量測(cè)定結(jié)果

Tab.1 Determination results of galli acid content in 10 batches ofAntenoronfiliformefrom different origins

序號(hào)產(chǎn)地批號(hào)沒(méi)食子酸含量/(mg·g-1)JLP1廣西南寧市上林縣西燕鎮(zhèn)201106220．27JLP2廣西南寧市茅橋植物園201106170．71JLP3廣西南寧市武鳴縣大明山頂201107050．35JLP4廣西南寧市武鳴縣大明山腳201010270．72JLP5廣西玉林市桂平縣金田鄉(xiāng)201104111．21JLP6廣西桂林市金秀縣金秀鎮(zhèn)201105261．12JLP7廣西南寧市水街201107251．01JLP8廣西桂林市金秀縣圣塘山201107250．81JLP9廣西梧州市藤縣平福鄉(xiāng)201103201．68JLP10廣西桂林市金秀縣三角鄉(xiāng)201104101．28

2 方法與結(jié)果

2.1 九龍盤(pán)藥材的薄層色譜鑒別

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取沒(méi)食子酸對(duì)照品2.1 mg，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取九龍盤(pán)藥材粉末(過(guò)2號(hào)篩網(wǎng))約2 g，置錐形瓶，加水50 mL，密塞，超聲提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤爰状? mL溶解，作為供試品溶液。

2.1.3 沒(méi)食子酸的薄層鑒別 按“2.1.2”項(xiàng)制備10批不同產(chǎn)地藥材的供試品溶液，在高效薄層硅膠G板(青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司)點(diǎn)樣，以三氯甲烷：乙酸乙酯：甲酸(5：4：1)為展開(kāi)劑，噴5%氯化鐵(FeCl3)乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，重復(fù)性較好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 九龍盤(pán)藥材中沒(méi)食子酸含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Aichrom Reliasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(4：96)；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm，流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫。理論板數(shù)按沒(méi)食子酸計(jì)算應(yīng)不少于5 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取沒(méi)食子酸對(duì)照品4.0 mg，精密稱(chēng)定，加甲醇使溶解并稀釋至100 mL，搖勻，即得每毫升含40 μg的對(duì)照品溶液。

1.JLP-4；2.JLP-1 ；3.JLP-2；4.JLP-3；5.JLP-7；6.JLP-6；7.沒(méi)食子酸對(duì)照；8.空白溶劑；9.JLP-9；10.JLP-5；11.JLP-10；12.JLP-8

圖1 不同產(chǎn)地九龍盤(pán)藥材薄層色譜圖

1.JLP-4；2.JLP-1；3.JLP-2；4.JLP-3；5.JLP-7；6.JLP-6；7.Gallic acid standard；8.Blank solvent；9.JLP-9；10.JLP-5；11.JLP-10；12.JLP-8

Fig.1 TLC ofAntenoronfiliformefrom different origins

2.2.3 供試品溶液的制備 取九龍盤(pán)藥材粉末約2 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷稱(chēng)質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 方法學(xué)考察

2.2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 在“2.2.1”項(xiàng)的色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，14.0 μL，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3×106X-6 070.9(r=1.000 0)，結(jié)果表明沒(méi)食子酸進(jìn)樣量在0.08～0.56 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品試液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.2.1” 項(xiàng)色譜條件分別測(cè)其峰面積值，計(jì)算得RSD值為2.35%，表明所用儀器精密度良好。

2.2.4.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批(批號(hào)：20110622)九龍盤(pán)藥材，按“2.2.3”項(xiàng)下的方法制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測(cè)定，沒(méi)食子酸的平均含量為0.28 mg·g-1，RSD為2.44%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批(批號(hào)：20110622)九龍盤(pán)藥材，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，常溫保存，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件，分別在放置0，2，4，6，8，12 h后進(jìn)樣10 μL測(cè)定。結(jié)果沒(méi)食子酸的平均含量為0.30 mg·g-1，RSD為4.48%(n=6)。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品約1 g(批號(hào)：20110622)，精密稱(chēng)定，再分別精密加入0.31 mg·mL-1沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液1 mL，按“2.2.3”項(xiàng)方法平行制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件，分別測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果平均加樣回收率為101.12%，RSD 2.20%。

2.2.5 樣品含量測(cè)定 取九龍盤(pán)藥材粗粉各約2 g，精密稱(chēng)定，按“2.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測(cè)定，以峰面積計(jì)算沒(méi)食子酸的含量。同一批次藥材平行測(cè)定3份，取平均值。對(duì)照品色譜圖及樣品色譜圖分別見(jiàn)圖2，3；10批不同產(chǎn)地九龍盤(pán)藥材的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

1.沒(méi)食子酸

3 討論

本實(shí)驗(yàn)含量測(cè)定的指標(biāo)成分為沒(méi)食子酸，考慮到?jīng)]食子酸呈酸性且極性較大，選用水溶液作為提取溶劑，將水提取液進(jìn)行HPLC分析，發(fā)現(xiàn)提取液較雜質(zhì)干擾少，分離較好，提取率高，且溶劑價(jià)廉易得，安全無(wú)毒，操作方便，故選擇水作為提取溶劑。

1.沒(méi)食子酸

Fig.3 HPLC chromatograms ofAntenoronfiliforme

從10批不同產(chǎn)地九龍盤(pán)中沒(méi)食子酸含量測(cè)定結(jié)果可以看出，產(chǎn)地對(duì)藥材中沒(méi)食子酸的含量有明顯影響，其中含量最高的為廣西梧州市藤縣平福鄉(xiāng)樣品(1.68 mg·g-1)，最低的為廣西南寧市上林縣西燕鎮(zhèn)樣品(0.27 mg·g-1)。

筆者在本實(shí)驗(yàn)所采用方法簡(jiǎn)單可行，準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，重現(xiàn)性好，建立了壯藥九龍盤(pán)藥材的薄層鑒別和含量測(cè)定方法，可為九龍盤(pán)藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制提供指導(dǎo)。

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志(第25卷)[M].北京：科學(xué)出版社，1995：106-108.

[2] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：627.

[3] 黃勇其，駱紅梅，陳秀芬，等.金線草藥理作用初步研究[J].中成藥，2004，26(11)：918-921.

[4] 汪長(zhǎng)中，程惠娟，官妍，等.沒(méi)食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2009，34(9)：1137-1140.

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DOI 10.3870/yydb.2015.03.021

Quality Control ofAntenoronfiliforme

LI Bing1，LU Rumei1， HUANG Zhiqi1， PAN Liwei2， YAN Li1

(1.PharmaceuticalCollege，GuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530001，China；2CollegeofChemistryandBiologicalEngineering,HechiUniversity，Hechi546300，China)

Objective To establish the quality control method forAntenoronfiliforme. MethodsAntenoronfiliformewas identified by TLC，and the content of gallic acid was determined by HPLC.The chromatographic conditions were as follows: Aichrom Reliasil C18column (4.6 mm×250 mm，5 μm) was used with mobile phase consisted of acetonitrle-0.1% phosphoric acid(4：96)，the flow rate was 1.0 mL·min-1，and the detection wavelength was 270 nm. Results TLC identification forAntenoronfiliformewas highly specific.Gallic acid content had a good linearity in the range of 0.08-0.56μg (r=1.000 0).The average recovery was 101.12% and RSD was 2.20% (n=6). Conclusion The method is simple， feasible，and reproducible，and can be used for the quality control ofAntenoronfiliforme.

Antenoronfiliforme;Gallic acid;Quality control

2014-03-07

2014-04-20

*廣西自然科學(xué)基金創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目“中藥新藥基礎(chǔ)研究”(2011GXNSFF018006)；廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局項(xiàng)目(MZY2010011)

李兵(1982-)，男，廣西梧州人，講師，碩士，主要從事中藥化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究。E-mail：gxlb0910@163.com。

盧汝梅(1969-)，女，廣西陸川人，教授，博士，主要從事中藥化學(xué)成分和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：lrm1969@163.com。

R286；R927.1

B

1004-0781(2015)03-0358-03