李婕，徐風(fēng)華

(解放軍總醫(yī)院藥品保障中心制劑室，北京 100853)

保元抗癌口服溶液清除超氧自由基與DPPH作用

李婕，徐風(fēng)華

(解放軍總醫(yī)院藥品保障中心制劑室，北京 100853)

保元抗癌口服溶液；自由基；電子自旋共振

1 材料與方法

1.1 試劑 保元抗癌口服溶液(解放軍總醫(yī)院制劑室提供，批號：20120501，每支10 mL)。DPPH(批號：STBC5115V，含量：97%)、5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(5，5-dimethyl- 1-pyrroline-N-oxide，DMPO，批號：MKBK3796V，含量：97%) 、黃嘌呤(xanthine，批號：097K5307V，含量：99.5%)、黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，批號：SLBB1570V，含量：98%)均購自Sigma公司，二乙三胺五乙酸 (diethlene-triaminepentaacetic acid，DETAPAC，批號：20080901，濃度：99%)購自國藥集團(tuán)，二氧六環(huán)等均為國產(chǎn)分析純，純化水(本院制劑室自制，批號：20131021)。

1.2 儀器 JEOLFA-300電子自旋共振儀(日本電子)，Sartorius BP211D天平，MS3型旋渦混合器(德國IKA公司)。

1.3 樣品溶液的配制 精密量取保元抗癌口服溶液原液1 mL，加入50 mL量瓶，加水至刻度，得稀釋50倍的樣品；精密量取保元抗癌口服溶液原液1 mL，加入100 mL量瓶，加水至刻度，得稀釋100倍的樣品；精密量取保元抗癌口服溶液原液1 mL加入250 mL量瓶，加水至刻度，得稀釋250倍的樣品；精密量取上述稀釋100倍的樣品溶液10 mL，加入50 mL量瓶，加水至刻度，得稀釋500倍的樣品；精密量取上述稀釋100倍的樣品溶液5 mL，加入50 mL量瓶，加水至刻度，得稀釋1 000倍的樣品；精密量取上述稀釋100倍的樣品溶液2 mL，加入100 mL量瓶，加水至刻度，得稀釋5 000倍的樣品。

1.4 DPPH的產(chǎn)生與檢測

1.4.2 對DPPH清除的檢測 空白對照：精密量取2 mmol·L-1DPPH的二氧六環(huán)溶液10 μL，置于0.5 mL EP管，加入純化水10 μL，渦旋混合器混勻，毛細(xì)管虹吸樣品，封口膠封口，放入順磁管中，上機(jī)測試。重復(fù)6次，得峰高平均值。

樣品測試：精密量取2 mmol·L-1DPPH二氧六環(huán)溶液10 μL于0.5 mL EP管，分別加入保元抗癌溶液稀釋液10 μL，照上述空白對照方法處理樣品，上機(jī)測試，重復(fù)6次，得峰高平均值。

加入抗氧化劑后，DPPH被捕獲，從ESR譜圖可看出，加入抗氧化劑會降低DPPH峰高度。測量未加樣品時(shí)DPPH的原始信號強(qiáng)度峰高(圖1第3峰峰高表示自由基強(qiáng)度)，加入樣品后自由基信號強(qiáng)度在此基礎(chǔ)上增加或減少，按公式計(jì)算相對清除百分比。根據(jù)峰高變化計(jì)算自由基清除率。DPPH清除率(%)=(H0-Hx)/H0×100%。H0：空白對照組所測值；Hx：保元抗癌口服溶液稀釋液組所測值[1-2]。

2 結(jié)果

2.1 保元抗癌口服溶液對DPPH的清除作用 DMPO捕集DPPH的ESR波譜(圖1) 以第3 峰高(h，mm)表示DPPH的濃度。

本實(shí)驗(yàn)測試了不同濃度保元抗癌口服溶液清除DPPH的情況(表1)。在樣品稀釋50倍時(shí)，體系中的DPPH約98.47%被清除；樣品稀釋1 000～5 000倍時(shí)，DPPH清除率處于平臺期，由17.59%降至10.64%。樣品稀釋50～250倍時(shí)，DPPH清除率由98.47%迅速降至34.69%。隨著保元抗癌口服溶液稀釋倍數(shù)增大，DPPH清除率遞減，具有明顯的量效關(guān)系(圖2)。

圖1 DPPH的ESR波譜

表1 保元抗癌口服溶液對DPPH自由基的清除作用

Tab.1 Scavenging effect ofBaoyuananticancer oral solution on DPPH free radical

原液稀釋倍數(shù)清除率/%原液稀釋倍數(shù)清除率/%5098．4750022．9810075．94100017．5925034．69500010．64

a,b,c,d,e,f.依次稀釋50，100，250，500，1 000和5 000倍；blank.空白對照

圖2 不同濃度保元抗癌口服溶液對DPPH清除作用的ESR波譜

a，b，c，d，e，f stand for 50，100，250，500，1 000 and 5 000 of diluting factor，respetively；blank stands for blank control group

Fig.2 ESR spectrum of the scavenging effect ofBaoyuananticancer oral solution at different concentration on DPPH

Fig.3 ESR spectrum of superoxide radical spin adduct of DMPO produced by riboflavin system

稀釋原液倍數(shù)清除率/%稀釋原液倍數(shù)清除率/%5081．3250067．9010070．29100055．1825068．46500048．42

3 討論

a,b,c,d,e,f.依次稀釋50，100，250，500，1 000和5 000倍；blank.空白對照

a，b，c，d，e，f stand for 50，100，250，500，1 000 and 5 000 of diluting factor，respetively； blank stands for blank control group

綜上所述，保元抗癌口服溶液具有良好的清除自由基和抗氧化能力。

[1] 楊盈，嚴(yán)寶珍，聶舟，等.α-生育酚與自由基DPPH的反應(yīng)機(jī)理研究[J].波譜學(xué)雜志，2008，25(3)：331-336.

[2] 周玥，張娜，林太鳳，等.檸檬汁清除DPPH自由基能力及實(shí)驗(yàn)方法比較研究[J].食品工業(yè)科技，2012，33(16)：176-179.

[3] 郭少英, 程發(fā)峰, 鐘相根，等，黃芩苷的體外抗氧化研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2011，22(1):9-11.

[4] 李艷菊，丁文，李琴山，等.貴州產(chǎn)天冬總皂苷清除氧自由基能力的研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31(7)：874-876.

[5] 熊雙麗，盧飛，史敏娟，等.DPPH自由基清除活性評價(jià)方法在抗氧化劑篩選中的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2012，33(8)：380-383.

[6] LAWTON J S, ARON D S, TANG Z J, et al.Qualitative behavior of vanadium ions in Nafion membranes using electron spin resonance [J].J Membr Sci，2013，428(2013)：38-45.

DOI 10.3870/yydb.2015.03.008

LI Jie，XU Fenghua

(DivisionofPharmaceutics，GeneralHospitalofPeople’sLiberationArmy,Beijing100853，China)

Baoyuananticancer oral solution; Free radicals; Electron spin resonance

2014-02-10

2014-03-22

李婕(1985-)，女，山西臨汾人，碩士，從事藥學(xué)研究。電話：010-66936846，E-mail：lijielizhilizhan@163.com。

R286；R965

A

1004-0781(2015)03-0314-03