李洪民 ，趙嘉詠， 張勝勇，黃麗莉， 王德祥， 趙長民，夏勝利

2009-2012年登封市小腸結(jié)腸炎耶爾森菌分布調(diào)查

李洪民1，趙嘉詠2， 張勝勇1，黃麗莉2， 王德祥1， 趙長民3，夏勝利2

目的 調(diào)查登封地區(qū)家畜家禽小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染狀況。方法 采集家畜家禽新鮮糞便分離小腸結(jié)腸炎耶爾森菌，對分離菌株進(jìn)行生化鑒定、血清分型、生物分型及毒力基因檢測。結(jié)果 從1 285份糞便標(biāo)本中共檢出105株，檢出率8.17%。其中狗17株(17.35%)；豬35株(13.62%)；檢出O∶3血清型12株(13.48%)， O∶5血清型12株(13.48%)，O∶8血清型14株(15.73%)；Ail+、ystA+、yadA+、virF+的菌株占12.36%，ystB+ 的菌株占42.70%。結(jié)論 登封市家禽家畜普遍攜帶小腸結(jié)腸炎耶爾森菌，主要動物宿主為豬和狗，是小腸結(jié)腸炎耶爾森菌人獸共患感染性腹瀉病的重要傳染源。

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌；血清分型；生物分型；毒力基因

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Yersiniaenterocolitica)是一類人獸共患性病原菌，廣泛分布于自然界中，尤其是各種動物宿主[1-3](家畜、家禽、嚙齒動物等)。該菌還是重要的食源性致病菌，很多國家和地區(qū)已將該菌列為常規(guī)的進(jìn)、出口食品檢測項目。我國在20世紀(jì)80年代中期發(fā)生2次大的流行，有500人相繼感染該菌[4-5]。因此在我市家畜家禽中進(jìn)行該菌的病原生物學(xué)監(jiān)測，有著重要的意義。

1 材料與方法

1.1 2009-2012年，在我市各鄉(xiāng)鎮(zhèn)共采集家畜家禽糞便標(biāo)本1 285份。其中，采集雞糞516份、豬糞256份、羊糞177份、牛糞146份、狗糞98份、兔糞46份、鴨糞17份、其他動物糞便28份。

1.2 菌株分離 將我市所采集的標(biāo)本于4 ℃冷增菌培養(yǎng)，分別于7 d、14 d、21 d轉(zhuǎn)種耶爾森菌選擇性培養(yǎng)基,置于25 ℃培養(yǎng)24～36 h,挑取疑似菌落3～5個，分別轉(zhuǎn)種克氏雙糖(KIA)斜面和動力/靛基質(zhì)/尿素半固體培養(yǎng)基，置于25 ℃培養(yǎng)24 h。選擇K/A、不產(chǎn)氣、H2S-、尿素酶+、25 ℃培養(yǎng)動力+、37℃培養(yǎng)動力-、靛基質(zhì)+/-、鏡檢為革蘭陰性桿菌或球桿菌菌落,使用API 20E生化板條進(jìn)行系統(tǒng)生化鑒定。

1.3 生物分型 參照參考文獻(xiàn)[6]的生物分型方法進(jìn)行。

1.4 血清分型 通過玻片凝集試驗對鑒定結(jié)果為小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的菌株進(jìn)行血清學(xué)分型，并設(shè)鹽水對照。

1.5 PCR 用多重PCR檢測技術(shù)對小腸結(jié)腸炎耶爾森菌粘附侵襲點(diǎn)基因(ail)、耐熱性腸毒素基因(ystA)、生物1A型攜帶的腸毒素基因(ystB)、粘附素(yadA)、yop調(diào)節(jié)子轉(zhuǎn)錄活化作用因子(virF)等進(jìn)行檢測。PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離(170V，30 min),參照參考文獻(xiàn)[1]。

2 結(jié) 果

2.1 宿主分布 1 285份糞便標(biāo)本檢出小腸結(jié)腸炎耶爾森菌105株，總檢出率8.17%。各種家禽家畜糞便細(xì)菌檢出情況分別為：豬35株，檢出率13.62%；雞33株，檢出率6.40%；狗17株，檢出率17.35%；牛10株，檢出率6.85%；羊6株，檢出率3.39%；兔2株，檢出率4.35%。其他動物2株，檢出率7.14%。

2.2 血清型分布 89株檢出菌中，O∶3血清型12株(13.48%)，O∶5血清型12株(13.48%)，O∶8血清型14株(15.73%)，未定型51株(57.30%)。各宿主動物攜帶菌血清型詳見表1。

表1 2009-2012年小腸結(jié)腸炎耶爾森菌血清學(xué)分型及生物學(xué)分型

注：弗氏耶爾森菌、克氏耶爾森菌有16株。

Note:YersiniafrederikseniiandYersiniakristenseniihave 16 strains.

2.3 生物型分布 2009—2012年各種家畜家禽的糞便檢出菌中，生物學(xué)分型以1A型為主，有74株，占83.15%(詳見表1)。

2.4 毒力基因 攜帶ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+基因的菌株有11株(12.36%)，ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-基因的菌株有38株(42.70%)，ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-基因的菌株有40株(44.94%)。

3 討 論

3.1 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌是一種在世界各地均有發(fā)現(xiàn)并危害嚴(yán)重的食源性致病菌，無論在發(fā)達(dá)國家還是發(fā)展中國家都有非常高的流行性[7]，已被列入多個國家出入境檢疫的常規(guī)項目。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌廣泛分布于自然界中，尤其是各種家畜家禽。在我市采集的1 285份糞便標(biāo)本中，豬、狗、雞、牛、兔、羊等多種家畜家禽中均有檢出小腸結(jié)腸炎耶爾森菌。這一結(jié)果與文獻(xiàn)資料基本相符[7]。各種動物宿主的檢出率各不相同，狗的檢出率最高(17.35%)，其次是豬(13.62%)。狗和豬為小腸結(jié)腸炎耶爾森菌主要宿主，這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)[2，8]相符。在此基礎(chǔ)上我們對豬做了進(jìn)一步的研究，分別采集屠宰場生豬咽拭子以及屠宰場生豬肛內(nèi)容物作為研究樣本，該研究結(jié)果另文報道。

3.2 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌是一種食源性傳染菌，主要通過糞-口途徑相互傳播。我市家畜家禽養(yǎng)殖農(nóng)戶多，而且以養(yǎng)豬戶最多。監(jiān)測結(jié)果顯示豬的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌帶菌率相對較高。因此在我市人群生活環(huán)境中存在小腸結(jié)腸炎耶爾森菌“傳染源-傳播途徑-易感人群”傳播鏈，具有引起暴發(fā)流行的潛在危險。

3.3 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的血清型眾多，國內(nèi)已報道了58個[8-9]。目前的研究認(rèn)為僅有少數(shù)幾種血清型為致病性菌株，其中O∶3血清型為最常見的一種[10-11]。我們的研究結(jié)果顯示O∶3、O∶5血清型各占13.48%， O∶8血清型占15.73%，顯示致病性小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在我市區(qū)仍有較高的攜帶率，提示我們應(yīng)該加強(qiáng)監(jiān)測，預(yù)防小腸結(jié)腸炎耶爾森菌病在動物間和人間造成感染和暴發(fā)流行。

3.4 毒力基因檢測顯示，我市家畜家禽小腸結(jié)腸炎耶爾森菌攜帶致病毒力基因的占12.36%，具有感染人群的潛在危險。攜帶ystB非致病性毒力基因的占42.70%。相關(guān)文獻(xiàn)報道攜帶ystB非致病毒力基因菌株引起流行的事件。因此，我們在今后的防控工作中應(yīng)重視該環(huán)節(jié)，加大對養(yǎng)殖農(nóng)戶的相關(guān)衛(wèi)生知識宣傳，做好個人防護(hù)工作。

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Investigation on distribution ofYersiniaenterocoliticain Dengfeng from 2009 to 2012

LI Hong-min1,ZHAO Jia-yong2,ZHANG Sheng-yong1, HUANG Li-li2,WANG De-xiang1,ZHAO Chang-min3,XIA Sheng-li2

(1.DengfengCenterforDiseaseControlandPrevention,Dengfeng452470,China; 2.HenanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Zhengzhou450016,China; 3.ZhengzhouEnvironmentalProtectionMonitoringCenter,Zhengzhou450016,China)

To investigate the infection ofYersiniaenterocoliticain Dengfeng City, the strains were isolated from livestock and poultry. The strains were detected with biochemiological methods, serological methods, and virulence genes were detected with PCR. A total of 105 strains ofYersiniaenterocoliticawere classified from 1 285 stool samples, the total isolation rate was 8.17%. Among the total isolated strains, 17 strains were classified from dogs with a rate of 17.35% and 35 strains from pigs with 13.62%. Twelve strains were O∶3 serotype (13.48%), 12 strains were O∶5(13.48%), and 14 strains were O∶8(15.73%).Ail+,ystA+,yadA+ andvirF+ accounted for 12.36%, andystB+ accounted for 42.70%. In conclusion, the pigs and dogs were important animal hosts, which may play the major role in humans' infection.

Yersiniaenterocolitica; serotype; biological type; toxicity gene

Xia Sheng-li, Email:xiasl@hncdc.com.cn

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.020

“十二五重大專項”細(xì)菌性傳染病病原譜流行規(guī)律及變異研究(2013ZX10004203-002-002)

夏勝利， Email:xiasl@hncdc.com.cn

1.登封市衛(wèi)生防疫站,登封 452470； 2.河南省疾病預(yù)防控制中心,鄭州 450016； 3.鄭州市環(huán)境保護(hù)監(jiān)測中心站,鄭州 450007

R378

B

1002-2694(2015)03-0281-03

Supported by the 12thFive-Year Major National Science and Technology Projects of China (No. 2013ZX10004203-002-002)

2014-07-07；

2014-12-02