楊建峰
(亳州市人民醫(yī)院,安徽236800)
痰處理液簡(jiǎn)易液基涂片技術(shù)在痰液檢查診斷肺癌中應(yīng)用
楊建峰
(亳州市人民醫(yī)院,安徽236800)
目的探討痰處理液簡(jiǎn)易液基涂片技術(shù)在痰標(biāo)本診斷肺癌中的臨床應(yīng)用價(jià)值,并與傳統(tǒng)直接涂片法進(jìn)行比較。方法臨床送檢的80例患者痰液標(biāo)本,將同一標(biāo)本分成兩組,一組用傳統(tǒng)直接涂片法制片(A組,80例),另一組對(duì)剩余痰標(biāo)本采用痰處理液聯(lián)合簡(jiǎn)易液基涂片的方法進(jìn)行制片(B組,80例),然后對(duì)兩組所制涂片經(jīng)固定后同時(shí)進(jìn)行常規(guī)蘇木素-伊紅染色,光鏡下對(duì)2種制片方法的診斷結(jié)果和制片質(zhì)量進(jìn)行比較分析。結(jié)果B組80例痰標(biāo)本經(jīng)痰處理液處理后,制作的細(xì)胞涂片背景干凈,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰,檢測(cè)出癌和可疑癌共64例,與臨床的符合率為80.0%,A組傳統(tǒng)涂片中檢測(cè)出癌和可疑癌共43例,與臨床的符合率為53.8%,二者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論痰處理液簡(jiǎn)易液基涂片法較傳統(tǒng)直接涂片法更能有效地提高痰標(biāo)本癌細(xì)胞的檢出率及制片質(zhì)量,具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。
痰/細(xì)胞學(xué); 腫瘤/病理學(xué); 標(biāo)本制備; 染色與標(biāo)記; 痰處理液; 液基涂片; 肺
痰細(xì)胞學(xué)檢查是肺癌診斷中最便捷、最經(jīng)濟(jì)的診斷方法,具有簡(jiǎn)便、安全、無痛苦等優(yōu)點(diǎn),可以大致判斷腫瘤的組織學(xué)類型,而癌腫的組織學(xué)類型對(duì)于肺癌的治療很重要。由于肺癌活檢困難,再加上影像學(xué)檢查在早期缺乏足夠的特異性,因此某些時(shí)候痰細(xì)胞學(xué)檢查在診斷中可起到?jīng)Q定性的作用。傳統(tǒng)的痰細(xì)胞學(xué)一直用直接涂片法,但由于痰液中含有大量黏液,涂片厚薄不均,痰標(biāo)本中的細(xì)胞成分不易分離,涂片中細(xì)胞量減少,大量黏液的存在使涂片背景不干凈,制片質(zhì)量不佳而影響細(xì)胞觀察,致使痰涂片癌細(xì)胞的陽(yáng)性檢出率降低,假陰性率增高,影響肺癌的診斷,多數(shù)痰細(xì)胞學(xué)的漏診與誤診始于低劣的制片和染色技術(shù)。因此,高質(zhì)量的痰細(xì)胞學(xué)涂片及染色是獲得準(zhǔn)確診斷的重要環(huán)節(jié)。重視痰細(xì)胞學(xué)的制作質(zhì)量無疑是提高痰細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性檢出率的重要保證。為提高痰細(xì)胞學(xué)檢查的制片質(zhì)量,近年來相繼開展了液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)并將其應(yīng)用于痰細(xì)胞學(xué)檢查中,但新柏氏TCT等液基薄層制片技術(shù)所用液基,價(jià)格較貴,制片過程繁瑣,且痰黏液消化效果不理想等,致使國(guó)內(nèi)許多單位未能開展。為此,本研究經(jīng)大量實(shí)驗(yàn),并根據(jù)痰液的性質(zhì),自行研制了“痰處理液”聯(lián)合簡(jiǎn)易液基涂片技術(shù)應(yīng)用于肺癌的篩查和病理診斷工作中,提高了痰檢陽(yáng)性率及工作效率,且使痰標(biāo)本的制片質(zhì)量得到明顯提高?,F(xiàn)報(bào)道如下。
1.1 資料
1.1.1 一般資料 收集本院2013年1月至2015年3月呼吸科、腫瘤科經(jīng)臨床或病理證實(shí)肺癌患者80例,患者晨起漱口后咳出肺深部痰,將痰液收集到可密封塑料盒中送檢。將同一標(biāo)本分成兩組,一組用傳統(tǒng)直接涂片法涂片(A組,80例),另一組剩余標(biāo)本放入自制痰細(xì)胞處理液中經(jīng)處理后制作細(xì)胞涂片(B組,80例)。
1.1.2 痰處理液的成分 乙醇、磷酸鹽、鹽酸溴己新、苯酚、蒸餾水按一定比例混合。
1.1.3 儀器與器材 振蕩儀、離心機(jī)、一次性塑料試管及滴管。
1.2 制片方法
1.2.1 傳統(tǒng)直接涂片法 將塑料盒內(nèi)送檢的痰液,用眼科鑷或竹簽仔細(xì)挑取少許灰白色帶血絲樣病變的可疑痰標(biāo)本,采用推片法制成涂片2張,待涂片微干后,用95%乙醇固定15 min,行蘇木素-伊紅(HE),封片。
1.2.2 痰處理液簡(jiǎn)易液基制片法 取2~3 mL剩余痰液加入放有痰處理液的TCT錐形瓶中,振蕩器震蕩混勻后,靜置20 min,破壞其黏性,充分液化,如混合液中仍有凝結(jié),可再加一些自制痰細(xì)胞處理液,直至黏液溶解。用一次性滴管吸取錐形瓶底部的溶液加入一次性塑料試管中,放入離心機(jī),1 000 r/min離心10 min,去掉上清液,放振蕩器震蕩幾十秒后,用一次性滴管吸出塑料試管底部沉淀涂薄片2張,用95%乙醇固定15 min,行HE或巴氏染色,封片。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料以率表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 A、B組制片質(zhì)量比較 A組傳統(tǒng)直接涂片中黏液及雜質(zhì)較多,紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞較多,背景污穢,細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清晰,厚薄不均,上皮細(xì)胞成堆分布,陽(yáng)性涂片中癌細(xì)胞較少且與上皮混雜重疊,需仔細(xì)尋找辨認(rèn)。而B組痰處理液簡(jiǎn)易液基涂片,鏡下黏液絲溶解,背景較干凈,無黏液及過多的紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞,細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示清晰,細(xì)胞數(shù)量明顯增多,且分散無重疊,陽(yáng)性涂片中癌細(xì)胞分散,形態(tài)清楚,容易辨認(rèn)。見圖1。
圖1 痰標(biāo)本涂片HE染色(HE,10×)
2.2 2種方法檢測(cè)肺癌細(xì)胞的符合率比較 B組80例痰標(biāo)本經(jīng)痰液處理液處理后,制作的細(xì)胞涂片中檢測(cè)出癌和可疑癌共64例,與臨床的符合率為80.0%,A組傳統(tǒng)涂片中檢測(cè)出癌和可疑癌共43例,與臨床的符合率為53.8%。B組痰處理液簡(jiǎn)易液基制片法的符合率高于A組傳統(tǒng)直接涂片法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
為提高痰細(xì)胞學(xué)的制片質(zhì)量及陽(yáng)性率,國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者提出很多方法,比如,物理攪拌乳化痰、多種蛋白分解酶處理痰液、液基薄層制片法處理痰液、多種痰細(xì)胞處理液的應(yīng)用、痰沉渣石蠟包埋等,都有各自的缺點(diǎn)。比如物理攪拌法及蛋白酶處理影響細(xì)胞形態(tài),同時(shí)須特殊儀器設(shè)備,耗材試劑;液基薄層制片法價(jià)格較貴,制片過程繁瑣,痰液溶解劑有時(shí)易使細(xì)胞變性;細(xì)胞處理液制片時(shí)需要特殊的制片盒或制片夾,同時(shí)溶液配制成分復(fù)雜,須特殊藥品、試劑,增加成本,費(fèi)時(shí)耗力;痰沉渣石蠟包埋制片時(shí)間長(zhǎng),并且不能消除黏液、炎性細(xì)胞及紅細(xì)胞的干擾[1-11]。本研究所制備的痰處理液與其他痰細(xì)胞處理液原理基本相同,鹽酸溴己新溶解痰中黏液,固定液及緩沖液防止細(xì)胞自溶,然后離心沉淀收集細(xì)胞。與其他方法比較有以下特點(diǎn):(1)本處理液成分簡(jiǎn)單、常見,價(jià)格低廉,制備方便,無特殊要求,一次制備的溶液能處理100多個(gè)痰標(biāo)本,損耗低、耐用;(2)簡(jiǎn)易液基制片法與其他制片法比較能免去部分耗材、儀器設(shè)備,同時(shí)免去很多步驟,所以制片時(shí)間有所縮短,費(fèi)用大大降低。與直接涂片法相比固然增添了溶解黏液、離心涂片這些步驟,但制片質(zhì)量及陽(yáng)性率的提高足以彌補(bǔ)這部分工作量的增加。基于以上2個(gè)特點(diǎn)本方法尤其適用于基層醫(yī)院。由于基層醫(yī)院受基礎(chǔ)設(shè)施、經(jīng)費(fèi)、技術(shù)、人員等因素的限制,許多條件要求較高或較為昂貴的檢查項(xiàng)目無法開展,對(duì)肺部占位性病變的診斷方法很有限。痰脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷技術(shù)具有經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、無痛苦、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn),不需要貴重儀器,適合在基層醫(yī)院和社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心推廣[12]。
除制片質(zhì)量因素外,在實(shí)際工作中還存在一些問題,影響痰細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性率的提高,作者通過工作實(shí)踐總結(jié)了以下2點(diǎn):(1)留取痰液不合格,不是真正支氣管分泌物或肺深部痰,有些甚至是帶有食物碎屑的唾液,鏡下只有鱗狀上皮細(xì)胞,要獲得合格痰液有賴于臨床醫(yī)生和護(hù)士對(duì)患者的指導(dǎo)和教育。樹立高度的責(zé)任心,認(rèn)真詳細(xì)講解痰標(biāo)本的正確留取方法和注意事項(xiàng)。(2)痰液送檢及處理不及時(shí),在采集標(biāo)本時(shí)要求痰液新鮮,30 min至1 h送檢及處理,不然極易引起褪變,但實(shí)際工作中往往是早上送檢的痰標(biāo)本等到下午連同胸、腹腔積液等其他標(biāo)本集中成批處理、制片,這樣導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生自溶,結(jié)構(gòu)不清,或者涂片中有癌細(xì)胞,但由于數(shù)量少或癌細(xì)胞異型性不明顯,而誤診為陰性。這2種情況造成的假陰性不是真正的陰性,應(yīng)避免,而且可以避免[13]。
所謂假陰性是指肯定為肺癌的病例,在送檢標(biāo)本合格的條件下,多次細(xì)胞學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),有20%的肺癌病例痰涂片的確無癌細(xì)胞,即使痰液合格,處理及時(shí),多次重復(fù)檢查,認(rèn)真負(fù)責(zé)閱片,仍然是陰性。這是由于肺癌晚期,隨著腫瘤長(zhǎng)大,支氣管腔逐漸變狹小,尤其是外周型肺癌,當(dāng)腫瘤達(dá)到一定體積后狹小的支氣管管腔很容易發(fā)生閉塞,使脫落的癌細(xì)胞無法隨痰排出,造成假陰性。我國(guó)細(xì)胞學(xué)檢查的病例,相當(dāng)一部分是中晚期肺癌,所以細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性率總是在70%~80%,很難提高。這種陰性是細(xì)胞方法上的局限性,非人力所能解決的。為及時(shí)確定診斷,應(yīng)積極考慮作細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)檢查,以彌補(bǔ)脫落細(xì)胞學(xué)的局限性[13]。
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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.19.036
B
1009-5519(2015)19-2978-02
2015-07-22)
楊建峰(1981-),男,安徽亳州人,碩士研究生,主治醫(yī)師,主要從事外科病理學(xué)工作;E-mail:yldts55.love@163.com。