何文杰

摘 要 用3%鏈霉素的MS溶液處理莖段，可較好地降低污染率，對(duì)內(nèi)生菌起到抑制的作用。青蘋果蔓綠絨啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS+BA5.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L時(shí)，效果最好。增殖培養(yǎng)基為MS+BA0.3 mg/L+NAA 0.01 mg/L時(shí)，效果最好。

關(guān)鍵詞 青蘋果蔓綠絨；組織培養(yǎng)；移栽

中圖分類號(hào)：S682.36 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-890X（2015）09-008-02

青蘋果蔓綠絨（Philoendron scandens Subsp）是多年生蔓性觀葉植物，葉片大、質(zhì)地厚而晶瑩濃綠[1]。因其清雅飄逸，株形美觀大方而深受人們喜愛。生產(chǎn)上用側(cè)芽莖段扦插繁殖率太低，且浪費(fèi)種源，為此，對(duì)青蘋果蔓綠絨進(jìn)行組織培養(yǎng)和快速繁殖，以提高其成活率[2]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

花卉市場(chǎng)上購買的健壯盆栽，株高1.2 m。購入后放在水簾大棚內(nèi)，待連續(xù)晴天時(shí)，截取約3 cm帶腋芽的莖段作為外植體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體預(yù)處理

選用健壯盆栽植株，切取帶腋芽芽莖段，切除葉片及葉柄。將取得的莖段分為兩組，每組80個(gè)莖段。A組切取約3 cm帶腋芽莖段，自來水沖洗30 min，再用洗潔精浸洗2遍，自來水沖洗干凈。B組切取6～8cm帶腋芽莖段，放在3%鏈霉素+MS溶液中30 d，每7 d換一次溶液，30 d后取出，再將莖段切成約3 cm長，沖洗30 min，再用洗潔精浸洗2遍，自來水沖洗干凈。

1.2.2 無菌系的建立

A、B兩組預(yù)處理后，轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái)，無菌水沖洗3次，75%酒精浸洗60 s，無菌水沖洗3次，切去莖段兩端褐化的切面。之后放入0.2%汞溶液中（加2～3滴吐溫-20）消毒20～30 min，無菌水沖洗6～7次。切取1～2 cm帶腋芽的莖段，放入啟動(dòng)培養(yǎng)基中，啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，NAA濃度不變，6-BA分為4個(gè)濃度階梯，每個(gè)濃度階梯接種20個(gè)莖段，50 d后觀察腋芽萌動(dòng)情況。待腋芽生長點(diǎn)萌發(fā)，分化出不定芽后，轉(zhuǎn)到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)繁，增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，NAA濃度不變，6-BA濃度分為3個(gè)濃度階梯，每個(gè)階梯接種30瓶，40 d觀察叢芽生長情況。將較大的苗轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基中壯苗生根，30 d后可將帶1～3條根的健壯苗進(jìn)行移栽。

1.2.3 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)室溫度（26±2） ℃，光照強(qiáng)度1 000～2 000 lx，每天光照12 h。

啟動(dòng)培養(yǎng)基：MS+6-BA 2.0～5.0mg/L +NAA0.2mg/L；增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA 0.5～1.0mg/L+NAA0.01mg/L；壯苗和生根培養(yǎng)基：1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+活性炭2g/L。

以上啟動(dòng)培養(yǎng)基和增殖培養(yǎng)基中均添加3%白砂糖和0.58%卡拉膠，pH為5.8，壯苗生根培養(yǎng)基中添加2%白砂糖和0.68%卡拉膠，pH為5.8。

1.2.4 試管苗壯苗培養(yǎng)與移栽上盆

將生根瓶苗移出玻璃瓶，用清水洗凈附著的培養(yǎng)基，在 1 000倍多菌靈溶液中浸泡1 min，然后移栽至泥炭土和珍珠巖（5∶l）的混合基質(zhì)中，用遮陰棚覆蓋，光照保持在5 000 lx以下，30 d后光照逐漸增強(qiáng)，保持在8 000 lx以下。進(jìn)行正常的肥、水管理，相對(duì)濕度保持在80%～90%，溫度為20～25 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同預(yù)處理對(duì)無菌系建立的影響

根據(jù)兩種不同的預(yù)處理方法，探索預(yù)處理措施對(duì)降低污染率的作用。由表1可知，B組的污染率比A組低，青蘋果蔓綠絨的內(nèi)生菌污染比較嚴(yán)重，用3%鏈霉素的MS溶液處理30 d的莖段，污染率有所降低，3%鏈霉素的MS溶液對(duì)內(nèi)生菌起到抑制的作用。

2.2 啟動(dòng)培養(yǎng)基的篩選

根據(jù)莖段在啟動(dòng)培養(yǎng)基上的生長表現(xiàn)，篩選出最佳細(xì)胞分裂素濃度水平。由表2可知，培養(yǎng)50 d后，6-BA濃度為2.0 mg/L時(shí)，腋芽萌發(fā)率最低，為12%，6-BA濃度為5.0 mg/L時(shí)，腋芽萌發(fā)率最高，為52%。腋芽萌發(fā)率在6-BA濃度為2.0～5.0 mg/L的范圍內(nèi)，隨6-BA濃度增大而增大。

2.3 增殖培養(yǎng)基的篩選

根據(jù)叢生芽在增殖培養(yǎng)基上的生長情況，篩選出最有利叢生芽生長的細(xì)胞分裂素濃度水平。由表3可知，6-BA濃度在0.3～1.0 mg/L的范圍內(nèi)，隨濃度增大，叢生芽越多，小苗葉片越小，葉片顏色越淺，愈傷團(tuán)塊越大，愈傷團(tuán)塊玻璃化趨勢(shì)越明顯，當(dāng)6-BA濃度為0.3 mg/L時(shí)，叢生芽小苗生長狀況最健壯；當(dāng)-BA濃度為1.0mg/L時(shí)，叢生芽小苗弱小，愈傷團(tuán)塊生長迅速，有玻璃化趨勢(shì)。

2.4 試管苗壯苗培養(yǎng)與移栽上盆

將生長健壯的小苗接種在1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖20 g/L+活性炭2 g/L的培養(yǎng)基中，30 d后可長出新根，生根率為92%。將生根瓶苗移出玻璃瓶，用清水洗凈附著的培養(yǎng)基，在1 000倍多菌靈溶液中浸泡1 min，然后移栽至泥炭土和珍珠巖（5∶l）的混合基質(zhì)中，用遮陰棚覆蓋，光照保持在5 000 lx以下，30 d后光照逐漸增強(qiáng)，保持在8000 lx以下。進(jìn)行正常的肥、水管理，相對(duì)濕度保持在80%～90%，溫度為20～25℃，成活率可達(dá)95%以上。

3 結(jié)論與討論

青蘋果蔓綠絨外植體預(yù)處理，用3%鏈霉素的MS溶液處理莖段，可較好地降低污染率，對(duì)內(nèi)生菌起到抑制的作用。每7 d應(yīng)更換一次新鮮溶液，防止莖段腐爛，處理30 d后莖段的腋芽可觀察到萌動(dòng)，腋芽生長膨脹。

青蘋果蔓綠絨最佳啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS+BA5.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，50 d后，腋芽萌發(fā)率達(dá)52%。6-BA的濃度越高，腋芽萌發(fā)得越早，在萌發(fā)后一段時(shí)間內(nèi)，持續(xù)使用高濃度的細(xì)胞分裂素，愈傷團(tuán)塊生長旺盛，芽點(diǎn)增多，可提高增殖速率[3]。

青蘋果蔓綠絨最佳增殖培養(yǎng)基為MS+BA0.3 mg/L+NAA 0.01 mg/L ，當(dāng)使用高濃度細(xì)胞分裂素一段時(shí)間后，應(yīng)適當(dāng)降低細(xì)胞分裂素濃度，叢生芽在低濃度細(xì)胞分裂素的條件下，才可生長出健壯的小苗，愈傷團(tuán)塊不出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象[4]。

生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖20 g/L+活性炭2 g/L，瓶苗生根率92 %。組培苗按移栽程序移栽，成活率達(dá)95%以上。

參考文獻(xiàn)

[1]朱根發(fā)，張遠(yuǎn)能.花葉萬年青的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，1999，7（3）：243-247.

[2]莫饒，鄧小江.蔓綠絨的離體繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，1996（5）：359.

[3]朱根發(fā).蔓綠絨屬觀賞植物的組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)[J].植物學(xué)通報(bào)，2003（3）：342-345

[4]魏翠華，蔡宣梅.圓葉蔓綠絨快速繁殖條件的優(yōu)化[J].亞熱帶植物通訊，2000，29（1）：26-30.

（責(zé)任編輯：趙中正）