溫洪鵬

(廉江市人民醫(yī)院骨科，廣東 廉江 524400)

老年骨肉瘤術(shù)后組織中纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白20、癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子6和抑癌基因的表達(dá)及意義

溫洪鵬

(廉江市人民醫(yī)院骨科，廣東 廉江 524400)

目的 應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)老年人骨肉瘤患者術(shù)后組織中纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT)20、癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子(CEACAM)6和抑癌基因PTEN(PTEN)的表達(dá)，研究三種蛋白在不同臨床特征中的表達(dá)差別。方法 病理確診的69例老年人骨肉瘤術(shù)后組織作為觀察組，選擇50例外傷后切除的正常骨組織作為對(duì)照組，采用免疫組化SP法檢測(cè)兩組中IFT20、CEACAM6和PTEN的表達(dá)。結(jié)果 兩組中IFT20、CEACAM6和PTEN表達(dá)的陽(yáng)性率差別顯著，觀察組中IFT20、CEACAM6和PTEN表達(dá)的陽(yáng)性率均與腫瘤的最大徑線、有無(wú)軟組織浸潤(rùn)、有無(wú)轉(zhuǎn)移及不同Ennecking分期有關(guān)。相關(guān)分析顯示IFT20和PTEN的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論 老年人骨肉瘤術(shù)后組織IFT20和CEACAM6高表達(dá)，PTEN低表達(dá)，三者異常表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，IFT20可能通過(guò)調(diào)節(jié)抑癌基因PTEN的表達(dá)發(fā)揮生物學(xué)作用。

骨肉瘤；纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT)20；癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子(CEACAM)6；抑癌基因(PTEN)

骨肉瘤發(fā)病率較低，約30%發(fā)生在40歲以上的患者，且要考慮到相關(guān)促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的因素〔1〕。老年人骨肉瘤的發(fā)生中常具有特征性，尤其是老年人常伴有退行性改變，因此相關(guān)蛋白表達(dá)失調(diào)的促進(jìn)作用更明顯〔2〕。纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(IFT)20高表達(dá)時(shí)可以調(diào)控腫瘤細(xì)胞的分化過(guò)程，并可以引起細(xì)胞增殖加快，抑癌基因表達(dá)失調(diào)等生物學(xué)過(guò)程〔3，4〕。癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子(CEACAM)6是機(jī)體特征性的黏附分子調(diào)節(jié)蛋白，在腫瘤中表達(dá)升高，不僅可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附作用，還對(duì)細(xì)胞增殖和血管生成有一定影響〔5,6〕。抑癌基因(PTEN)可以對(duì)細(xì)胞周期及凋亡有明顯的影響，進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng)及進(jìn)展〔7,8〕。本文分析老年骨肉瘤術(shù)后組織中IFT20、CEACAM6和PTEN的表達(dá)特征及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 近5年我院經(jīng)病理學(xué)確診為骨肉瘤的老年患者作為觀察組，均符合WHO中《軟組織與骨腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)》中骨肉瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，共69例，均留取術(shù)后組織，年齡60～89〔平均(67.8±6.9)〕歲。收集50例老年人外傷后切除的碎骨組織作為對(duì)照組，病理學(xué)證實(shí)為正常板層骨，年齡60～78〔平均(66.5±5.8)〕歲。兩組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無(wú)。

1.2 IFT20、CEACAM6和PTEN蛋白的檢測(cè) IFT20、CEACAM6和PTEN試劑均為濃縮液，在正式免疫組化檢測(cè)前，三種蛋白均按不同稀釋比例進(jìn)行相關(guān)預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇抗體表達(dá)最理想的濃度用于正式實(shí)驗(yàn)。IFT20、CEACAM6和PTEN蛋白檢測(cè)的正式實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化SP法，采用DAB顯色方法，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的步驟操作，做好質(zhì)量控制，減少誤差。

1.3 IFT20、CEACAM6和PTEN結(jié)果的判讀 IFT20、CEACAM6和PTEN的顯色部位均為細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)中-強(qiáng)的棕黃色顆粒認(rèn)定為陽(yáng)性細(xì)胞(弱陽(yáng)性細(xì)胞不計(jì)為陽(yáng)性細(xì)胞)，選擇10個(gè)染色密集的陽(yáng)性細(xì)胞區(qū)域，計(jì)數(shù)10個(gè)高倍(400倍)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的百分率，取平均值作為最終統(tǒng)計(jì)學(xué)的結(jié)果。以陽(yáng)性率≥5%計(jì)為陽(yáng)性，陽(yáng)性率<5%計(jì)為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件行χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組中IFT20、CEACAM6和PTEN蛋白表達(dá)的比較 觀察組中IFT20(40例)、CEACAM6(39例)的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于對(duì)照組(5例、4例，均(P<0.000 1)，PTEN的陽(yáng)性表達(dá)明顯低于對(duì)照組(16例 vs 47例，P<0.000 1)。

2.2 觀察組不同臨床特征中IFT20、CEACAM6和PTEN表達(dá)陽(yáng)性率的比較 觀察組中三種蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率均在腫瘤的最大徑線、軟組織浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及Ennecking分期有明顯差別。見(jiàn)表1。

2.3 IFT20、CEACAM6和PTEN的相關(guān)性分析 觀察組中IFT20與PTEN(r=-0.49，P=0.047 5)的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，其他指標(biāo)間未見(jiàn)明顯的相關(guān)性(P>0.05)。

表1 觀察組不同臨床特征中IFT20、CEACAM6和PTEN表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

3 討 論

老年人骨肉瘤發(fā)生和發(fā)展常與退行性改變有關(guān)，其中引發(fā)腫瘤形成的主要是機(jī)體和蛋白表達(dá)的失調(diào)，此時(shí)不僅引起抑癌基因的丟失，同時(shí)可以有效活化癌基因，使腫瘤的侵襲和生長(zhǎng)能力明顯增強(qiáng)〔9〕。老年人骨肉瘤一般是體積大，常超過(guò)5 cm，以干骺端為中心，形成肉質(zhì)或質(zhì)硬的腫瘤，它常破壞骨皮質(zhì)并與軟組織包塊相關(guān)聯(lián)。也有少數(shù)骨型骨肉瘤可以呈灰褐色和不規(guī)則的顆粒狀，有些則致密、硬化、偏黃白色，伴不同程度的鈣化，切面呈魚(yú)肉樣或有黏性物質(zhì)。腫瘤大小、分期、是否有轉(zhuǎn)移可以用于骨肉瘤預(yù)后的判斷，此種進(jìn)展過(guò)程均與腫瘤的蛋白表達(dá)失調(diào)有關(guān)〔10〕。IFT存在于真核細(xì)胞表面的纖毛和鞭毛中，具有正向和逆向轉(zhuǎn)運(yùn)功能，如果IFT 缺陷，會(huì)產(chǎn)生許多與纖毛相關(guān)的疾病〔11,12〕。IFT20與多囊腎的發(fā)生、視神經(jīng)褪行性改變和心臟的發(fā)育有一定關(guān)系〔13〕。IFT20定位于細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)高爾基細(xì)胞器的周圍，使細(xì)胞信號(hào)從高爾基細(xì)胞器傳送到細(xì)胞原纖毛的基底部，并結(jié)合中心粒周圍蛋白后形成嵌合物，使信號(hào)傳遞到細(xì)胞原纖毛的底部。也有研究顯示惡性腫瘤組織內(nèi)IFT20 蛋白高表達(dá)，使細(xì)胞原纖毛的長(zhǎng)度增加，不僅加速細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，還可以有效促進(jìn)細(xì)胞的增殖過(guò)程〔14〕。近來(lái)人們關(guān)注IFT20與腫瘤的關(guān)系，并發(fā)現(xiàn)IFT20是促進(jìn)卵巢腫瘤進(jìn)展的重要蛋白之一〔15〕。CEACAM6是細(xì)胞表面的糖蛋白，也是免疫球蛋白超家族的成員之一，在正常成骨細(xì)胞中表達(dá)低，當(dāng)成骨細(xì)胞增殖活性提高后，CEACAM6的表達(dá)增高，并通過(guò)糖基磷脂酰肌醇連接在細(xì)胞質(zhì)中，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展〔16〕。近年也有學(xué)者認(rèn)為腫瘤中CEACAM6高表達(dá)可以引起間質(zhì)血管的生成，從多種信號(hào)途徑加速腫瘤的形成〔17〕。PTEN不僅具有磷酸酯酶的活性，還具有多種腫瘤生物學(xué)的作用特征〔18〕。有觀點(diǎn)認(rèn)為PTEN可以有效地抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、活化、聚集和黏附作用〔19〕。

本研究提示IFT20和CEACAM6高表達(dá)、PTEN低表達(dá)是促進(jìn)老年人骨肉瘤形成的重要因素。IFT20可能通過(guò)對(duì)Wnt的經(jīng)典信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)節(jié)發(fā)揮生物學(xué)作用，也可能與對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響發(fā)揮生物學(xué)功能。CEACAM6是癌基因，可以直接啟動(dòng)腫瘤的發(fā)生過(guò)程〔20,21〕，而PTEN是抑癌基因，正常情況下高表達(dá)，可以抑制腫瘤的發(fā)生，當(dāng)PTEN表達(dá)下調(diào)或丟失后，正常細(xì)胞的腫瘤抑制作用消失，腫瘤繁殖增快，惡性潛能增加。本研究結(jié)果提示IFT20、CEACAM6和PTEN異常表達(dá)是腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的重要促進(jìn)因素，由于以上因素均為判斷骨肉瘤預(yù)后的臨床指標(biāo)，因此也提示三種蛋白可能是判斷預(yù)后的指標(biāo)，即IFT20和CEACAM6高表達(dá)、PTEN低表達(dá)患者的預(yù)后可能較差。IFT20與PTEN具有協(xié)同效應(yīng)，即IFT20對(duì)骨肉瘤的促進(jìn)作用可能與對(duì)PTEN的作用減弱或消失有密切關(guān)系，此時(shí)IFT20對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展的抑制作用減弱，腫瘤加速生長(zhǎng)和侵襲〔22〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為當(dāng)PTEN對(duì)腫瘤抑制作用減弱后，促腫瘤生長(zhǎng)的基因相對(duì)激活，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、P53等，從而引起細(xì)胞增殖分化失控、凋亡障礙以及血管生成通路異常，加速腫瘤的進(jìn)展〔23〕。

綜上，老年人骨肉瘤術(shù)后組織IFT20和CEACAM6高表達(dá)，PTEN低表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，IFT20可能通過(guò)調(diào)節(jié)抑癌基因PTEN的表達(dá)發(fā)揮生物學(xué)作用。

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〔2013-12-17修回〕

(編輯 苑云杰)

溫洪鵬(1980-)，男，主治醫(yī)師，主要從事骨科疾病研究。

R738.1

A

1005-9202(2015)12-3333-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.067