馮繼紅，馮冬冬，傅仲學

(1.重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院 胃腸外科，重慶 400016；2.安徽省六安市壽縣中醫(yī)院 心內(nèi)科，安徽 六安 232200)

臨床醫(yī)學研究

PRDX1通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進結(jié)腸癌SW480細胞侵襲轉(zhuǎn)移

馮繼紅1，馮冬冬2，傅仲學1

(1.重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院 胃腸外科，重慶 400016；2.安徽省六安市壽縣中醫(yī)院 心內(nèi)科，安徽 六安 232200)

目的 探討過氧化還原酶1 (Peroxiredoxin 1，PRDX1)在結(jié)腸癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化( epithelialmesenchymal transition，EMT) 發(fā)生中的作用及其參與結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的可能機制。方法 通過慢病毒轉(zhuǎn)染使結(jié)腸癌SW480細胞PRDX1過表達并通過Western blot檢測驗證；采用Transwell方法和細胞劃痕實驗檢測細胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力的變化；免疫細胞熒光檢測結(jié)腸癌SW480細胞EMT相關(guān)蛋白Twist1、E-cadherin及Vimentin的表達；Western blot方法檢測EMT轉(zhuǎn)錄因子Twist1、EMT相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin及轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP-9的表達。結(jié)果 轉(zhuǎn)染PRDX1組SW480細胞中PRDX1呈過表達；Transwell法和細胞劃痕實驗顯示過表達PRDX1組細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力較對照組明顯增強；免疫細胞熒光顯示轉(zhuǎn)染PRDX1組細胞其上皮細胞標記E-cadherin明顯下調(diào)，間質(zhì)標記Vimentin及EMT轉(zhuǎn)錄因子Twist1表達明顯上調(diào)；Western blot結(jié)果表明過表達PRDX1組E-cadherin較對照組顯著降低(P<0.01)，而Twist1、MMP-9、N-cadherin及Vimentin較對照組顯著升高(P<0.05)。結(jié)論 PRDX1可促進人結(jié)腸癌SW480細胞EMT的發(fā)生，從而增強結(jié)腸癌SW480細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力。

過氧化還原酶1；結(jié)腸癌；侵襲；轉(zhuǎn)移；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

結(jié)腸癌是世界上最常見惡性腫瘤之一，其發(fā)生率和死亡率位居惡性腫瘤前列[1]。我國結(jié)腸癌發(fā)病率呈穩(wěn)步上升趨勢[2]，近年以8.4%的速度上升，預計在2015年，我國結(jié)腸癌新發(fā)病例將達到31.2萬例，其中男性17.3萬例，女性13.9萬例[3]。由于結(jié)腸癌手術(shù)效果不夠理想，術(shù)后復發(fā)率及轉(zhuǎn)移率均較高，因此，研究結(jié)腸癌遷移侵襲的機制和開發(fā)高效低毒的分子靶向藥物，對結(jié)腸癌防治具有重要意義。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是上皮來源腫瘤細胞獲得侵襲和轉(zhuǎn)移能力的重要生物學過程，在這一過程中，上皮細胞獲得間質(zhì)細胞的特性，侵襲性增加，從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移[4]。

過氧化還原酶1(Peroxiredoxin 1，PRDX1)是過氧化還原蛋白酶超家族(PRDXs)中主要成員之一，又稱為增殖相關(guān)蛋白(proliferation associated protein，PAG)，在結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌等多種腫瘤組織細胞中高表達，與細胞的增殖和分化密切相關(guān)。PRDX1表達上調(diào)可增強腫瘤細胞的抗氧化能力，減少活性氧自由基產(chǎn)生，是腫瘤細胞抗凋亡和化療耐藥的重要原因[5]。近年有研究表明，PRDX1可調(diào)節(jié)TGF-β1誘導的肺腺癌A549細胞EMT，細胞過表達PRDX1后E-cadherin表達顯著下調(diào)，而下調(diào)PRDX1表達后經(jīng)TGF-β1誘導的EMT和細胞侵襲受到抑制[6]。本研究通過初步探討PRDX1對人結(jié)腸癌SW480細胞侵襲、轉(zhuǎn)移及EMT的作用，為臨床尋求理想結(jié)腸癌治療新靶點奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與材料 人結(jié)腸癌細胞株SW480購自中科院上海細胞庫，胎牛血清(FBS)購自Hyclone公司，L-15培養(yǎng)基(Leibovitz’s L-15 Medium)和嘌呤霉素(Puromycin)購自Gibco公司，兔抗人GAPDH單抗、兔抗人PRDX1單抗購自Epitomics公司，E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Twist1及MMP-9抗體購自Santa cruz公司，“SYBR?PrimeSciptTMRT-PCR Kit”購自中國大連寶生物工程有限公司，Lipofectamine2000購自Invitrogen公司，Premix Taq酶、DNA marker均購自TaKaRa公司，ECL發(fā)光試劑盒購自Millipore公司。攜帶增強綠色熒光蛋白基因(EGFP) 和嘌呤霉素(Puromycin)抗性基因的PRDX1及空載對照組慢病毒載體 (Ubi-MCS-EGFP-IRES-Puromycin，GV218)由上海吉凱基因化學技術(shù)有限公司構(gòu)建和包裝。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) SW480細胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清(FBS)的L-15培養(yǎng)基中，在5%的CO2飽和濕度、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。SW480細胞呈單層貼壁生長，每 2～3天用0.25%胰酶消化，以1∶2傳代。SW480細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定，呈對數(shù)生長期時用于實驗。

1.2.2 細胞轉(zhuǎn)染及抗性篩選 SW480細胞準確計數(shù)使其在6孔板均勻平鋪，待細胞匯合率達60%左右，按細胞數(shù)及MOI值(MOI=50)計算所加的病毒量，病毒原液用增強劑Eni.S稀釋，滴定濃度為標準濃度(1×108)，加入終濃度為8 μg/mL Polybrene、Eni.S、L-15培養(yǎng)基及計算的標準濃度病毒液，總體積為1 mL。將含有PRDX1基因擴增片段的慢病毒(Ubi-Prdx1-EGFP-Puromycin)與空載對照慢病毒分組感染SW480細胞，命名為轉(zhuǎn)染PRDX1組(PRDX1)及空載對照組(Vector)，并留未轉(zhuǎn)染的細胞作為空白對照，即未轉(zhuǎn)染組(SW480)?？蛰d對照組及轉(zhuǎn)染PRDX1組細胞培養(yǎng)26～28 h后更換為含有3 μg/mL嘌呤霉素(Puromycin)的L-15培養(yǎng)液行抗性篩選，轉(zhuǎn)染3 d后行熒光顯微鏡下觀察綠色熒光，通過觀察熒光計算轉(zhuǎn)染率達95%以上可繼續(xù)行抗性篩選培養(yǎng)數(shù)日，收獲細胞行檢測。

1.2.3 Transwell侵襲實驗 選擇孔徑為8.0 μm的Transwell 小室，裝置于24孔板中。取對數(shù)生長期各組SW480細胞(實驗分組同上)。準備基質(zhì)膠，將凍存于-80 ℃冰箱的matrigel 4 ℃過夜，變成液態(tài); 無血清培養(yǎng)基以1∶9稀釋，吸50 μL均勻鋪到Transwell 上室， 37 ℃過夜，當出現(xiàn)“白色層”時在上室中加入100 μL 預溫的無血清的L-15培養(yǎng)基，孵育30 min，使基質(zhì)膠再水化，吸去剩余培養(yǎng)液，0.25%胰酶消化細胞，無血清培養(yǎng)基洗3 次，調(diào)整細胞為1×106個/mL；取細胞懸液100 μL加入上室，下室加500 μL 完全培養(yǎng)基；37 ℃、5% CO2孵育24 h，棄培養(yǎng)基，擦拭上室細胞；取出Transwell用PBS 洗2 次，4%多聚甲醛固定細胞10 min，倒置，風干；加0.1% 結(jié)晶紫染色10 min，PBS 洗3次，擦凈上室細胞；倒置顯微鏡下隨機計數(shù)10個視野的細胞，取均數(shù)。每組設(shè)3個復孔，實驗重復3次。侵襲抑制率( %) = (對照組穿膜細胞-轉(zhuǎn)染組穿膜細胞) /對照組穿膜細數(shù)×100%。

1.2.4 細胞劃痕實驗 取狀態(tài)良好的3組細胞(未轉(zhuǎn)染組、空載對照組及轉(zhuǎn)染PRDX1組)制備成單細胞懸液，按1×105個細胞(500 μL)/孔將細胞加入6 孔板，5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)于37℃孵育培養(yǎng)。采用劃痕法用消毒過的槍頭在70%匯合的單層細胞表面劃出一無細胞的細痕，用PBS漂洗3次以除去劃下的細胞，加入新鮮無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)觀察，24 h后在倒置顯微鏡下觀察拍照。每組實驗重復3次。

1.2.5 免疫細胞熒光檢測 取24 孔板行細胞爬片，觀察細胞在玻片上種植均勻、生長良好，吸去各孔內(nèi)培養(yǎng)基，PBS清洗3次，4%多聚甲醛固定20 min后再次 PBS沖洗玻片3次，每次5 min；每孔中加入含 0.1% Triton X-100及3%山羊血清的PBS約0.5 mL，在室溫下封閉約1 h；加入待測蛋白的一抗稀釋液，Twist1、E-cadherin及Vimentin稀釋比例均為1∶2000，4℃過夜孵育；過夜后取出24孔板，PBS 輕洗玻片2次，每次5 min；每孔玻片滴加50μL 稀釋比例為1∶2000的DyLight 549熒光二抗，37℃條件下避光孵育1 h，PBS輕洗玻片3次，每次5 min；DAPI滴加玻片上染核10 min；PBS輕洗玻片3次，每次5 min；吸干PBS殘液，室溫下風干；勾取爬片，注意細胞爬片的一面朝下，放置載玻片上，少量中性樹封片，熒光顯微鏡下觀察拍照。

1.2.6 Western blot檢測 收集各組細胞，采用PBS洗滌2次，離心棄上清，加入200 μL預冷的RIPA細胞裂解液，置冰上30 min，4 ℃、14 000 rpm離心16 min，取上清并進行蛋白定量(BCA法)。取30 μg蛋白加入上樣緩沖液，經(jīng)100 ℃、10 min變性后用100 g/L的SDS-PAGE分離。蛋白半干轉(zhuǎn)移至PVDF膜，用含50 g/L脫脂奶粉的TBST緩沖液室溫封閉1 h，待測蛋白一抗或抗人GAPDH的一抗，4℃過夜，TBST洗滌3次，加入HRP標記的山羊抗小鼠二抗室溫孵育1 h，TBST洗滌3次，加入ECL顯色劑后暗室內(nèi)壓片曝光。實驗重復3次。

2 結(jié)果

2.1 轉(zhuǎn)染慢病毒后SW480細胞PRDX1蛋白的表達 以GAPDH為內(nèi)參，比較未轉(zhuǎn)染組(SW480)、空載對照組(Vector)及轉(zhuǎn)染PRDX1組(PRDX1)細胞中的PRDX1蛋白表達，經(jīng)Western-blot檢測，可見轉(zhuǎn)染PRDX1組中PRDX1顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明轉(zhuǎn)染PRDX1組SW480細胞其PRDX1蛋白過表達成功。

未轉(zhuǎn)染組：SW480；空載對照組：Vector；轉(zhuǎn)染PRDX1組：PRDX1。

2.2 Transwell細胞侵襲實驗 未轉(zhuǎn)染組(SW480)、空載對照組(Vector)及轉(zhuǎn)染PRDX1組(PRDX1)細胞侵襲實驗(見圖2)。結(jié)果顯示，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的PRDX1組穿過Matrigel膠的侵襲細胞數(shù)較未轉(zhuǎn)染組和空載對照組明顯增多，統(tǒng)計學分析顯示差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；而其余兩組組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

A:SW480;B:Vector;C:PRD×1。

2.3 細胞遷移實驗 在3組細胞內(nèi)劃出相同寬度的痕跡后，24 h后觀察細胞劃痕處的遷移情況，可見轉(zhuǎn)染PRDX1組比未轉(zhuǎn)染組和空載對照組細胞遷移速度快(見圖3)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染PRDX1組細胞遷移能力明顯高于未轉(zhuǎn)染組和空載對照組。

圖3 3組細胞24 h后侵襲轉(zhuǎn)移能力的差異(×100)

2.4 免疫細胞熒光檢測過表達PRDX1后SW480細胞Twist1、E-cadherin及Vimentin的表達 通過免疫細胞熒光檢測3組細胞中EMT標志物的表達，與空載對照組(Vector)比較，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染PRDX1組細胞中上皮細胞標記E-cadherin明顯下調(diào)，而間質(zhì)標記Vimentin及EMT轉(zhuǎn)錄因子Twist1的表達明顯上調(diào)(見圖4)。說明過表達PRDX1后其細胞EMT標志物發(fā)生了較明顯變化。

A

B

C

A:Twist1;B:E-cadherin;C: Vimentin。

2.5 Western-blot法檢測過表達PRDX1后細胞Twist1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及MMP-9的表達 通過Western-blot法檢測3組細胞中EMT標志物的表達，從圖5中可發(fā)現(xiàn)，與未轉(zhuǎn)染組(SW480)及空載對照組(Vector)比較，轉(zhuǎn)染PRDX1組細胞中上皮細胞標記E-cadherin蛋白表達明顯下調(diào)(P<0.01)，間質(zhì)標記N-cadherin、Vimentin、EMT轉(zhuǎn)錄因子Twist1以及轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP-9的表達均出現(xiàn)不同程度上調(diào)(P<0.05)。說明PRDX1過表達可促進細胞EMT的發(fā)生及其轉(zhuǎn)移能力。

圖5 Western-blot檢測3組細胞Twist1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及MMP-9的表達

3 討論

目前我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率僅次于肺癌和胃癌，位居第3位，且發(fā)病率每年仍以一定速度增長。大部分結(jié)腸癌患者早期沒有癥狀，超過75%的患者確診時已屬于晚期[7]，臨床上雖采取包括手術(shù)、化療、放療為主的綜合治療方法，但預后仍不理想，其重要原因是結(jié)腸癌趨于局部侵襲和發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，進一步研究和探討結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用機制仍是結(jié)腸癌治療研究的難點和熱點。

過氧化還原蛋白(peroxiredoxins，PRDXs)是近年新發(fā)現(xiàn)的相對分子量在20～30 kDa過氧化物酶超家族，對氧化應激反應極為敏感，主要作用是通過硫氧還蛋白還原、清除過氧化物或超氧化物，在保持細胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[8]。此外，PRDXs還在細胞多種分子傳導信號中發(fā)揮重要樞紐作用[9]。PRDX1蛋白是PRDXs家族中最受關(guān)注的抗氧化因子之一，在多種腫瘤中呈高表達或低表達，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[10-12]。Taniuchi K等[13]報道了PRDX1在胰腺導管腺癌組織中高表達，且與磷酸化的p38 MAPK相互作用，并發(fā)現(xiàn)PRDX1抑制后會導致膜波動和突起的改變，從而促進胰腺癌細胞的侵襲。Turner-Ivey B等[14]報道了乳腺癌中PRDX1通過其半胱氨酸Cys52位點與p38 MAPK磷酸化(MKP-1、MKP-5)相結(jié)合，在乳腺癌上皮細胞衰老過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。Riddell JR等[15]研究發(fā)現(xiàn)PRDX1通過TLR4和VEGF依賴的形式促進前列腺癌上皮細胞的增殖、遷移和分化。此外，PRDX1還作為一種增殖相關(guān)蛋白參與細胞增殖和分化[16]，還可發(fā)揮分子伴侶及免疫調(diào)節(jié)功能[17]。由此可見，PRDX1作為促癌因子還是抑癌因子尚存在爭議，PRDX1在不同的腫瘤中可能發(fā)揮不同的功能和作用，且在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移中的具體機理也不盡相同。

目前，PRDX1與結(jié)直腸癌關(guān)聯(lián)研究少見報道，劉峰等[18]通過基因芯片技術(shù)檢測到PRDX1在出現(xiàn)腹膜轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌原發(fā)腫瘤組織中表達上調(diào)。蔣堯等[19]檢測到PRDX1在結(jié)直腸癌組織中高表達，且與III期結(jié)直腸癌患者或有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者之間有相關(guān)性。也有報道顯示，PRDX1的表達與結(jié)直腸腫瘤發(fā)展轉(zhuǎn)移及復發(fā)有關(guān)，作為一種促癌因子發(fā)揮作用[20]，且與E-ca呈負相關(guān)，其高表達可促使EMT，從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移[6]。本研究采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)使結(jié)腸癌細胞株P(guān)RDX1表達上調(diào)，發(fā)現(xiàn)其侵襲和轉(zhuǎn)移能力明顯增強，同時EMT標志蛋白和轉(zhuǎn)錄因子也發(fā)生相應變化。結(jié)果顯示，PRDX1可能通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子Twist1的表達從而使EMT標志蛋白E-cadherin表達發(fā)生改變，PRDX1的表達上調(diào)導致了E-cadherin的表達明顯降低，二者呈負相關(guān)。同時，PRDX1還會引起間質(zhì)標記N-cadherin、Vimentin及轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP-9的表達上調(diào)。由此推斷，PRDX1的表達上調(diào)可能通過某種機制促使EMT轉(zhuǎn)錄因子Twsit1的表達增加，從而推動了EMT進程，導致腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強。結(jié)合文獻報道，推測PRDX1可能通過與缺氧或氧化還原相關(guān)的核心調(diào)控網(wǎng)絡(luò)來影響EMT進程，從而賦予了腫瘤細胞更強大適應環(huán)境的能力，在腫瘤細胞對抗活性氧(ROS)和清除H2O2有害刺激中發(fā)揮重要作用。至于PRDX1是否主要通過EMT來促進結(jié)腸癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移，以及PRDX1在腫瘤細胞與其微環(huán)境交互網(wǎng)絡(luò)調(diào)控中所扮演的角色究竟如何尚不得而知，仍亟待深入研究。鑒于此，課題組準備在后續(xù)實驗中采用RNA干擾技術(shù)沉默PRDX1基因的表達及相關(guān)體內(nèi)實驗進一步探討PRDX1與EMT關(guān)聯(lián)的具體機制。由此相信，PRDX1與結(jié)腸癌EMT及侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系有望成為一個新的研究方向。

綜上所述，對PRDX1在結(jié)腸癌EMT及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用和可能機制的探討，可能對結(jié)腸癌局部浸潤和肝臟轉(zhuǎn)移的發(fā)生及具體機制有更深入的了解，并為結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的治療提供新的靶點和方向。

[1] Jemal A，Bray F，Center M M，et al. Global cancer statistics[J]. CA Cancer J Clin，2011，61(2):69-90.

[2] 陳萬青，張思維，曾紅梅，等.中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J].中國腫瘤，2014，23(1)：1-10.

[3] 代珍，鄭榮壽，鄒小農(nóng).中國結(jié)直腸癌發(fā)病趨勢分析和預測[J].中華預防醫(yī)學雜志，2012， 46(7)：598-603.

[4] Marie-Egyptienne D T, Lohse I, Hill R P. Cancer stem cells, the epithelial to mesenchymal transition (EMT) and radioresistance: Potential role of hypoxia[J]. Cancer Lett，2013， 341(1):63-72.

[5] Jarvis R M, Hughes S M, Ledgerwood E C. Peroxiredoxin 1 Functions as a Signal Peroxidase to Receive, Transduce, and Transmit Peroxide Signals in Mammalian Cells[J]. Free Radical Biology & Medicine，2012，53(7):1522-1530.

[6] Ha B, Kim E K, Kim J H, et al. Human peroxiredoxin 1 modulates TGF-β1-induced epithelial-mesenchymal transition through its peroxidase activity[J]. Biochem Biophys Res Commun，2012，421(1):33-37.

[7] Chalya P L, McHembe M D, Mabula J B, et al. Clinicopathological patterns and challenges of management of colorectal cancer in a resource-limited setting: a Tanzanian experience[J]. World J Surg Oncol， 2013 ，Apr 18,11:88. doi: 10.1186/1477-7819-11-88.

[8] Poynton R A, Hampton M B. Peroxiredoxins as biomarkers of oxidative stress[J].Biochim Biophys Acta， 2014，1840(2):906-912.

[9] Park J, Lee S, Lee S, et al. 2-cys peroxiredoxins: emerging hubs determining redox dependency of Mammalian signaling networks[J]. Int J Cell Biol， 2014，2014:715867.doi:10.10.1155/2014/715867.

[10] Nicolussi A, D'Inzeo S, Mincione G, et al. PRDX1 and PRDX6 are repressed in papillary thyroid carcinomas via BRAF V600E-dependent and -independent mechanisms[J]. Int J Oncol，2014，44(2):548-556.

[11] Sun Q K, Zhu J Y, Wang W, et al. Diagnostic and prognostic significance of peroxiredoxin 1 expression in human hepatocellular carcinoma[J]. Med Oncol， 2014， 31(1):786.

[12] Ren P, Ye H, Dai L,et al. Peroxiredoxin 1 is a tumor-associated antigen in esophageal squamous cell carcinoma[J]. Oncol Rep，2013，30(5):2297-2303.

[13] Taniuchi K, Furihata M, Hanazaki K, et al. Peroxiredoxin 1 Promotes Pancreatic Cancer Cell Invasion by Modulating p38 MAPK Activity [J]. Pancreas，2014.Dec 2.[Epub ahead of print]

[14] Turner-Ivey B, Manevich Y, Schulte J, et al. Role for Prdx1 as a specific sensor in redox-regulated senescence in breast cancer [J]. Oncogene，2013， 32(45):5302-5314.

[15] Riddell J R, Bshara W, Moser M T, et al. Peroxiredoxin 1 controls prostate cancer growth through Toll-like receptor 4-dependent regulation of tumor vasculature [J]. Cancer res，2011， 71(5):1637-1646.

[16] Mu Z M, Yin X Y, Prochownik E V, et al. Pag, a putative tumor suppressor, interacts with the Myc Box II domain of c-Myc and selectively alters its biological function and target gene expression[J]. J Biol Chem， 2002，277(45):43175-43184.

[17] O'Leary P C, Terrile M, Bajor M, et al. Peroxiredoxin-1 protects estrogen receptor α from oxidative stress-induced suppression and is a protein biomarker of favorable prognosis in breast cancer[J]. Breast Cancer Res，2014，16(4):79.

[18] 劉峰，郭久冰，沈智勇，等.基因芯片技術(shù)篩選結(jié)直腸癌腹膜轉(zhuǎn)移相關(guān)基因[J].南方醫(yī)科大學學報，2012，32 (3)：400-403.

[19] 蔣堯，傅仲學，吳星燁.PRDX1在結(jié)直腸癌中的表達及其臨床意義[J].重慶醫(yī)學，2011，40(32)：3276-3277.

[20] Wu X Y, Fu Z X, Wang X H. Peroxiredoxins in colorectal neoplasms[J]. Histol Histopathol， 2010，25(10):1297-1303.

[收稿2014-12-02;修回2014-12-30]

(編輯：王福軍)

PRDX1 participates in invasion and metastasis of colon cancer through epithelial-mesenchymal transition

FengJihong1,FengDongdong2,FuZhongxue1

(1.Department of Gastroenterological Surgery, The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China;2.Department of Cardiology, Shouxian Hospital of Traditional Chinese Medicine,Lu′an Anhui 232200, China)

Objective To study the role of Peroxiredoxin 1 (PRDX1) in epithelial-mesenchymal transition in colon cancer and the mechanism of PRDX1 participating in the invasion and metastasis of colon cancer.Methods SW480 cells were transfected with lentivirus vectors resulting in overexpression of PRDX1 protein, and the expression of PRDX1 were validated by western blot. Transwell migration assays and wound healing assays were performed to identify the differences and changes of invasive and metastatic ability in SW480 cell lines. The expression of Twist1, E-cadherin and Vimentin were analyzed by immunocytochemistry. The expression of Twist1 (EMT related transcription factor), E-cadherin、N-cadherin and Vimentin (EMT biomarker proteins), and MMP9 (metastasis associated protein) were detected by western blot.Results PRDX1 are over-expressed in the transfection groups, as compared to that in control groups (P<0.01). The transfected cells significantly have stronger capability for invasion and metastasis as compared to those in control groups. The immunofluorescence staining revealed that the expression of E-cadherin was decreased while the expression of Vimentin and Twist1 was increased in the transfected cells. Western blot showed that the expression of E-cadherin was decreased significantly in the transfection groups in compared with control group (P<0.01), while the expression of Twist1, MMP-9, N-cadherin and Vimentin was increased significantly (P<0.05).Conclusion PRDX1 can induce EMT process of colon carcinoma line SW480 cells, and promote its ability of invasion and metastasis.

Peroxiredoxin 1 (PRDX1)；colon cancer；invasion；metastasis；Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT)

國家自然科學基金面上項目(NO：81172295)。

傅仲學, 男，博士，教授，博士生導師，研究方向: 結(jié)直腸腫瘤，E-mail:fzx990521@sina.com。

R735.3

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1000-2715(2015)01-0067-07