楊盼盼, 張海春, 劉麗輝, 蒲 強(qiáng), 彭桂香
華南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院,廣東省微生物信號(hào)與作物病害防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州510642
高效光合細(xì)菌菌劑對(duì)土壤微生物的影響
楊盼盼, 張海春, 劉麗輝, 蒲 強(qiáng), 彭桂香?
華南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院,廣東省微生物信號(hào)與作物病害防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州510642
為了篩選在盆栽試驗(yàn)條件下適宜的高效光合細(xì)菌菌劑濃度以促進(jìn)番茄生長(zhǎng),研究了高效光合細(xì)菌菌劑的3種濃度對(duì)番茄種植土壤中微生物特性的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明:高效光合細(xì)菌菌劑的施用可以顯著提高土壤中細(xì)菌和放線菌的數(shù)量,降低土壤中真菌數(shù)量;不同程度提高土壤脲酶、酸性磷酸酶和過氧化氫酶的活性。其中以稀釋100倍的光合細(xì)菌菌劑+化肥處理效果最明顯,稀釋100倍的菌劑+化肥處理最有利于土壤中微生物的生長(zhǎng)繁殖,對(duì)土壤環(huán)境的改善效果最顯著。
光合細(xì)菌;土壤微生物;土壤酶
土壤微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分,其參數(shù)綜合反映了土壤的物理、化學(xué)和生物特性。土壤微生物對(duì)土壤結(jié)構(gòu)的改善,養(yǎng)分元素的積累、轉(zhuǎn)化、維持和土壤礦物質(zhì)的分解起促進(jìn)作用,有利于土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)的形成與穩(wěn)定。土壤微生物數(shù)量與作物根重及地上部分的生長(zhǎng)有密切關(guān)系,土壤-作物系統(tǒng)與土壤微生物之間存在相互作用、互為條件的關(guān)系[1,2],土壤微生物的數(shù)量在一定程度上反映了土壤的肥力狀況。土壤酶是指土壤微生物、植物根系和土壤中其他生物細(xì)胞產(chǎn)生的胞內(nèi)酶和胞外酶的總稱[3]。土壤酶參與土壤的許多重要生物化學(xué)過程和元素循環(huán),是土壤生物化學(xué)特征的重要組成部分,是評(píng)價(jià)土壤肥力的一項(xiàng)重要指標(biāo),目前已經(jīng)把土壤酶活性作為檢測(cè)土壤肥力和土壤環(huán)境變化的重要指標(biāo)[4~7]。土壤微生物和土壤酶的改變反映了土壤養(yǎng)分的循環(huán)潛能,因此研究土壤微生物和土壤酶的變化過程對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有重要指導(dǎo)意義。
光合細(xì)菌(photosynthetic bacteria,PSB)是具有原始光能合成體系的原核生物的總稱[8]。光合細(xì)菌是一種多功能益生菌,近年來,光合細(xì)菌除了應(yīng)用在制氫、食品、醫(yī)藥保健、飼料添加劑和水質(zhì)凈化劑等方面外[9~19],也在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域得到越來越廣泛的應(yīng)用。已有研究表明,光合菌劑能有效改善植物根際土壤的微生態(tài)環(huán)境,提高土壤肥力[20,21]和植物的抗病能力[22~24]。 本試驗(yàn)將光合細(xì)菌以菌肥形式施入土壤,測(cè)定其對(duì)土壤微生物和土壤酶的調(diào)節(jié)作用,并與化肥進(jìn)行比較,評(píng)價(jià)光合細(xì)菌對(duì)土壤的生態(tài)學(xué)效應(yīng)。本試驗(yàn)主要探索在盆栽試驗(yàn)條件下光合細(xì)菌菌劑的最佳施肥濃度,以期發(fā)揮光合細(xì)菌菌劑的最佳促生長(zhǎng)作用,為光合細(xì)菌菌劑應(yīng)用于大田試驗(yàn)提供參考,有利于光合細(xì)菌菌劑在田間的大面積推廣和應(yīng)用,同時(shí)為光合細(xì)菌應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、開發(fā)新型肥料等提供理論依據(jù)。
1.1 材料
番茄(Lycopersicun esculentum Mill)品種為金冠一號(hào),由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所提供;光合細(xì)菌菌劑為膠狀紅長(zhǎng)命菌(Rubrivivax gelatinosus),由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院分子遺傳實(shí)驗(yàn)室提供。
本實(shí)驗(yàn)用土為赤紅壤發(fā)育而成的水稻土,采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)躍進(jìn)北農(nóng)學(xué)院實(shí)驗(yàn)基地,土壤的肥力指標(biāo):pH 6.47,有機(jī)質(zhì)25.63 g/kg,堿解氮100.86 mg/kg,速效磷 30.69 mg/kg,速效鉀158.29 mg/kg。
表1 盆栽試驗(yàn)施肥處理Table 1 Fertilizer treatments of pot experiment.
1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
盆栽試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理和1個(gè)對(duì)照,具體施肥情況見表1,設(shè)3次重復(fù),隨機(jī)排列,盆高20 cm,上口直徑為25 cm,下口直徑為18.5 cm,置于網(wǎng)棚中。盆栽試驗(yàn)2012年8月開始,2012年12月結(jié)束。在移栽10 d、25 d、40 d、55 d、70 d時(shí)各施肥一次,每次施入光合細(xì)菌菌劑10 mL/株(OD600約 0.2),每次施尿素 0.24 g/kg、過磷酸鈣0.12 g/kg、氯化鉀0.12 g/kg。除P6處理外,所有處理氮、磷、鉀的施入總量相等。
1.3 測(cè)定方法
采用稀釋涂平板法[25]測(cè)定土壤中細(xì)菌、真菌和放線菌數(shù)量。細(xì)菌采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,于25~28℃培養(yǎng)5 d;放線菌采用改良高氏一號(hào)培養(yǎng)基,于25~28℃培養(yǎng)7 d;真菌采用孟加拉紅培養(yǎng)基,于25~28℃培養(yǎng)3 d。番茄生長(zhǎng)期每隔15 d (每次施肥后5 d)采土樣 1次,采樣深度為0~20 cm。
本試驗(yàn)3種酶活性測(cè)定的土樣均為過1 mm篩的風(fēng)干土樣。采用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定土壤脲酶活性;高錳酸鉀滴定法測(cè)定土壤過氧化氫酶活性;Gibbs試劑比色法測(cè)定土壤酸性磷酸酶活性[3]。
1.4 數(shù)據(jù)分析
用SASV8軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,采用Duncan’s法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。
2.1 對(duì)土壤微生物群落多樣性的影響
2.1.1 對(duì)土壤細(xì)菌數(shù)量的影響 從圖1可以看出,在移栽10 d時(shí)P1處理細(xì)菌數(shù)量均高于其余處理,在30 d、45 d、60 d時(shí)P2處理高于其余處理,說明光合細(xì)菌菌劑可以顯著提高土壤中細(xì)菌的數(shù)量,其中稀釋100倍的光合細(xì)菌菌劑在提高土壤中細(xì)菌數(shù)量方面的作用更加顯著,稀釋100倍的光合細(xì)菌菌劑能夠更好地為植物生長(zhǎng)提供有益環(huán)境。P4處理細(xì)菌數(shù)量高于P5、P6處理,說明稀釋100倍滅菌處理的光合細(xì)菌菌劑也能提高土壤中的細(xì)菌數(shù)量,但效果不如光合細(xì)菌菌劑,可能是光合細(xì)菌菌劑中含有大量的光合細(xì)菌,使得土壤中細(xì)菌的數(shù)量增加。P5處理后期采樣時(shí)細(xì)菌數(shù)量顯著低于其余各處理,說明單施化肥對(duì)土壤中細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖不利。光合細(xì)菌菌劑為土壤提供光合細(xì)菌,促進(jìn)土壤細(xì)菌生長(zhǎng),從移栽15~45 d,土壤中細(xì)菌的數(shù)量呈增加趨勢(shì),在采樣后期(60 d),土壤中細(xì)菌的數(shù)量開始下降,這與試驗(yàn)期氣候條件有關(guān),12月連續(xù)陰雨天氣,且氣溫有所降低,造成土壤細(xì)菌數(shù)量減少。
圖1 不同處理對(duì)土壤中細(xì)菌數(shù)量的影響Fig.1 Effects of different treatments on bacterium population in soil.
2.1.2 對(duì)土壤真菌數(shù)量的影響 從圖2可以看出,土壤中真菌的數(shù)量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。在移栽后30 d采樣時(shí),P1、P2、P3處理真菌數(shù)量高于其余各處理,說明光合細(xì)菌菌劑的施入能提高土壤中真菌的數(shù)量;但在45 d、60 d采樣時(shí),P1、P2、P3處理真菌數(shù)量又逐漸降低,且P2處理土壤中真菌數(shù)量最低,說明光合細(xì)菌菌劑在植物生長(zhǎng)后期對(duì)土壤中的真菌有抑制作用。P4處理在移栽后15 d、30 d、45 d采樣時(shí),土壤中真菌數(shù)量一直處于增長(zhǎng)的趨勢(shì),在60 d采樣時(shí),土壤中真菌數(shù)量高于其余各處理,說明稀釋100倍經(jīng)滅菌處理的光合細(xì)菌菌劑為土壤中真菌的生長(zhǎng)提供了有益的環(huán)境。P5、P6處理土壤中真菌數(shù)量的變化趨勢(shì)與P4處理相似,含量略低于P4處理,說明光合細(xì)菌菌劑中的細(xì)菌抑制了土壤中原有真菌的正常生長(zhǎng)繁殖。從45~60 d各施肥處理整體數(shù)量表現(xiàn)為下降趨勢(shì),這可能與試驗(yàn)期氣候條件有關(guān),造成土壤真菌數(shù)量減少。
圖2 不同處理對(duì)土壤中真菌數(shù)量的影響Fig.2 Effects of different treatments on fungus population in soil.
2.1.3 對(duì)土壤放線菌數(shù)量的影響 從圖3可以看出,P2處理在每次采樣時(shí),土壤中放線菌的數(shù)量均高于其余各處理,說明光合細(xì)菌菌劑稀釋100倍時(shí)對(duì)土壤中放線菌數(shù)量的提高效果最顯著。P1處理在各次采樣時(shí)放線菌數(shù)量均低于P2、P3處理,說明光合細(xì)菌菌劑稀釋50倍時(shí)對(duì)土壤中放線菌數(shù)量的提高效果不如稀釋100倍和200倍的效果。P4處理在移栽后15 d采樣時(shí)放線菌數(shù)量顯著高于P6處理,在45 d采樣時(shí)顯著高于P5、P6處理,在30 d、60 d采樣時(shí)與P5、P6處理無顯著差異,說明稀釋100倍經(jīng)滅菌處理的光合細(xì)菌菌劑對(duì)土壤放線菌數(shù)量有提高,但不如稀釋100倍的光合細(xì)菌菌劑效果顯著。從采樣15~45 d,不同處理土壤中放線菌數(shù)量呈增加趨勢(shì),隨著采樣后期氣候條件的改變,不同施肥處理土壤中放線菌的數(shù)量減少。
圖3 不同處理對(duì)土壤中放線菌數(shù)量的影響Fig.3 Effects of different treatments on actinomyce population in soil.
2.2 對(duì)土壤酶活性的影響
2.2.1 對(duì)土壤脲酶活性的影響 從圖4可以看出,P1、P2、P3處理在移栽后15 d、30 d采樣時(shí),脲酶活性均高于其他各處理且P2脲酶活性最高,說明施用光合細(xì)菌菌劑能夠提高土壤脲酶活性且P2處理效果最明顯。在45 d、60 d采樣時(shí)P4處理脲酶活性高于P1、P5、P6處理,說明稀釋100倍經(jīng)滅菌處理的光合細(xì)菌菌劑也能夠提高脲酶活性,但效果不如稀釋100倍和200倍的光合細(xì)菌菌劑;在45 d、60 d采樣時(shí)P1處理脲酶活性呈下降趨勢(shì),說明稀釋50倍的光合細(xì)菌菌劑在后期不利于土壤中脲酶活性的提高。P5處理在15 d、30 d、60 d采樣時(shí)脲酶的活性均低于其余各處理,說明單施化肥對(duì)土壤中脲酶活性有抑制作用。
圖4 不同處理對(duì)土壤脲酶活性的影響Fig.4 Effects of different treatments on activity of soil urease.
2.2.2 對(duì)土壤酸性磷酸酶活性的影響 從圖5可以看出,P1處理在移栽后15 d、30 d采樣時(shí)土壤中酸性磷酸酶活性與P2、P3處理非常接近,但45 d、60 d采樣時(shí)土壤中酸性磷酸酶活性低于P2、P3處理,P2、P3處理土壤中酸性磷酸酶活性均高于其余各處理,說明稀釋100倍和稀釋200倍的光合細(xì)菌菌劑能夠提高土壤中酸性磷酸酶的活性,稀釋50倍的光合細(xì)菌菌劑在前期能夠提高土壤中酸性磷酸酶活性,但后期卻又抑制了土壤中酸性磷酸酶活性。P4處理在30 d、45 d、60 d采樣時(shí)土壤中酸性磷酸酶活性低于P2、P3處理但高于P5、P6處理,說明稀釋100倍經(jīng)滅菌處理的光合細(xì)菌菌劑對(duì)土壤中酸性磷酸酶活性的提高效果不及稀釋100倍和稀釋200倍的光合細(xì)菌菌劑,但高于單施化肥和清水對(duì)照處理的土壤磷酸酶活性。
2.2.3 對(duì)土壤過氧化氫酶活性的影響 從圖6可以看出,P1、P2、P3、P4處理在不同采樣時(shí)期中,土壤中過氧化氫酶活性高于P5、P6處理,說明光合細(xì)菌菌劑和經(jīng)滅菌處理的光合細(xì)菌菌劑均能提高土壤中過氧化氫酶的活性。P2處理在不同時(shí)期的采樣中土壤過氧化氫酶活性均高于其余各處理,說明稀釋100倍的光合細(xì)菌菌劑對(duì)土壤中過氧化氫酶活性的提高效果更好。P5、P6處理土壤中過氧化氫酶活性幾乎一樣,說明單施化肥對(duì)土壤中過氧化氫酶活性的影響較小。
圖5 不同處理對(duì)土壤酸性磷酸酶活性的影響Fig.5 Effects of different treatments on activity of soil acid phosphatase.
圖6 不同處理對(duì)土壤過氧化氫酶活性的影響Fig.6 Effects of different treatments on activity of soil catalase.
土壤的肥力水平能夠影響微生物的活動(dòng),改變微生物的類群,同時(shí),大量的微生物又反過來對(duì)土壤結(jié)構(gòu)的改善以及養(yǎng)分積累、轉(zhuǎn)化和維持起促進(jìn)作用。已有研究表明,光合細(xì)菌能顯著提高土壤中細(xì)菌和放線菌數(shù)量,抑制真菌的數(shù)量[26~29]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:稀釋100倍和200倍的光合細(xì)菌菌劑在不同時(shí)期對(duì)土壤中細(xì)菌和放線菌數(shù)量有顯著的提高效果,對(duì)真菌數(shù)量的影響表現(xiàn)為: 15 d、30 d采樣時(shí),對(duì)土壤中真菌數(shù)量有提高作用;45 d、60 d采樣時(shí),對(duì)土壤中真菌數(shù)量有顯著的抑制效果;稀釋50倍的光合細(xì)菌菌劑前期對(duì)土壤中細(xì)菌和放線菌的提高效果顯著,但后期效果卻顯著低于稀釋100倍和200倍的光合細(xì)菌菌劑。因此光合細(xì)菌通過提高放線菌數(shù)量、抑制真菌的增殖,減少作物病害的發(fā)生,為作物提供健康的生活環(huán)境。
土壤酶作為土壤的組成部分,對(duì)土壤營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化、有機(jī)質(zhì)分解、污染物降解及修復(fù)等起著重要的作用。土壤過氧化氫酶、磷酸酶、脲酶之間存在一定的關(guān)系,它們之間的關(guān)系及其總體活性對(duì)評(píng)價(jià)土壤肥力水平有重要意義[30]。本研究結(jié)果表明,施用光合細(xì)菌菌劑的土壤中脲酶、酸性磷酸酶、過氧化氫酶的活性顯著高于化肥和清水處理,這與前人的研究結(jié)果[26,32~34]相一致。其中稀釋100倍的光合細(xì)菌菌劑處理效果最明顯,這可能是因?yàn)楣夂霞?xì)菌菌劑中含有大量的光合細(xì)菌,光合細(xì)菌的加入豐富了土壤中的微生物,同時(shí)也刺激了土壤中土著微生物的代謝作用,從而增加了以上4種酶的活性;也可能是因?yàn)楣夂霞?xì)菌菌劑中本身含有光合細(xì)菌代謝產(chǎn)生的各種酶類。試驗(yàn)中稀釋50倍的光合細(xì)菌菌劑在后期不利于土壤中酶活性的提高,可能是因?yàn)楦邼舛鹊墓夂霞?xì)菌菌劑抑制了番茄的生長(zhǎng),番茄根系代謝活動(dòng)減弱導(dǎo)致土壤環(huán)境不利于微生物的生長(zhǎng),土壤中各種酶類的活性也受到影響。土壤中單施化肥處理的酸性磷酸酶活性高于對(duì)照,其余2種酶表現(xiàn)為單施化肥處理低于對(duì)照,這可能是因?yàn)榛实氖┯锰岣吡送寥乐腥馁|(zhì)量分?jǐn)?shù),而相關(guān)研究也表明,土壤中磷酸酶活性與土壤中氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)[35],所以磷酸酶較對(duì)照有一定的提高。
光合細(xì)菌能通過調(diào)節(jié)土壤的微生物結(jié)構(gòu),促進(jìn)土壤物質(zhì)轉(zhuǎn)化和循環(huán),提高土壤肥力,為植物提供更多的可利用物質(zhì);同時(shí)又能提高土壤酶的活性,提高土壤細(xì)菌、放線菌數(shù)量,增加土壤有益微生物數(shù)量,抑制真菌的增殖,抑制病害和提高植物的抗病力,從而為植物生長(zhǎng)創(chuàng)造了良好健康的土壤環(huán)境。這一研究結(jié)果為大面積推廣利用光合細(xì)菌提供了理論依據(jù),光合細(xì)菌在復(fù)合肥的研發(fā)生產(chǎn)中有廣闊的應(yīng)用前景。
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Effects of Photosynthetic Bacteria Inoculants on Soil Microorganism s
YANG Pan-pan,ZHANG Hai-chun,LIU Li-hui,PU Qiang,PENG Gui-xiang?
Key Laboratory of Microbial Signals and Disease Control of Guangdong Province,College of Natural Resources and Environment,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China
In order to select a suitable photosynthetic bacteria inoculants concentration to improve the tomato growth with pot experiment,we studied the effects of three concentrations of high efficient photosynthetic bacteria inoculants on soil microbial properties.The experimental results showed that,significant increases was observed in the population of soil bacteria and soil Actinomycetes with photosynthetic bacteria inoculants,and prominent decrease in thatof soil fungi.Soil urease,acid phosphatase and catalase activities were all improved by the application of photosynthetic bacterial inoculants.The photosynthetic bacterial inoculants diluted 100 times plus chemical treatment was the most remarkable in the experiment,which was more conducive to the soilmicrobes and environment.
photosynthetic bacteria;soil microorganism;soil enzymes
10.3969/j.issn.2095-2341.2015.05.08
2015-03-31;接受日期:2015-05-07
廣東省煙草專賣局資助項(xiàng)目(粵煙科[2012]26號(hào));國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31370052);國家 973計(jì)劃項(xiàng)目(2010CB126502);廣東省養(yǎng)分資源循環(huán)利用與耕地保育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目(TFS2011-04)資助。
楊盼盼,碩士研究生,研究方向?yàn)橥寥牢⑸飳W(xué)。E-mail:yangpanpan929@163.com。?通信作者:彭桂香,副教授,博士,研究方向?yàn)橥寥牢⑸飳W(xué)。E-mail:gxpeng@scau.edu.cn