顧 佳，張 斌，崔曉懿

哈爾濱市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

淺析細(xì)菌內(nèi)霉素在藥品檢驗(yàn)中的作用

顧 佳，張 斌，崔曉懿

哈爾濱市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

在藥品的生產(chǎn)和流通過(guò)程中，內(nèi)霉素污染問(wèn)題是不可能完全避免的。由于細(xì)菌內(nèi)霉素對(duì)人體的嚴(yán)重危害，藥品細(xì)菌內(nèi)霉素的檢測(cè)程序就必不可少。現(xiàn)如今細(xì)菌內(nèi)霉素的檢測(cè)方法，主要有凝膠法、動(dòng)態(tài)濁度法、顯色基質(zhì)法三種方法。

藥品檢測(cè)；內(nèi)霉素；凝膠法；濁度法；顯色基質(zhì)法

細(xì)菌內(nèi)霉素作為外源性致熱源，可以激活人體內(nèi)的中性粒細(xì)胞，從而導(dǎo)致體溫調(diào)節(jié)中樞的發(fā)熱現(xiàn)象。內(nèi)霉素通過(guò)消化道進(jìn)入人體時(shí)并不能產(chǎn)生危害，可是一旦通過(guò)注射的途徑進(jìn)入血液，就會(huì)使人體產(chǎn)生“熱原反應(yīng)”引起不同的疾病。因此在醫(yī)藥檢測(cè)領(lǐng)域，無(wú)論是注射用藥劑、放射性藥物還是抗生素、疫苗等的藥品都必須進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)霉素含量的檢測(cè)。

一、細(xì)菌內(nèi)霉素的檢測(cè)手段

現(xiàn)在的細(xì)菌內(nèi)霉素檢測(cè)手段，主要有凝膠法和光度測(cè)量法兩種。

1.1 、凝膠法

凝膠法是利用鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)來(lái)檢測(cè)藥品中是否含有過(guò)量細(xì)菌內(nèi)霉素的方法。凝膠法操作簡(jiǎn)單，即便離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室也能對(duì)細(xì)菌內(nèi)霉素的含量進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 、光度測(cè)量法

光度測(cè)量法分為濁度法和顯色基質(zhì)法在藥品的試劑檢測(cè)中，我們通常使用的方法是動(dòng)態(tài)濁度法。動(dòng)態(tài)濁度法是通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)混合物的濁度到達(dá)某一吸光度的速率計(jì)算樣品內(nèi)霉素含量的一種方法。

二、細(xì)菌內(nèi)霉素檢測(cè)幾種方法的對(duì)比

為了保證數(shù)據(jù)的一致性和準(zhǔn)確性，我們所引用的主要數(shù)據(jù)就是依次使用凝膠法、動(dòng)態(tài)濁度法、顯色基質(zhì)法對(duì)乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液進(jìn)行檢測(cè)。

2.1 、凝膠法和動(dòng)態(tài)濁度法細(xì)菌內(nèi)霉素檢測(cè)對(duì)比

所需主要儀器和試劑：BET-32M細(xì)菌內(nèi)霉素檢測(cè)儀；UV-2550型紫外分光光度計(jì)；PHS-3C型酸度計(jì)；ZH-2型自動(dòng)漩渦混合器；細(xì)菌內(nèi)霉素檢查用水（bet）；鱟試劑；內(nèi)霉素標(biāo)準(zhǔn)品（ces）。

樣品：乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液。

2.1.1.細(xì)菌內(nèi)霉素限值的確定

已知L＝K/M，K為人用每kg體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)霉素劑量，K＝5 EU/（kg·h）。考慮到藥品使用安全性要求及一般大容量輸液細(xì)菌內(nèi)霉素限值要求，將本品的L定為0.5 EU/mL為宜。

2.1.2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)

用細(xì)菌內(nèi)霉素檢查用水對(duì)內(nèi)霉素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋為四個(gè)濃度的樣品，于鱟試劑混合均勻后插入細(xì)菌內(nèi)霉素檢測(cè)儀內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)過(guò)測(cè)量整理可得系數(shù)r＞0.980，故標(biāo)準(zhǔn)曲線成立。

2.1.3.樣品最大稀釋倍數(shù)和干擾性試驗(yàn)

按照公式MVD=L/λ，計(jì)算得樣品實(shí)驗(yàn)時(shí)MVD為16倍。將乳酸左氧氟沙星注射液分別稀釋為2、4、6、8倍進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)。分別取上述各液0.15ml加到預(yù)先加有0.15ml的鱟試劑反應(yīng)管，混合均勻在同上檢測(cè)條件下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)束后按照標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算出內(nèi)霉素含量。通過(guò)實(shí)驗(yàn)可知，樣品的回收率均在規(guī)定范圍之間，符合相關(guān)要求。

2.1.4.動(dòng)態(tài)濁度法與凝膠法檢測(cè)結(jié)果比較

按照《中國(guó)藥典》中用動(dòng)態(tài)濁度法和凝膠法對(duì)乳酸左氧氟沙星進(jìn)行檢測(cè)可知兩種方法結(jié)果均符合規(guī)定，詳表如下：

動(dòng)態(tài)濁度法與凝膠法檢測(cè)結(jié)果

動(dòng)態(tài)濁度法和凝膠法比較來(lái)說(shuō)，有著操作簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀可見(jiàn)的優(yōu)點(diǎn)。針對(duì)藥品的細(xì)菌內(nèi)霉素檢測(cè)領(lǐng)域要求高、批量大的特點(diǎn)是非常實(shí)用的。

2.2 、顯色基質(zhì)法與動(dòng)態(tài)濁度法細(xì)菌內(nèi)霉素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)比較

所需主要儀器和試劑：渦旋混合儀；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；璃比色杯；定量可調(diào)移液器；顯色基質(zhì)鱟試劑盒；顯色基質(zhì)；內(nèi)霉素標(biāo)準(zhǔn)品（CES）；細(xì)菌內(nèi)霉素檢測(cè)用水（BET）；Hcl反應(yīng)終止劑。

樣品：乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液

2.2.1.細(xì)菌內(nèi)霉素限值的確定

原理同實(shí)驗(yàn)2.1，通過(guò)計(jì)算可得，本樣品的細(xì)菌內(nèi)霉素限制L= 0.5EU/mg

2.2.2.標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)

用和試驗(yàn)2.1中標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)2.1.2中的方法對(duì)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行可靠性試驗(yàn)，得到r≥0.980，故標(biāo)準(zhǔn)曲線有效。

2.2.3.樣品的干擾實(shí)驗(yàn)

將三組實(shí)驗(yàn)用乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液加入BET，稀釋4種比例的稀釋級(jí)原液，在四個(gè)稀釋級(jí)原液中加入0.2EU/ml的內(nèi)霉素標(biāo)準(zhǔn)品。用分光光度計(jì)測(cè)量出稀釋原液與內(nèi)霉素標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度。根據(jù)結(jié)果計(jì)算稀釋原液除1：5的一組有輕微增強(qiáng)作用外，其余均沒(méi)有抑制或增強(qiáng)作用，回收率都在規(guī)定的要求之內(nèi)。

2.2.4.樣品的測(cè)定

選擇1：7的稀釋液測(cè)定，三組乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液的檢測(cè)結(jié)果，都符合規(guī)定。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)比可，顯色基質(zhì)法除了對(duì)實(shí)驗(yàn)用品和稀釋液要求無(wú)熱源外，對(duì)鱟試劑靈敏度也有著比較高的要求。但而且顯色基質(zhì)法與凝膠法相比，抗干擾能力更強(qiáng)。相比于動(dòng)態(tài)濁度法，顯色基質(zhì)具有更好的重復(fù)性和可操作性，這種方法卻有著比凝膠法和動(dòng)態(tài)濁度法更快速、更靈敏。因?yàn)樗鼉H需要可見(jiàn)分光光度計(jì)和玻璃比色皿就能夠得出結(jié)論，在實(shí)驗(yàn)條件比較簡(jiǎn)單的地方也可以展開(kāi)，因此對(duì)于醫(yī)藥檢測(cè)領(lǐng)域的細(xì)菌內(nèi)霉素的測(cè)定，也有著很大的現(xiàn)實(shí)意義。

綜上所述，傳統(tǒng)的凝膠法有著測(cè)量簡(jiǎn)單方便的特點(diǎn)；動(dòng)態(tài)濁度法有著測(cè)量結(jié)果數(shù)據(jù)化更準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)；顯色基質(zhì)法更是兼有著測(cè)量準(zhǔn)確和測(cè)量工具簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。這三種方法各有優(yōu)點(diǎn)，因此無(wú)論是凝膠法，動(dòng)態(tài)濁度法，顯色基質(zhì)法目前都是在藥品內(nèi)霉素測(cè)量領(lǐng)域常用的方法。所以在日常的藥品檢測(cè)當(dāng)中，就應(yīng)該根據(jù)具體的需要靈活巧妙的選擇和運(yùn)用這幾種方法。

[1]李春燕.定量檢測(cè)香丹注射液中的細(xì)菌內(nèi)霉素的方法分析[J].中國(guó)藥物經(jīng)濟(jì)學(xué).2014(03)

[2]潘宇虹,鐘巖.細(xì)菌內(nèi)霉素檢查法在疫苗生產(chǎn)檢查中的應(yīng)用[J].生物技術(shù)世界.2014(03)