李德法，陳娟，王燁

廈門市婦幼保健院醫(yī)學檢驗科，福建廈門 361000

10例EDTA－K2誘導血小板假性減少患者3種檢測方法結果對比分析

李德法，陳娟，王燁

廈門市婦幼保健院醫(yī)學檢驗科，福建廈門 361000

目的初步分析EDTA依賴性血小板減少的現(xiàn)象及原因。方法用3種方法對EDTA-K2誘導血小板假性減少患者的血小板和白細胞進行分析。結果EDTA-K2抗凝血與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法的血小板結果在不同時間段均差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；>30 min時EDTA-K2抗凝血與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法測定白細胞結果差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；EDTA-K2抗凝血涂片均可見血小板成團成簇聚集，末梢血涂片和各個時間段的枸櫞酸鈉抗凝血血小板均為散在分布。結論 及時與臨床溝通，同時重抽EDTA-K2抗凝靜脈血和枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，并馬上送到檢驗科化驗，以降低血小板假性聚集的可能。

血小板假性減少；抗凝劑；EDTA-K2；枸櫞酸鈉

隨著血細胞分析儀的推廣，由于抗凝劑乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)對血細胞的形態(tài)、體積影響很小，在臨床廣泛應用。但我們在工作中發(fā)現(xiàn)極少數(shù)人標本可在EDTA-K2誘導下使血小板假性減少，導致臨床誤診。該文對在廈門市婦幼保健院使用EDTA-K2抗凝劑而引起血小板假性減少的10例患者的血小板和白細胞結果進行分析，報道如下。

1 對象與方法

1.1 檢測對象

選取2015年6—9月在該院住院的患者，首次使用EDTA-K2抗凝靜脈血在SYSMEX XS-1000i血細胞分析儀檢測血小板結果明顯降低，推片染色鏡檢發(fā)現(xiàn)血小板有聚集現(xiàn)象，手工計數(shù)在正常范圍內(nèi)，體表檢查無出血點、瘀斑、瘀點等血小板減少癥狀，臨床診斷為EDTA依賴性血小板假性減少患者10例，均為女性，年齡20～40歲。

1.2 儀器與試劑

①SYSMEX XS-1000i全自動血細胞分析儀及其配套試劑和質(zhì)控品；②EDTA-K2抗凝管、枸櫞酸鈉抗凝管為福州長庚醫(yī)療器械有限公司提供；③光學顯微鏡（OLYMPUS）；④瑞氏-姬姆薩染液為珠海貝索公司生產(chǎn)；⑤按照標準操作規(guī)程配制血小板稀釋液及白細胞稀釋液[1]。

1.3 方法

①經(jīng)患者同意，采集EDTA-K2和枸櫞酸鈉抗凝靜脈血標本各1份，分別于10～15 min、20～25 min、＞30 min在SYSMEX XS-1000i全自動血細胞分析儀上計數(shù)血小板和白細胞值。因枸櫞酸鈉抗凝劑與血液比例為1:9，故本文所有枸櫞酸鈉抗凝管計數(shù)結果均已乘以1.1校正。

②采集患者末梢血，分別用微量吸管吸取20 μL末梢指血于380 μL的血小板稀釋液和白細胞稀釋液中，靜置10 min后在顯微鏡下手工計數(shù)3次取其平均值。

③取初次采集的末梢血，并分別在10～15 min、20～25 min、＞30 min取EDTA-K2和枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，制作血涂片，用瑞氏-姬姆薩染液染色，顯微鏡下觀察血小板的聚集與分布情況。

1.4 統(tǒng)計方法

使用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料應用均數(shù)±標準差(±s)表示，結果進行t檢驗。

2 結果

2.1 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定血小板結果

EDTA-K2抗凝血與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法的血小板結果在3個不同時間段差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；手工法與枸櫞酸鈉抗凝血的血小板結果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；EDTA-K2抗凝血的血小板隨時間延長而降低,枸櫞酸鈉抗凝血的血小板隨時間延長未見明顯改變，見表1。

表1 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定血小板結果[±s)，×109/L]

表1 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定血小板結果[±s)，×109/L]

注：*為10 min時計數(shù)結果。

測定方法10～15 min 20～25 min ＞30 min EDTA-K2抗凝血（儀器法）枸櫞酸鈉抗凝血（儀器法）末梢血（手工法）105±45 215±54（205±53）*51±19 218±61 -29±10 211±42 -

2.2 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定WBC結果

10～15 min、20～25 min時3種測定方法的白細胞結果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；＞30 min時EDTA-K2抗凝血與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法測定白細胞結果差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定白細胞結果[(±s)，×109/L]

表2 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定白細胞結果[(±s)，×109/L]

注：*為10 min時計數(shù)結果。

測定方法10～15 min 20～25 min ＞30 min EDTA-K2抗凝血（儀器法）枸櫞酸鈉抗凝血（儀器法）末梢血（手工法）7.2±3.1 7.4±2.7（7.3±2.9）*7.5±2.8 7.2±3.1 -7.8±3.1 7.3±3.2 -

2.3 血涂片結果

3種血涂片經(jīng)瑞氏染色鏡檢，EDTA-K2抗凝血涂片均可見血小板成團成簇聚集，且隨時間延長血小板簇集增多;而末梢血涂片和各個時間段的枸櫞酸鈉抗凝血血小板均為散在分布。

3 討論

血小板降低是引起出血的常見原因之一，血小板在20×109/L～50×109/L時，可能存在輕度出血或術后出血癥狀，低于20×109/L×109/L時，可能存在較嚴重的出血；低于5×109/L時，可能導致嚴重的出血并可危及生命[2]。血小板計數(shù)的準確性直接影響臨床對患者的診治，及時發(fā)現(xiàn)血小板假性減少現(xiàn)象，選擇正確的方法進行糾正尤為重要。

EDTA-K2通過與血液中的鈣離子(凝血因子Ⅳ)結合形成鰲和物，從而阻止血液凝固，但它偶爾可導致血小板聚集，發(fā)生血小板假性減少。而且溶血素無法破壞這種血小板的聚集體，它們的體積較大，使血細胞分析儀誤認為是白細胞計數(shù)，使得白細胞結果相對升高[3]。當發(fā)生這種現(xiàn)象時，可用枸櫞酸鈉抗凝血在顯微鏡下計數(shù)或用血細胞分析儀計算血小板數(shù)量[4]，也可直接吸取末梢血置入血小板稀釋液中計數(shù)，還有文獻認為可用肝素鈉作抗凝劑來糾正血小板數(shù)量[5]。該次實驗結果表明，與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法相比，EDTA-K2測定的血小板在10～15 min就明顯減少，并隨著時間延長不斷降低，超過30 min后，白細胞計數(shù)也相對升高，而枸櫞酸鈉抗凝血和手工法相比無明顯差異。

該研究認為，為了檢驗結果的準確性，檢驗人員必須加強責任心，在實際工作中一旦在檢驗過程中發(fā)現(xiàn)EDTAK2抗凝標本血小板明顯降低與患者臨床癥狀不符，應作如下檢查：①查看血細胞分析儀的報警信息及血小板直方圖尾部是否出現(xiàn)翹尾情況；②血涂片觀察血小板的分布及形態(tài)；③要求臨床同時重抽EDTA-K2抗凝靜脈血和枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，并馬上送到檢驗科化驗，以降低血小板假性聚集的可能，減少患者不必要的醫(yī)療費用和痛苦。

[1]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學出版社,2006:123-124,136.

[2]熊立凡,劉成玉.臨床檢驗基礎[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:67.

[3]劉麗波,張哲,趙殿鳳,等.EDTA依賴性假性血小板減少癥5例臨床分析[J].中國臨床研究,2011,24(1):60.

[4]張之南,單淵東,李蓉生,等.協(xié)和血液病學[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社,2004：631.

[5]鄭云.三種方法對EDTA-K2抗凝劑引起血小板假性減少的檢測及分析[J].臨床醫(yī)學工程,2011,18(12):1924.

Contrastive Analysis of theResultsby ThreeMethodsin 10 Cases of Patients With Pseudo-thrombocytopenia Caused by EDTA-K2 Anticoagulation

LI De-fa，CHEN Juan，WANG Ye
Department of Clinical Laboratory,Xiamen Maternal and Children′s Hospital,Xiamen，F(xiàn)ujian Province，361000 China

ObjectiveTo investigate the phenomenon and causes of EDTA-dependent thrombocytopenia.MethodsUsing three ways to analyze the platelet and leukocyte in patients with pseudo-thrombocytopenia caused by EDTA-K2 anticoagulation.ResultsIn all time periods,the platelet counts of EDTA-K2 anticoagulated venous blood showed statistically significant difference from the results obtained by sodium citrate anticoagulated venous blood and manual methods(P<0.05).And the leukocyte counts of EDTA-K2 anticoagulated venous blood showed statistically significant difference from the results obtained by sodium citrate anticoagulated venous blood and manual methods after 30 min(P<0.05).Microscopic examination of the blood smear showed that platelets aggregate into clot in all periods in EDTA-K2 anticoagulated venous blood,while the peripheral blood and sodium citrate anticoagulated venous blood appeared scattered in the distribution in all periods.ConclusionTimely communication with the clinical,take both EDTA-K2 anticoagulated venous blood and sodium citrate anticoagulated venous blood immediately,can reduce the possibility of platelet aggregation.

Pseudo thrombocytopenia;Anticoagulants;EDTA-K2;Citrate sodium

R446.11

A

1672-5654（2015）12（b）-0100-03

2015-09-12）

綜述的寫作格式

10.16659/j.cnki.1672-5654.2015.35.100

李德法（1973.9-），男，福建泉州人，本科，主管技師，主要從事臨床免疫學研究工作。

綜述的寫作格式一般包括四部分，即前言、正文、小結、參考文獻。 前言，要用簡明扼要的文字說明寫作的目的、必要性、有關概念的定義、綜述的范圍、闡述有關問題的現(xiàn)狀和動態(tài)以及目前對主要問題爭論的焦點等。正文，是綜述的重點，主要包括論據(jù)和論證兩個部分，正文部分根據(jù)內(nèi)容的多少可分為若干個小標題分別論述。小結，是在綜述正文部分作扼要的總結，作者應對各種觀點進行綜合評價，提出自己的看法，指出存在的問題及今后發(fā)展的方向和展望。