劉登科

（湖南省安化縣坪口鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站，湖南安化413511）

近年來，湖南省常德、益陽和岳陽等地利用摩拉水牛冷凍精液進(jìn)行人工授精來雜交改良濱湖水牛，以求提高水牛養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益。但由于本地水牛母牛的持續(xù)發(fā)情時(shí)間較長，外部發(fā)情表現(xiàn)不明顯，以及地方的冷配員配種操作技術(shù)不熟練導(dǎo)致配種輸精時(shí)機(jī)不當(dāng)，導(dǎo)致水牛母牛的情期受胎率不高，一般為40%左右。因此，基于適合湖南水牛養(yǎng)殖特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，為了探索出適用于濱湖水牛簡便、快捷、經(jīng)濟(jì)、有效的同期發(fā)情處理方法，以解決養(yǎng)殖戶在母牛水正常發(fā)情周期中發(fā)情鑒定和配種輸精時(shí)機(jī)判斷和把握等問題，提高母水牛情期受胎率，促進(jìn)湖南省水牛品種改良工作的開展，本試驗(yàn)就氯前列烯醇（PGF2α）不同處理方式進(jìn)行了比較研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

所有用于試驗(yàn)的母水牛為安化縣農(nóng)戶分散飼養(yǎng)。白天為放養(yǎng)為主，夜間少量補(bǔ)飼玉米和干稻草。試驗(yàn)牛群處理前首先進(jìn)行直腸檢查，確認(rèn)子宮、卵巢發(fā)育正常，并詢問其繁殖史，無長期不發(fā)情、不孕、習(xí)慣性流產(chǎn)等生殖疾病的母牛個(gè)體。

1.2 時(shí)間和地點(diǎn)

試驗(yàn)時(shí)間為2012年10月至2015年3月，試驗(yàn)地點(diǎn)為益陽安化縣。

1.3 藥品來源

所使用的激素全部為寧波某藥業(yè)公司產(chǎn)品。氯前列醇鈉注射液，每支2mL含有效成分0.2mg。

1.4 試驗(yàn)分組

根據(jù)藥物不同處理方式、不同注射部位，試驗(yàn)共分為5組，記錄每只牛的發(fā)情情況和妊娠情況。

處理組采用子宮灌注法，先將輸精套管套入輸精槍上，利用直腸把握法將輸精槍頭通過子宮頸口，抽出輸精槍，向輸精套管中注入4mL PG。對照組為肌肉注射4mLPG。處理后觀察發(fā)情情況，適時(shí)輸精配種。1組：一次PG肌注法；2組：一次PG宮內(nèi)灌注法；3組：二次PG肌注法；4組：二次PG宮內(nèi)灌注法。

1.5 發(fā)情判斷標(biāo)準(zhǔn)和人工授精

母水牛發(fā)情鑒定主要以母牛相互爬跨，外陰腫脹充血，陰道內(nèi)粘膜充血潮紅，并伴有清亮粘液流出等現(xiàn)象，試驗(yàn)用牛在激素注射后96h(4d)內(nèi)表現(xiàn)出明顯發(fā)情癥狀即判斷為同期化發(fā)情。試驗(yàn)配種用精液為湖南省畜牧獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的摩拉水牛冷凍細(xì)管精液，解凍后活力為0.3以上，一次輸精量為1支(0.22～0.25mL)。采用直腸把握法子宮頸深部輸精。妊娠檢查在輸精3個(gè)月后進(jìn)行直腸把握或B超孕檢。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

本試驗(yàn)組間差異的顯著性分析均采用SPSS 9.0統(tǒng)計(jì)軟件和卡方檢驗(yàn)(χ2)分析。

2 結(jié)果

2.1 PG對母水牛同期發(fā)情率及受胎率的影響

表1 PG對母水牛同期發(fā)情率及受胎率的影響

從表1可以看出，在4種不同的氯前列醇鈉（PG）處理方式中，灌注二次PG法同期發(fā)情率最高，為76.92%，要顯著高于肌注一次PG法的55.56%和肌注二次PG法的60%（p＜0.05），與灌注一次PG的同期發(fā)情率差異不顯著（p＞0.05）。受胎率方面，按發(fā)情頭數(shù)計(jì)算，四個(gè)處理組在40%～50%，各組差異不顯著（p＞0.05）。按總處理頭數(shù)計(jì)算，灌注二次PG為38.46%，要顯著高于肌注一次PG法的22.22%（p＜0.05），其他各組差異不顯著（p＞0.05）。

2.2 不同PG處理次數(shù)對母水牛同期發(fā)情及受胎率的影響

表2 不同PG處理次數(shù)對母水牛同期發(fā)情及受胎率的影響

按PG處理次數(shù)分組，一次PG處理組同期發(fā)情率為60%，二次PG同期發(fā)情率為69.56%，兩組差異不顯著（p＞0.05）。一次PG處理組受胎率（分別按發(fā)情頭數(shù)和處理頭數(shù)計(jì)算）為41.67%和25.00%，與二次PG處理的50.00%和34.78%比較，差異不顯著（p＞0.05）。詳情見表 2。

2.3 不同PG處理方式對母水牛同期發(fā)情及受胎率的影響

表3 不同PG處理方式對母水牛同期發(fā)情及受胎率的影響

從表3看出，按PG處理方式分組，肌注PG組同期發(fā)情率為57.89%，顯著低于灌注法的70.83%（p＜0.05）。肌注PG組受胎率（分別按發(fā)情頭數(shù)和處理頭數(shù)計(jì)算）為45.45%和26.32%，與灌注PG組的47.06%和33.33%比較，差異不顯著（p＞0.05）。

3 討論

1966年，首次報(bào)道了前列腺素(PG)可能是導(dǎo)致黃體溶解的物質(zhì)。PG及其高效類似物已在畜牧生產(chǎn)中得到了廣泛應(yīng)用[1]。其在同期發(fā)情中所起的作用機(jī)制一般認(rèn)為是直接作用于黃體組織，孕酮合成受到抑制，誘發(fā)黃體細(xì)胞凋亡；或者是引起子宮組織血管平滑肌的收縮，使子宮、卵巢等組織的毛細(xì)血管血流量下降，導(dǎo)致卵巢組織局部缺血，影響黃體組織正常的激素合成和分泌功能，抑制孕酮激素的合成[2]。周期黃體遭到破壞，孕酮水平下降，雌激素和FSH分泌上升，誘導(dǎo)母牛發(fā)情。

國內(nèi)董偉和王建辰最早開始關(guān)于前列腺素誘導(dǎo)牛發(fā)情的效果研究和報(bào)道[3,4]。在PG處理方式和處理次數(shù)研究方面，貴州畜牧獸醫(yī)研究所[5]對采用PGF1a對水牛進(jìn)行臀部肌注和子宮輸入兩種方式處理，發(fā)情率和受胎率差異不顯著。PGF1a一次處理法和二次處理法，發(fā)情率和受胎率差異也不顯著。而何中光等（2012）采用氯前列烯醇(PGF2α)對奶牛進(jìn)行同期發(fā)情處理發(fā)現(xiàn)，PG二次處理組的發(fā)情率和受胎率顯著高于一次處理組，且宮內(nèi)灌注組的發(fā)情率和受胎率顯著高于肌注處理組[6]。

在本試驗(yàn)中，肌注PG組同期發(fā)情率顯著低于灌注法。肌注PG組受胎率與灌注PG組差異不顯著。這可能是PG通過子宮灌注方式可以直接作用于子宮內(nèi)膜細(xì)胞組織，刺激內(nèi)膜細(xì)胞分泌內(nèi)源性溶黃體素，從而直接作用于卵巢和黃體。而通過肌注的PG，需要通過血液循環(huán)后才能作用于卵巢上的黃體組織，其作用的效果大打折扣[6]。因此，宮內(nèi)灌注PG的溶黃體效果要好于肌注法。

一般認(rèn)為，在牛同期發(fā)情處理操作中，PG只對母牛發(fā)情周期中功能性黃體有溶解功能，而對排卵前后的新生成黃體和衰退黃體組織效果不明顯[6]。因此，為了得到理想的配種效率，實(shí)際操作過程中一般對第1次處理后表現(xiàn)發(fā)情的母牛不予配種，經(jīng)過10～11 d后，再進(jìn)行第2次PG處理，這樣同期發(fā)情率和受胎率會(huì)有所提高。本試驗(yàn)中二次PG處理組的發(fā)情率雖高于一次處理組，但未到達(dá)顯著差異。受胎率差異也不顯著。這可能是試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)次數(shù)有限的原因。

4 結(jié)論

利用PG進(jìn)行湖南安化本地水牛同期發(fā)情處理時(shí)，二次PG處理法要優(yōu)于一次PG處理法，子宮內(nèi)兩次灌注法能得到較好的發(fā)情率和受胎率。

[1]曹少先,楊利國,張文偉.前列腺素F2a溶解黃體機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國草食動(dòng)物,2001,3(4):41-44.

[2]高進(jìn)東,毛軍福,黎艷.前列腺素的作用機(jī)理及其應(yīng)用[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊,2007,（1）:27-28.

[3]米洛萬諾夫，索科洛夫斯卡婭,董偉.前列腺素及其應(yīng)用于畜牧業(yè)的前途[J].中國畜牧獸醫(yī),1975，（4）:24-28.

[4]王建辰.用前列腺素引起牛的同期發(fā)情[J].國外畜牧科技資料,1975，（1）:31-32

[5]貴州畜牧獸醫(yī)研究所.應(yīng)用前列腺素及其類似物對水牛同期發(fā)情試驗(yàn)初報(bào)[J].中國畜牧雜志,1979,（1）:15-17.

[6]何光中,劉鏡,楊紅文,等.利用氯前列烯醇誘導(dǎo)奶牛同期發(fā)情及定時(shí)輸精效果分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(3):1517-1518,1556.