李欣欣，魯衍強(qiáng)，馬少杰*，龔明霞，袁亞琴，黃云霞，張忠良，楊 琦

（1.張家港市婦幼保健所，江蘇張家港 215600;2.上海靶向分子醫(yī)學(xué)研究所，上海 200433;3.中國疾病預(yù)防控制中心婦幼保健中心，北京 100101）

張家港市漢族女性MTHFR與MTRR基因多態(tài)性分布

李欣欣1，魯衍強(qiáng)2，馬少杰2*，龔明霞1，袁亞琴1，黃云霞1，張忠良1，楊 琦3

（1.張家港市婦幼保健所，江蘇張家港 215600;2.上海靶向分子醫(yī)學(xué)研究所，上海 200433;3.中國疾病預(yù)防控制中心婦幼保健中心，北京 100101）

目的 探討張家港市漢族女性MTHFR、MTRR基因多態(tài)性的頻率特征，以指導(dǎo)孕婦增補(bǔ)葉酸和出生缺陷一級預(yù)防。方法 以張家港市4008例漢族女性為研究對象，檢測MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G的基因分型。統(tǒng)計(jì)分析基因多態(tài)性的頻率特征，并與已報(bào)道的其他地區(qū)漢族女性的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果 張家港市漢族女性的MTHFRC677T位點(diǎn)CC、CT和TT基因型頻率分別為32.2%、49.5%和18.3%。C等位基因頻率為64.3%，T等位基因頻率為35.7%。MTHFRA1298C位AA、AC和CC基因型頻率分別為68.7%、28.7%和2.5%。A等位基因頻率為80.8%，C等位基因頻率為19.2%。MTRRA66G位點(diǎn)AA、AG和GG基因型頻率分別為54.4%、38.5%和7.1%。A等位基因頻率為76.3%，G等位基因頻率為26.4%。結(jié)論 張家港市漢族女性MTHFR和MTRR基因多態(tài)性頻率具有地域特異性。

亞甲基四氫葉酸還原酶;甲硫氨酸合成酶還原酶;單核苷酸多態(tài)性

*通信作者（corresponding author）:mashaojie@genechina.com

5，10 -亞甲基四氫葉酸還原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）和甲硫氨酸合成酶還原酶（5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase，MTRR）是參與體內(nèi)葉酸代謝的關(guān)鍵酶［1］，MTHFR基因 C677T位點(diǎn)、A1298C位點(diǎn)與MTRR基因A66G位點(diǎn)的多態(tài)性會(huì)影響MTHFR與MTRR的酶活性，造成葉酸代謝異常，影響體內(nèi)葉酸及同型半胱氨酸水平，與神經(jīng)管缺陷、唇腭裂、先天性心臟病等出生缺陷［2］、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓［3］等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。孕齡婦女作為一個(gè)特殊的群體，體內(nèi)葉酸營養(yǎng)素的水平對于新生兒的健康生長發(fā)育和孕婦的身體健康都有極其重要的影響。

本研究針對張家港市漢族女性，開展大樣本的分子流行病學(xué)調(diào)查，旨在闡明本地區(qū)人群的遺傳特征，為個(gè)體化的孕期保健提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取自2013年10月至2014年12月在張家港市婦幼保健所進(jìn)行孕前與孕期檢查的漢族女性，排除籍貫非本市者，入組對象共4 008例，平均年齡（26.7±3.6）歲。根據(jù)知情同意原則，采集口腔黏膜細(xì)胞。

1.2 方法

利用硅膠吸附方法提取口腔黏膜細(xì)胞樣本的基因組DNA。采用熒光定量PCR技術(shù)，檢測MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G的基因多態(tài)性。相關(guān)儀器、試劑（ABI公司）。每個(gè) PCR反應(yīng)體系10 μL:1 μL DNA 模板（20 ng/μL），5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB 探針，3.5 μL去離子水。反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性10 min，92℃變性15 s，60℃延伸1 min，20個(gè)循環(huán);89℃變性15 s，60℃延伸90 s，30個(gè)循環(huán)。反應(yīng)完成后，在ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光，利用分析軟件確定各個(gè)樣本的基因分型結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，應(yīng)用HaploView4.2軟件進(jìn)行SNPs的Hardy-Weinberg平衡、LD水平和單倍型結(jié)構(gòu)分析。計(jì)數(shù)資料采用率表示，對基因型及等位基因頻率進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析

MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G基因多態(tài)性，檢驗(yàn)結(jié)果符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，說明樣本具有本區(qū)域群體代表性。

2.2 MTHFR、MTRR基因型和等位基因頻率

MTHFRC677T位點(diǎn)、A1298C位點(diǎn)和MTRRA66G位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率，如表1、表2所示。

表1 張家港市漢族女性MTHFR、MTRR基因型頻數(shù)和頻率Table 1 MTHFR and MTRR genotype distributions and frequencies among Han women in Zhangjiagang city（n/%）

表2 張家港市漢族女性MTHFR、MTRR等位基因頻數(shù)和頻率Table 2 MTHFR and MTRR allele frequencies among Han women in Zhangjiagang city（n/%）

表3 MTHFR C677T和A1298C連鎖型分布Table 3 MTHFR C677T and A1298C linkage analysis（n/%）

2.3 MTHFR C677T和A1298C兩位點(diǎn)連鎖情況及單倍型分析

MTHFRC677T和A1298C兩位點(diǎn)組合情況與貴州布依族和苗族人群的報(bào)道類似［4］（表3）。單倍型分析表明，存在 4種組合:CA（40.4%）、TA（42.2%）、CC（17.3%）和 TC（0.1%）。兩位點(diǎn)間存在強(qiáng)連鎖不平衡現(xiàn)象（D'=0.993）。

3 討論

出生缺陷是中國嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題和社會(huì)問題，每年新增出生缺陷約90萬。出生缺陷的發(fā)生受環(huán)境、營養(yǎng)和遺傳因素的共同影響。作為參與體內(nèi)葉酸代謝的關(guān)鍵酶，MTHFRC677T和A1298C位點(diǎn)的多態(tài)性會(huì)降低酶活性，影響葉酸代謝和利用，與神經(jīng)管畸形、先天性心臟病、唇腭裂、唐氏綜合征等出生缺陷，以及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓等孕期疾病密切相關(guān)。C677T和A1298C存在協(xié)同作用，雙雜合子個(gè)體與僅含C677T突變的個(gè)體相比，同型半胱氨酸濃度顯著升高。本研究顯示張家港市漢族女性這兩個(gè)位點(diǎn)的雙雜合子占14.6%。

張家港市漢族女性MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G位點(diǎn)多態(tài)性與其他地區(qū)［5-10］漢族女性的頻率存在差異。這種差異可能與人群對多種疾病的群體易感性有關(guān)。MTHFR677T等位基因頻率呈現(xiàn)北方高、南方低的趨勢，與中國出生缺陷發(fā)病率北方高、南方低的趨勢一致。研究表明，T基因型女性在未服用葉酸增補(bǔ)劑及低葉酸飲食的情況下，其胎兒唇腭裂的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)均會(huì)增加，若以上兩種情況同時(shí)存在，則風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)一步增高。反之，如果能夠補(bǔ)服葉酸增補(bǔ)劑、提高飲食中葉酸的含量則可以降低胎兒唇腭裂的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［11］。

MTHFRC677T基因多態(tài)性與神經(jīng)管畸形的關(guān)系已有大量證據(jù)證明，葉酸增補(bǔ)預(yù)防神經(jīng)管畸形是20世紀(jì)公共衛(wèi)生領(lǐng)域取得的最重要成果之一。但是，由于受教育程度、醫(yī)療資源、飲食環(huán)境等地域性差異的限制，中國北方貧困地區(qū)葉酸增補(bǔ)依從性依然較低，因此以神經(jīng)管畸形為主的出生缺陷仍呈高發(fā)態(tài)勢［12］，進(jìn)一步的健康教育和預(yù)防措施（葉酸增補(bǔ)）仍然十分重要。通過對育齡女性進(jìn)行遺傳篩查，針對存在葉酸代謝障礙的遺傳風(fēng)險(xiǎn)人群，采取增加營養(yǎng)素補(bǔ)充、加強(qiáng)紅細(xì)胞葉酸水平監(jiān)測、提高產(chǎn)前篩查和孕期管理依從性等干預(yù)措施是有效達(dá)到出生缺陷及孕期疾病一級預(yù)防目的的重要方法，也是提高人口素質(zhì)的必要手段。

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The distribution of gene polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase and methionine synthase among Han women in Zhangjiagang city

LI Xin-xin1，LU Yan-qiang2，MA Shao-jie2*，GONG Ming-xia1，YUAN Ya-qin1，HUANG Yun-xia1，ZHANG Zhong-liang1，YANG Qi3

（1.Zhangjiagang Women and Children Health Center，Zhangjiagang 215600;2.Shanghai Institute of Target Molecules，Shanghai 200433;3.National Center for Women and Children's Health，China CDC，Beijing 100101，China）

ObjectiveTo explore the 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase（MTHFR）and 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase（MTRR）gene polymorphisms among the Han women in Zhangjiagang city.MethodsA total of 4008 Han women were recruited.Their oral epithelial cells were collected to extract genome DNA in order to detect gene polymorphisms ofMTHFRandMTRRusing fluorescence quantitative PCR.Then the results were compared with those in other cities in China.ResultsThe genotype frequencies ofMTHFRC677T CC，CT and TT among Zhangjiagang women are 32.2%，49.5%and 18.3%，respectively.The C allele frequency is 64.3%，T allele frequency is 35.7%.The genotype frequencies ofMTHFRA1298C AA，AC and CC are 68.7%，28.7%and 2.5%，respectively.The A allele frequency is 80.8%，C allele frequency is 19.2%.The genotype frequencies ofMTRRA66G AA，AG and GG are 54.4%，38.5%and 7.1%，respectively.The A allele frequency is 76.3%，G allele frequency is 26.4%.ConclusionsTheMTHFR，MTRRpolymorphism distribution of Han women in Zhangjiagang city is region specific

methylenetetrahydrofolate reductase;methionine synthase reductase;single nucleotide polymorphisms

R715.5

A

10.16352/j.issn.1001-6325.2015.09.016

1001-6325（2015）09-1228-04

2015-02-11

2015-05-28

中國疾病預(yù)防控制中心婦幼保健中心婦幼保健分子遺傳醫(yī)學(xué)研究專項(xiàng)計(jì)劃（FY-ZX-ZD-0106）