王志強(qiáng)，馬 琦，王婷婷，蘇銀霞，馬 艷，朱 筠，姚 華*

（新疆醫(yī)科大學(xué)1.公共衛(wèi)生學(xué)院，新疆烏魯木齊 830011;

2.第一附屬醫(yī)院代謝性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆烏魯木齊 830054）

轉(zhuǎn)錄因子7類似物2基因多態(tài)性與新疆維吾爾族人群2型糖尿病遺傳易感性的關(guān)系

王志強(qiáng)1，馬 琦2，王婷婷1，蘇銀霞1，馬 艷1，朱 筠2，姚 華2*

（新疆醫(yī)科大學(xué)1.公共衛(wèi)生學(xué)院，新疆烏魯木齊 830011;

2.第一附屬醫(yī)院代謝性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆烏魯木齊 830054）

目的 探討新疆地區(qū)維吾爾族人群轉(zhuǎn)錄因子7類似物2（TCF7L2）基因多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)系。方法采用病例-對照研究設(shè)計(jì)，以經(jīng)確診的819例2型糖尿病患者作為病例組，選取731例健康個(gè)體作為對照組。收集研究對象血液標(biāo)本5mL，提取基因組DNA。應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF）進(jìn)行多態(tài)性檢測，用logistic回歸計(jì)算OR（95%CI）值，比較不同基因型與2型糖尿病患病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。結(jié)果 病例組TCF7L2基因rs7901695位點(diǎn)的TC和CC基因型頻率，C等位基因頻率顯著高于對照組（P＜0.05）。未發(fā)現(xiàn)TCF7L2基因與環(huán)境因素的交互作用與2型糖尿病相關(guān)聯(lián)。結(jié)論TCF7L2基因rs7901695多態(tài)性位點(diǎn)可能與新疆維吾爾族人群2型糖尿病具有相關(guān)性，而rs7085532多態(tài)性位點(diǎn)可能與新疆維吾爾族人群2型糖尿病無相關(guān)性。

多態(tài)性;TCF7L2基因;2型糖尿病;維吾爾族

*通信作者（corresponding author）:yaohua01@sina.com

全世界有超過2億人群患有2型糖尿病，遺傳和環(huán)境因素相互作用被認(rèn)為是2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制［1］。初次研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子 7類似物 2（TCF7L2）的5個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)和1個(gè)四核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（DG10S478）與冰島、丹麥和美國人群2型糖尿病患者具有較強(qiáng)的相關(guān)性［2］，隨后TCF7L2基因與2型糖尿病的相關(guān)性在不同國家、地區(qū)和種族人群得到了驗(yàn)證［5-7］，然而在中國漢族人群中卻有很大的差異［8-10］。新疆自古以來就是多民族的聚居區(qū)，其中漢族人口占40%，維吾爾族人口占46%，維吾爾族人群具有特定的飲食習(xí)慣、生活方式，造成了2型糖尿病的相對高發(fā)，然而TCF7L2基因rs7901695和rs7085532與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)性研究在新疆維吾爾族人群中未見報(bào)道。因此本研究采用病例對照的方法，探討TCF7L2基因rs7901695和rs7085532是否與新疆地區(qū)維吾爾族人群2型糖尿病相關(guān)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選擇2012年3月至2013年3月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院入院進(jìn)行就診的維吾爾族2型糖尿病患者作為病例組，共819例，男性468例，女性351例，平均年齡（51.1±9.7）歲，2型糖尿病的診斷根據(jù)2007年中國糖尿病防治指南公布標(biāo)準(zhǔn):空腹血漿葡萄糖≥7.0 mmol/L或口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）后2 h血糖≥11.1 mmol/L或既往有確切糖尿病病史、正在使用降糖藥物或胰島素者。選擇同期在該院體檢中心的健康體檢者作為對照組，共731例，男性382例，女性349例，平均年齡（50.3±9.7）歲，空腹血漿葡萄糖＜6.1 mmol/L和口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）后2 h血糖＜7.8 mmol/L，未服用任何影響糖脂代謝的藥物，無糖尿病家族史。受試者為無血緣關(guān)系并且在新疆地區(qū)長久居住達(dá)20年以上的常住人口，3代直系親屬均為維吾爾族，最大限度地排除了由于環(huán)境和地域差異而引起的基因變異。本研究方案經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對象均自愿簽署書面知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 一般臨床資料收集:使用統(tǒng)一設(shè)計(jì)的流行病學(xué)調(diào)查問卷，由經(jīng)過統(tǒng)一培訓(xùn)并合格的調(diào)查員對研究對象進(jìn)行面對面調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容包括年齡、性別、吸煙史、飲酒史、個(gè)人及家族疾病史等。

1.2.2 基因組DNA的提取:所有研究對象空腹抽取靜脈血5mL，充分抗凝處理后置于－80℃冰箱保存?zhèn)溆?，采用全血基因組DNA提取試劑盒（北京百泰克生物技術(shù)有限公司），對外周靜脈血白細(xì)胞DNA進(jìn)行提取，用紫外分光光度儀檢測DNA含量，測定吸光度值（A值）A260和A280，其比值在1.8～2.0之間。

1.2.3TCF7L2基因SNP分型檢測 SNP檢測過程結(jié)合多重PCR技術(shù)、單堿基延伸技術(shù)，和基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析質(zhì)譜技術(shù)（matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight，MALDI-TOF）進(jìn)行分型檢測，見參考文獻(xiàn)［3］。使用Sequenom公司Genotyping Tools及MassARRAY Assay Design軟件設(shè)計(jì)待測SNP位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增引物及單堿基延伸引物，并交由生物公司合成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0軟件包，計(jì)算TCF7L2基因型及等位基因頻率，采用χ2擬合優(yōu)度檢驗(yàn)基因型分布是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律;計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率表示，兩組間計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn);等位基因及基因型頻率比較采用χ2檢驗(yàn);采用非條件logistic回歸分析不同基因型人群疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及基因型與環(huán)境的交互作用。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

納入1 550名研究對象中，病例組與對照組間年齡、性別、吸煙和飲酒率均無差異（表1）。

2.2 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)

TCF7L2基因rs7901695和rs7085532多態(tài)性位點(diǎn)在病例組和對照組基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡。

2.3 TCF7L2基因rs7901695及rs7085532多態(tài)性位點(diǎn)等位基因頻率分布與2型糖尿病的關(guān)系

病例組rs7901695位點(diǎn)的C等位基因頻率顯著高于對照組（P＜0.01），C等位基因攜帶者患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)為T等位基因攜帶者的1.268倍（OR=1.268，95%CI為1.062～1.514）（表2）。

2.4 TCF7L2基因rs7901695及rs7085532多態(tài)性位點(diǎn)基因型頻率分布與2型糖尿病的關(guān)系

病例組rs7901695位點(diǎn)的TC和CC基因型頻率顯著高于對照組（P＜0.05），rs7901695位點(diǎn)多態(tài)性與2型糖尿病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)（表3）。

2.5 TCF7L2基因和環(huán)境因素的交互作用與2型糖尿病的關(guān)系

校正年齡、性別和飲酒后，發(fā)現(xiàn) rs7901695及rs7085532位點(diǎn)和吸煙在2型糖尿病的發(fā)生中不存在交互作用（表4）;校正年齡、性別和吸煙后，發(fā)現(xiàn)rs7901695及rs7085532位點(diǎn)和飲酒在2型糖尿病的發(fā)生中不存在交互作用（表5）。

3 討論

TCF7L2又名淋巴細(xì)胞因子4（TCF4），位于人類染色體10q25.3，其表達(dá)的蛋白質(zhì)為β連環(huán)素的核受體，是一種在Wnt信號途徑發(fā)揮重要作用的關(guān)鍵蛋白，具有促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化以及調(diào)控腸道L細(xì)胞合成胰升糖素樣肽（GLP-1）的作用。TCF7L2基因可以通過Wnt信號途徑來調(diào)節(jié)具有內(nèi)分泌功能的小腸L細(xì)胞分泌具有促進(jìn)胰島素分泌的胰升糖素樣肽（GLP-1）［4］，因此TCF7L2基因?qū)ρ欠€(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)至關(guān)重要。對歐洲人群研究發(fā)現(xiàn)rs7903146、rs7901695和 rs12255372與2型糖尿病顯著相關(guān)［5-6］。研究還發(fā)現(xiàn)rs7901695的C風(fēng)險(xiǎn)等位基因在非洲人群為46.6%，在歐洲裔美國人群為29.5%，在其他歐洲人群為22% ～30%［7］。

表1 病例組與對照組一般資料比較Table 1 Comparison of general information between control and case groups

表2 病例組與對照組rs7901695和rs7085532等位基因比較Table 2 Comparison of distribution of the allele of rs7901695 and rs7085532 between control and case groups

表3 病例組與對照組rs7901695和rs7085532基因型比較Table 3 Comparison distribution of the genotype of rs7901695 and rs7085532 between control and case groups

表4 TCF7L2與吸煙的交互作用Table 4 Interactions between TCF7L2 and smoking on T2DM

表5 TCF7L2與飲酒的交互作用Table 5 Interactions between TCF7L2 and drinking on T2DM

本研究結(jié)果顯示病例組TCF7L2基因rs7901695位點(diǎn)的TC和CC基因型頻率，C等位基因頻率顯著高于對照組，提示TCF7L2基因rs7901695位點(diǎn)可能與新疆維吾爾族人群2型糖尿病的發(fā)生相關(guān)。然而對北京漢族人群研究發(fā)現(xiàn)TCF7L2基因與2型糖尿病的發(fā)生無相關(guān)性，rs7903146和rs12255372位點(diǎn)的風(fēng)險(xiǎn)等位基因頻率分別為3.05%和0.90%［8］。對中國香港人群研究發(fā)現(xiàn)TCF7L2基因的rs11196205和rs7903146位點(diǎn)的風(fēng)險(xiǎn)等位基因在漢族人群中的頻率較低（分別為1.3%和2.4%）［9］。對中國臺灣人群研究發(fā)現(xiàn)，與高加索人群2型糖尿病具有相關(guān)性的rs7903146和rs12255372位點(diǎn)在漢族人群的頻率較低（分別為2.87%和0.40%）［10］。在本研究中rs7901695的C風(fēng)險(xiǎn)等位基因頻率為21.9%，與歐美人群接近，但明顯高于TCF7L2風(fēng)險(xiǎn)等位基因在中國漢族人群中的頻率，可能是由于漢族人群與維吾爾族人群具有不同的遺傳背景和環(huán)境暴露。此外，rs7901695及rs7085532位點(diǎn)與吸煙和飲酒在2型糖尿病的發(fā)生中不存在交互作用。由于2型糖尿病受到多基因與環(huán)境因素等共同作用，多基因之間與基因-環(huán)境的交互作用還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，TCF7L2基因的rs7901695位點(diǎn)可能與新疆維吾爾族人群2型糖尿病具有相關(guān)性，而rs7085532位點(diǎn)可能與新疆維吾爾族人群2型糖尿病無關(guān)。眾所周知，2型糖尿病是一種多基因遺傳性疾病，在今后的研究中將擴(kuò)大樣本量，并對多個(gè)基因和多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行分析，進(jìn)而在分子水平闡述2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制。

［1］Hayashi T，Iwamoto Y，Kaku K，et al.Replication study for the association of TCF7L2 with susceptibility to type 2 diabetes in a Japanese population［J］.Diabetologia，2007，50:980-984.

［2］Grant SF，Thorleifsson G，Reynisdottir I，et al.Variant of transcription factor 7-like 2（TCF7L2）gene confers risk of type 2 diabetes［J］.Nat Genet，2006，38:320-323.

［3］Schaeffeler E，Zanger UM，Eichelbaum M，et al.Highly multiplexed genotyping of thiopurine S-methyltransferase variants using MALDI-TOF mass spectrometry:reliable genotyping in different ethnic groups［J］.Clini Chem，2008，54:1637-1647.

［4］Yi F，Brubaker PL，Jin T.TCF-4 mediates cell type-specific regulation of proglucagon gene expression by β-catenin and glycogen synthase kinase-3β［J］.J Biol Chem，2005，280:1457-1464.

［5］Ciccacci C，Di Fusco D，Cacciotti L，et al.TCF7L2 gene polymorphisms and type 2 diabetes:association with diabet-ic retinopathy and cardiovascular autonomic neuropathy［J］.Acta diabetologica，2013，50:789-799.

［6］Mayans S，Lackovic K，Lindgren P，et al.TCF7L2 polymorphisms are associated with type 2 diabetes in northern Sweden［J］.Eur J Hum Genet，2007，15:342-346.

［7］Sale MM，Smith SG，Mychaleckyj JC，et al.Variants of the transcription factor 7-like 2（TCF7L2）gene are associated with type 2 diabetes in an African-American population enriched fornephropathy ［J］.Diabetes，2007，56:2638-2642.

［8］Ren Q，Han XY，Wang F，et al.Exon sequencing and association analysis of polymorphisms in TCF7L2 with type 2 diabetes in a Chinese population［J］.Diabetologia.2008，51:1146-1152.

［9］Ng MC，Tam CH，Lam VK，et al.Replication and identification of novel variants at TCF7L2 associated with type 2 diabetes in Hong Kong Chinese［J］.J Clin Endocrinol Metab，2007，92:3733-3737.

［10］Chang Y，Chang T，Jiang Y，et al.Association study of the genetic polymorphisms of the transcription factor 7-like 2（TCF7L2）gene and type 2 diabetes in the Chinese population［J］.Diabetes，2007，56:2631-2637.

Relationship between genetic polymorphism of transcription factor 7-like 2 and genetic susceptibility to type 2 diabetes mellitus in Uygur population of Xinjiang region

WANG Zhi-qiang1，MA Qi2，WANG Ting-ting1，SU Yin-xia1，MA Yan1，ZHU Jun2，YAO Hua2*

（1.Dept.of Public Health，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011;2.Key Laboratory of Metabolic Disease Research，the First Affiliated Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China）

ObjectiveTo identify the potential association of transcription factor 7-like 2（TCF7L2polymorphisms with type 2 diabetes mellitus in Uygur population of Xinjiang region.MethodsIn this case-control study，819 cases of type 2 diabetes mellitus patients were recruited in case group and 731 healthy individuals were selected as control.5 mL of blood sample were collected from each subject.The polymorphism was examined by matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight（MALDI-TOF）and theORvalue（95%CI）was evaluated by Logistic Regression Method to analyze the relationship between susceptibility to type 2 diabetes mellitus and different genotypes.ResultsIn case group，the frequencies of TC，CC genotype and C allele at rs7901695 were higher than the corresponding frequencies in control group（P＜0.05）.The interaction betweenTCF7L2and environment risk factors did not contribute to the occurrence of the type 2 diabetes mellitus.ConclusionsThe polymorphisms of rs7091695 inTCF7L2but not rs7085532 in TCG7L2 may be associated with type 2 diabetes mellitus in Uygur population in Xinjiang region.

polymorphisms;TCF7L2gene;type2 diabetes mellitus;Uygur

R587.1

A

10.16352/j.issn.1001-6325.2015.09.003

1001-6325（2015）09-1162-05

2014-12-11

2015-03-31

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）（2012CB722403）