劉志強(qiáng)，段榮，柯江維

(江西省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌330006)

傳染性單核細(xì)胞增多癥(infectious mononucleosis，IM)是由 EB 病毒(Epstein-Barr virus，EBV)感染引起的淋巴細(xì)胞增生性傳染病，小兒時期常見。臨床上以發(fā)熱、咽峽炎、淋巴結(jié)及肝脾大、外周血中淋巴細(xì)胞增加并出現(xiàn)異型淋巴細(xì)胞等為特征[1．2]。近年來，隨著臨床免疫學(xué)研究的發(fā)展，本病免疫功能的改變受到更多的關(guān)注。DNT細(xì)胞 (CD3+CD4-CD8-T細(xì)胞)是新近發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞表面既不表達(dá)CD4分子同時也不表達(dá)CD8分子的T細(xì)胞群,它屬于雙陰性調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞，對免疫應(yīng)答有抑制作用，是機(jī)體在感染、腫瘤及自身免疫等過程中進(jìn)行調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因素[3]。本文通過檢測IM患兒不同病期外周血DNT細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞分化抗原(CD)的表達(dá)水平，并與健康兒童的相應(yīng)指標(biāo)作對比分析，觀察IM患兒細(xì)胞免疫狀態(tài)的變化及可能對預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 3例IM患兒均為本院血液科2011年9月至2013年7月收治的住院患兒。男36例，女27例。年齡12個月~9歲。均符合IM診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。健康對照組30例，均為同期體檢的健康兒童，男17例，女13例；年齡1~8．5歲。兩組間性別、年齡相比無顯著性差異(P＞0.05)。

1.2 檢測方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集IM患兒急性期、恢復(fù)期及對照組健康兒童清晨空腹靜脈血lml，置含肝素抗凝管中，標(biāo)本2h內(nèi)檢測。

1.2.2 淋巴細(xì)胞CD系列表達(dá)檢測 取美國BD公司CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE 鼠抗人熒光單克隆抗體混合試劑20ml，加入肝素抗凝血100μl，混勻，室溫避光孵育20min，分別加入紅細(xì)胞裂解液1ml，室溫避光放置 10min，1000r/min 離心 5min，棄上清液，用PBS洗滌2次，棄上清，加PBS 250μl上機(jī)，采用BD公司FACSCanto流式細(xì)胞儀檢測受檢者外周血淋巴細(xì)胞CD3+CD4-CD8-淋巴細(xì)胞及CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+淋巴細(xì)胞的百分率,采用BD FACSDiva軟件進(jìn)行結(jié)果分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSSl3.0軟件處理，數(shù)據(jù)以表示，組間均數(shù)比較采用配對和成組設(shè)計t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

急性期IM患兒DNT細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞百分比顯著高于恢復(fù)期IM患兒和對照組兒童 (P<0.01)，CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞百分比顯著低于恢復(fù)期IM患兒和對照組兒童 (P<0.01)?；謴?fù)期IM患兒DNT細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞、CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞百分比與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。見表1。

表1 IM患兒與對照組DNT細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群水平測定值(s，%)

表1 IM患兒與對照組DNT細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群水平測定值(s，%)

組別 n CD3+ CD3+CD4+CD8- CD3+CD4-CD8+ DNT急性期恢復(fù)期對照組63 63 30 85.22±4.31 68.96±1.41 66.89±8.23 20.76±5.13 51.24±4.38 52.64±6.25 62.14±8.21 37.66±5.21 35.42±6.28 10.17±4.16 6.09±1.82 5.64±1.61

3 討論

IM是兒童原發(fā)性EBV感染的典型表現(xiàn)，有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)EBV對機(jī)體免疫功能的影響可能在IM的發(fā)病過程中起著重要作用[5]。典型的IM約80%是CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)擴(kuò)增活化，它們有良好的溶細(xì)胞能力，不僅能識別并殺死EBV感染的B細(xì)胞，抑制其分化增殖，還能通過釋放過量細(xì)胞因子導(dǎo)致IM癥狀[6]。所以IM患兒的癥狀不是病毒復(fù)制直接引起，而是T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)的結(jié)果。亦有研究顯示T細(xì)胞激活程度和IM臨床癥狀嚴(yán)重程度有一定關(guān)聯(lián)[7]。因此監(jiān)測IM患兒細(xì)胞免疫功能的改變、掌握正常免疫個體T細(xì)胞亞群變化的規(guī)律有重要的臨床意義。

本實(shí)驗(yàn)測定了IM患兒不同時期外周血淋巴細(xì)胞 CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+的表達(dá)，結(jié)果顯示：急性期CD3+、CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞百分比明顯增高，CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞百分比明顯降低，與林珊[8]報道一致。恢復(fù)期CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞百分比升高、CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞百分比降低，但與健康兒童無顯著性差異 (P>0.05)，CD3+T細(xì)胞百分比與健康兒童比較無顯著性差異 (P>0.05)，與金海榮等[9]的報道不相一致，是否因樣本因素或其它因素有待進(jìn)一步的觀察。

在急性EBV感染后，大量EBV特異性CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞增殖，它們有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用功能，能殺滅感染的B細(xì)胞，并消除病毒[10]。而CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞在細(xì)胞免疫過程中起到免疫輔助作用，同時也具備殺傷功能，在維持EBV感染后細(xì)胞免疫反應(yīng)與被感染細(xì)胞清除的平衡中起到一定的作用[11]。本文中IM患兒急性期與對照組健康兒童比較CD3+CD4+CD8-T明顯下降，CD3+CD4-CD8+T明顯升高，而且CD3+CD4-CD8+T急性期與恢復(fù)期比較明顯升高且有顯著性差異(P<0.05)。分析原因由于IM患兒急性期CD3+CD4-CD8+T淋巴細(xì)胞大量擴(kuò)增以控制EBV誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖，而CD3+CD4+CD8-T淋巴細(xì)胞在輔助此過程中被消耗。

以往研究發(fā)現(xiàn)，在外周DNT細(xì)胞中存在去甲基化的CD8基因[12]，對DNT細(xì)胞基因高保守序列進(jìn)行多個基因位點(diǎn)分析，得出DNT細(xì)胞的前體細(xì)胞可能是CD8+T細(xì)胞[13]，以上研究暗示DNT細(xì)胞可能來源于CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞。體外研究表明，人類DNT細(xì)胞在體外被激活后可產(chǎn)生TNF-α，IFN-γ，而不分泌IL-4[14]；從轉(zhuǎn)基因小鼠中純化出的DNT細(xì)胞可通過抑制同系基因型CD4+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞來發(fā)揮其免疫抑制功能[15]。而Kyttaris等[16]用IL-23R處理取自 MRL/lpr小鼠淋巴結(jié)的淋巴細(xì)胞可誘導(dǎo)出DNT細(xì)胞，此DNT細(xì)胞亦高表達(dá)IL-17，向淋巴細(xì)胞缺陷小鼠輸注此DNT細(xì)胞后可導(dǎo)致小鼠狼瘡樣腎炎發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)急性期IM患兒DNT細(xì)胞是增多的，推測其可能因?yàn)镋BV的感染，導(dǎo)致大量EBV特異性CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞增殖，進(jìn)而促進(jìn)DNT細(xì)胞大量增殖，協(xié)同促進(jìn)炎癥反應(yīng)的加重。但對于IM患兒DNT細(xì)胞確切的作用及機(jī)理目前還不清楚。

總之，IM是T細(xì)胞功能紊亂性疾病，檢測外周血DNT細(xì)胞與T細(xì)胞亞群變化對評估患兒的細(xì)胞免疫功能狀況，判斷病情預(yù)后具有十分重要的臨床意義，同時，針對IM患者細(xì)胞免疫功能紊亂的狀態(tài)，在原治療的基礎(chǔ)上進(jìn)行細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)治療，一定程度上可促進(jìn)病情恢復(fù)，有效改善預(yù)后。

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