王衛(wèi)華，王春波，王晨靜

（青島大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)系；*青島大學(xué)附屬醫(yī)院，山東青島266021）

銀杏葉總黃酮的微波提取及純化工藝分析

王衛(wèi)華，王春波，王晨靜＊

（青島大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)系；*青島大學(xué)附屬醫(yī)院，山東青島266021）

目的探討銀杏葉總黃酮的最佳微波提取及純化工藝。方法利用正交設(shè)計系統(tǒng)分析乙醇濃度、提取次數(shù)、料液比、提取時間四個因素對銀杏葉總黃酮的微波提取及純化工藝的影響，以及利用紫外分光光度計法測定銀杏葉中總黃酮的含量，計算出提取率。結(jié)果通過正交設(shè)計法對微波提取銀杏葉中總黃酮的工藝進行分析，以料液比1∶40、每次提取1 h、乙醇濃度80%以及提取一次是最佳條件。結(jié)論此種工藝為最佳，能為進一步研究和應(yīng)用銀杏葉總黃酮提供依據(jù)。

銀杏葉總黃酮；微波提取及純化；正交設(shè)計試驗

銀杏葉，是銀杏科植物銀杏（Ginkgo biloba L）的干燥葉。需在秋季葉子尚綠時采收，并及時干燥。銀杏的主要栽種方式一般為人工栽培。栽培地區(qū)北至遼寧，南達廣東，東起浙江，西達陜西、甘肅、西南到四川、貴州、云南等地[1]。具有活血化瘀，通絡(luò)止痛，斂肺平喘，化濁降脂的功效。用于瘀血阻絡(luò)，胸痹心痛，中風(fēng)偏癱，肺虛咳喘，高脂血癥。

銀杏葉總黃酮是銀杏葉的提取物，經(jīng)臨床驗證其具有擴血管，增加腦血管的血流量，改善血液循環(huán)，還可擴張冠狀動脈，抗氧化。也有報道黃酮類的抗癌作用。因此，廣泛用于預(yù)防及緩解冠心病、腦梗、心絞痛、腦血管硬化等疾病[2]。本試驗參考相關(guān)文獻，利用正交設(shè)計，分析銀杏葉總黃酮的提取及純化最佳工藝，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑銀杏葉（采自菏澤郊區(qū)，干燥、粉碎備用）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（購自中國藥品生物制品檢定所）；無水乙醇（分析純）中國藥品生物制品檢定所；亞硝酸鈉（分析純）中國藥品生物制品檢定所；硝酸鋁（分析純）中國藥品生物制品檢定所；氫氧化鈉（分析純）安徽安特生物化學(xué)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備M700型微波爐（格蘭仕微波爐制造有限公司）DG 120型四兩裝中藥材粉碎機（萬通藥化機械）GL-21M型高速冷凍離心機（長沙湘麓儀器有限公司）、Explorer專業(yè)型分析和精密天平EX6201（湖南弘林儀器）、722型紫外可見分光光度計（上海奧析科學(xué)儀器）。

1.3 因素及方案參考了多篇相關(guān)文獻中關(guān)于影響銀杏葉中總黃酮的提取率的考察因素[3-4]，本研究確定以乙醇濃度、提取的次數(shù)、乙醇用量（料液比）、提取時間為考察因素，設(shè)計了正交試驗。詳見表1。

表1 正交試驗考察因素表

1.3.1 提取液黃酮濃度的測定[6]精密量取待測溶液1 mL于25 mL的容量瓶中，先加入5%的NaNO2溶液0.5 mL搖勻，放置6 min；再加入10%的AlCl3溶液0.5 mL，搖勻再放置6 min；后加入4%的NaOH溶液4.0 mL，加60%乙醇定容至刻度，搖勻后，放置15 min。在510 nm處測定吸光度，帶入回歸方程求黃酮濃度。

按公式計算銀杏葉中總黃酮的提取率：提取率=濃度(mg/mL)×稀釋倍數(shù)×提取液體積(mL)×0.001/原料干重(g)。正交試驗水平結(jié)果，見表2。

K1、K2、K3表示每個因素分別取3個水平時的結(jié)果之和，R是K1、K2、K3算術(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)差，它反映了試驗中各因素對結(jié)果影響的大小，即它們的大小順序反映出提取相關(guān)因素的改變對提取提取率高低的影響[7]。

各因素對總黃酮的提取率影響順序為：A＞B＞C＞D.即依次為乙醇濃度＞料液比＞提取次數(shù)（D）＞提取時間（C），也即乙醇濃度對提取率的影響最大，而提取時間對提取率影響最小。分析得知，乙醇濃度80%、料液比1∶40、提取一次、提取時間為1 h的組合為最佳銀杏葉總黃酮提取組合。

1.3.2 統(tǒng)計學(xué)處理所獲數(shù)據(jù)采用SPSS Statistics系統(tǒng)分析。

表2 正交試驗設(shè)計與水平

2 討論

本研究以銀杏葉中總黃酮提取液在510 nm波長處的測得的吸光度為參考指標(biāo)，通過提取工藝的正交試驗研究，確定以銀杏葉為原料微波提取總黃酮的最佳工藝條件為：乙醇濃度80%、料液比1∶40、提取1次、提取時間為1個小時。

比較傳統(tǒng)方法，該提取純化方法操作簡易，對環(huán)境污染較小、提取純化成本低、結(jié)果準(zhǔn)確可靠。為進一步研究銀杏葉中總黃酮的提取工藝提供了科學(xué)依據(jù)。銀杏葉含有非常豐富的黃酮，具有非常大的開發(fā)利用價值，應(yīng)加強對其資源的開發(fā)與利用。本方法適用于各大工業(yè)生產(chǎn)，但所用儀器和設(shè)備需進一步研究。

[1]《食品科學(xué)》2014年總目錄[J].食品科學(xué),2014，(24):353-376.

[2]李筱玲,鄧寒霜.黃酮類化合物提取分離方法研究進展[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2015，(1):77-79;92.

[3]吳如健,陳瑾,胡菡青,等.橄欖黃酮類化合物研究進展[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報，2015(1):106-110.

[4]李嶸,金美芳.微波法提取銀杏黃酮甙的新工藝[J].食品科學(xué), 2000，21(2):39-41.

[5]《時珍國醫(yī)國藥》2013年1～12期總目次[J].時珍國醫(yī)國藥,2013 (12):1-18.

[6]顧采琴,謝琳琳,張織芬,等.香蕉皮黃酮的分離純化及抑菌活性研究[J].食品科學(xué)，2013(16):98-102.

[7]《食品研究與開發(fā)》2013年總目次第34卷[J].食品研究與開發(fā), 2013，(24):1-20.

[8]王鋒,李穩(wěn)宏,李多偉.超聲萃取-溶劑純化銀杏外種皮活性成分新工藝[J].化學(xué)工程，2004，(6):70.

Process Analysis of Total Flavonoids from Ginkgo Biloba Leaves in Microwave Extraction and Purification

Wang Weihua,Wang Chunbo,Wang Chenjing
(Qingdao University College of Pharmacy;＊The Affiliated Hospital of Qingdao University)

ObjectiveTo Explore the best microwave extraction and purification technology of flavonoids from ginkgo biloba leaves.MethodsAnalysing the four factors which are ethanol concentration,extraction times,solid-liq?uid ratio,extracting time have some effects on the microwave extraction and the purification of total flavonoids from ginkgo biloba leaves by using the orthogonal design system.ResultsBy microwave extraction and purification pro?cess of total flavonoids of ginkgo biloba orthogonal analysis comparison,the best condition is extracted by material liq?uid than 1:50,every time an hour,80%ethanol concentration and extraction time is the best condition.ConclusionThis process is the best,and provide a basis for further research and application of flavonoids from ginkgo biloba leaves.

Total flavonoids of Ginkgo biloba;Microwave extraction and purification;Orthogonal Design

R92

A

1008-4118（2015）04-0006-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2015.04.003

2015-09-23

王衛(wèi)華（1981-），女，現(xiàn)工作于菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校。研究方向：藥理學(xué)。

王晨靜。wangchenjing1117@126.com