胥彪，胡文健

（達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，四川達(dá)州635000；1瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院耳鼻咽喉科，四川瀘州646000）

芪柴煎劑對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠血清IL-4,IFN-γ影響的實(shí)驗(yàn)研究

胥彪，胡文健1

（達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，四川達(dá)州635000；1瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院耳鼻咽喉科，四川瀘州646000）

目的：研究芪柴煎劑（自擬方）對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠模型血清IL-4、IFN-γ的影響，探討其對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠的作用療效。方法：應(yīng)用卵清蛋白將實(shí)驗(yàn)大鼠制作成變應(yīng)性鼻炎模型，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A組）、芪柴煎劑低劑量組（B組）、高劑量組（C組）、地氯雷他定組（D組）、模型對(duì)照組（E組）各8只。連續(xù)14 d分別給予對(duì)應(yīng)的藥物，A組、E組以蒸餾水替代。用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清IL-4、IFN-γ的含量。結(jié)果：各實(shí)驗(yàn)組血清IL-4含量較模型對(duì)照組明顯偏低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；芪柴煎劑低劑量組IL-4含量高于芪柴煎劑高劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各實(shí)驗(yàn)組血清IFN-γ含量高于模型對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；芪柴煎劑低劑量組、地氯雷他定組IFN-γ含量低于高劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：芪柴煎劑能夠下調(diào)變應(yīng)性鼻炎大鼠血清IL-4水平；上調(diào)IFN-γ水平。

IL-4；IFN-γ；變應(yīng)性鼻炎大鼠模型；芪柴煎劑

變應(yīng)性鼻炎作為一種臨床常見病，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量[1]。臨床應(yīng)用芪柴煎劑方，治療肺脾氣虛、肝郁氣滯證型鼻鼽，獲得了肯定的臨床療效[2]。但其有效的作用機(jī)制和途徑不甚明確，因此我們?cè)噲D運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的方法揭示其治療變應(yīng)性鼻炎的作用機(jī)制，旨在為臨床使用芪柴煎劑治療變應(yīng)性鼻炎提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要藥物和試劑

1.1.1 主要藥物

芪柴煎劑，其主要組成藥物為：黃芪、防風(fēng)、白術(shù)、石菖蒲、細(xì)辛、蒼耳子、五味子、白芍、桂枝、辛夷、薄荷、柴胡。由達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑室制備。

地氯雷他定片，5 mg×7片，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20020091，深圳市海濱制藥有限公司。

1.1.2 主要試劑

IFN-γ試劑盒：美國(guó)RD公司產(chǎn)品，批號(hào)201308；IL-4試劑盒：美國(guó)RD公司產(chǎn)品，批號(hào)201308；氫氧化鋁粉末：天津津?；瘜W(xué)試劑廠，貨號(hào)H12020766；雞卵白蛋白：美國(guó)sigma公司，貨號(hào)A5253。

1.2 造模方法和模型評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

40只清潔健康級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體重200士20 g，鼠齡6～7月。適應(yīng)性喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)大鼠1周后，依據(jù)文獻(xiàn)3建立變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物模型的方法[3]。基礎(chǔ)致敏：以9.6 mg卵清蛋白為抗原材料，佐以960 mg氫氧化鋁粉末，加入32 mL生理鹽水制成3%均勻混懸液，將混懸液注入實(shí)驗(yàn)大鼠腹腔，劑量為1 mL/只，隔日一次，共8次。鼻腔激發(fā)：基礎(chǔ)致敏結(jié)束后第2 d用生理鹽水配制成0.5%卵清蛋白溶液，以加樣槍滴鼻行雙側(cè)鼻腔攻擊，每側(cè)50 μL，每日1次，連續(xù)7 d?？瞻讓?duì)照組大鼠予以等量蒸餾水替代卵清蛋白溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。末次鼻腔激發(fā)后，立刻觀察30 min，記錄大鼠鼻分泌物量、噴嚏及搔鼻次數(shù)，采用疊加量化記分法記分[4]。鼻癢：輕抓鼻幾次1分，兩者之間為2分，四處摩擦為3分。噴嚏：打1～3個(gè)噴嚏為1分，4～10個(gè)為2分，10個(gè)以上為3分。清涕：清涕少量為1分，涕過(guò)前鼻孔為2分，涕流滿面為3分。總分超過(guò)5分為模型復(fù)制成功。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組給藥

造模成功后，按隨機(jī)數(shù)字表法將造模成功后的大鼠分為空白對(duì)照組（A組）、芪柴煎劑低劑量組（B組）、芪柴煎劑高劑量組（C組）、地氯雷他定組（D組）、模型對(duì)照組（E組）。從實(shí)驗(yàn)第23 d開始，用制劑室預(yù)先制備好的芪柴煎劑（濃縮后5 mL煎劑相當(dāng)于5 g生藥）對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠灌胃，劑量參考按照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》人與動(dòng)物等效劑量換算方法[5]，人與大鼠藥物按每公斤體重劑量之比約為1∶10，灌胃時(shí)間為兩周。各組大鼠藥物用量如下：A組（正常對(duì)照組）給予蒸餾水每鼠2 mL/d，B組（低劑量組）予以芪柴煎劑每只大鼠4 g/（kg/d）(生藥量)，約相當(dāng)于正常劑量的一半；C組（高劑量組）給予芪柴煎劑每鼠8 g/( kg/d)，約相當(dāng)于常規(guī)劑量；D組（地氯雷他定對(duì)照組）給予地氯雷他定1 mg/(kg/d)，E組給予蒸餾水每鼠2 mL/d。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)本制備

給藥2周后，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉實(shí)驗(yàn)大鼠，用量為0.3～0.4 mL/100 g，麻醉成功后，仰臥位固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)，酒精消毒，打開胸腔，暴露大鼠心臟，用注射器取全血約2～3 mL于抗凝管中，保存于-20℃冰箱中，待行ELISA檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用x±s表示，實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件，組間均數(shù)應(yīng)用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

給藥后大鼠癥狀明顯改善，搔鼻、噴嚏次數(shù)減少，鼻腔清水樣分泌物減少。高劑量、地氯雷他定組大鼠尤為明顯，僅偶見個(gè)別大鼠鼻癢、噴嚏，均無(wú)清涕從前鼻孔流出，和正常對(duì)照組比較無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型對(duì)照組比較,各組大鼠鼻部癥狀積分偏低，差異明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表1。

表1 給藥后實(shí)驗(yàn)大鼠鼻部癥狀積分

2.2 大鼠血清IL-4含量比較

芪柴煎劑低劑量組（P＜0.05）、高劑量組（P＜0.01）、地氯雷他定組（P＜0.01）血清IL-4含量明顯低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；芪柴煎劑低劑量組與芪柴煎劑高劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表2。

表2 實(shí)驗(yàn)大鼠血清IL-4含量比較

正常對(duì)照組（A）芪柴煎劑低劑量（B）芪柴煎劑高劑量（C）

地氯雷他定（D）模型對(duì)照組（E） 88888 55.34±15.77 218.65±45.03ab136.36±42.22ac173.44±49.47a262.64±32.11a

33.48

0.00

2.3 大鼠血清IFN-γ含量比較

芪柴煎劑低劑量組血清IFN-γ含量（P＜0.05）；芪柴煎劑高劑量組（P＜0.01）、地氯雷他定組（P＜0.01）血清IFN-γ含量明顯高于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；芪柴煎劑低劑量組與芪柴煎劑高劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；芪柴煎劑高劑量組血清IFN-γ含量明顯高于地氯雷他定組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表3。

表3 實(shí)驗(yàn)大鼠血清IFN-γ含量比較

3 討論

大量研究表明導(dǎo)致變應(yīng)性鼻炎的免疫學(xué)基礎(chǔ)是Th1/Th2細(xì)胞間免疫反應(yīng)失衡[6]。Th2分泌的主要特征因子IL-4，其主要功能為刺激B細(xì)胞，在體液免疫過(guò)程中引起速發(fā)（Ⅰ型）變態(tài)反應(yīng)。從有癥狀到無(wú)癥狀的變應(yīng)性鼻炎患者獲取標(biāo)本，于體外暴露變應(yīng)原，可以觀察到表達(dá)IL-4的mRNA明顯增加，B細(xì)胞同類轉(zhuǎn)換產(chǎn)生IgE，但這一現(xiàn)象在非變應(yīng)性鼻炎中并不存在[7]。IFN-γ為Th1型細(xì)胞因子的一種,可通過(guò)增加IFN-γ可以影響CD+T細(xì)胞分化所處的微環(huán)境,使Th1/Th2漂移并向Th1型轉(zhuǎn)化,以阻斷Th2型細(xì)胞因子的分化。IFN-γ可顯著抑制IL-4mRNA的轉(zhuǎn)錄水平,抑制IL-4誘導(dǎo)的B細(xì)胞表達(dá)IgE受體,從而抑制IgE的生成[8]。

鼻鼽屬本虛標(biāo)實(shí)之證，芪柴煎劑組方以益氣健脾為主，輔以疏肝解郁、祛風(fēng)通竅。黃芪健脾補(bǔ)氣、益衛(wèi)固表為君藥。白術(shù)、石菖蒲利濕健脾，且白術(shù)兼有健脾，石菖蒲兼能通竅為臣，薄荷、柴胡能疏風(fēng)解表，調(diào)肝以解土虛木乘，亦為臣藥。防風(fēng)解表驅(qū)風(fēng)，蒼耳子、辛夷、細(xì)辛辛溫，入肺經(jīng)，為鼻科要藥，功善通竅。桂枝長(zhǎng)于助陽(yáng)化氣，溫經(jīng)通脈，氣行則涕消。白芍與桂枝配伍有調(diào)和營(yíng)衛(wèi)之妙，和五味子合用有柔肝斂涕之效。以上藥均為佐使，為溫陽(yáng)止涕、祛風(fēng)通竅而設(shè)。全方投之，能實(shí)肺脾之氣，散風(fēng)寒之邪，解肝經(jīng)之郁；則正氣扶、邪氣除病自愈之。

芪柴煎劑能夠顯著改善變應(yīng)性鼻炎大鼠鼻部癥狀，低劑量組IL-4含量高于芪柴煎劑高劑量組，呈現(xiàn)劑量相關(guān)性。地氯雷他定組IFN-γ含量低于高劑量組，說(shuō)明芪柴煎劑可能對(duì)IFN-γ調(diào)節(jié)作用優(yōu)于地氯雷他定。其防治變應(yīng)性鼻炎大鼠有效作用機(jī)制可能與下調(diào)血清IL-4水平和上調(diào)IFN-γ水平有關(guān)；但其有效作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的臨床研究。

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2.胡文健，胥彪,王敏,等.芪柴煎劑治療肺脾氣虛肝氣郁結(jié)證型的臨床觀察[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013,36(5): 489-490.

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（2014-10-31收稿）

作者投稿系統(tǒng)http∶//xb.lzmc.edu.cn/

Effect of Qi Chai decoction on serum IL-4,IFN-γ level in allergic rhinitis rats

Xu Biao，Hu Wenjian1
Departmene of ENT Head and Neck Surgery，the Dazhou Hospital of Integrated TCM and Western Medicine；1Departmene of ENT，the Affiliated Chinese Traditional and Medicine Hospital of Luzhou Medical college

Objective:To study the influence of Qi Chai decoction on serum IL-4,IFN-γ level of allergic rhinitis model of rats so as to explore its role and efficacy in treating allergic rhinitis.Methods:Rats with allergic rhinitis were made by ovalbumin as sensitizing agent.40 healthy adult SD rats were randomly divided into five groups(8 rats each)∶normal control group low-dose and high dose Qi Chai decoction groups，loratadine group,and model control group.Corresponding mjodel control given for 14 consecutive days in each group.Then the serum IL-4 and IFN-γ contents were tested by ELISA.Results:Compared with model control group,the serum IL-4 levels of low dose and high dose Qi Chai decoction groups and desloratadine group were significantly lower,and there were significant differences(P＜0.05),and IL-4 level of low dose Qi Chai decoction group was higher than that of high dose group(P＜0.05).Compared with model control group,the serum IFN-γ level of low dose and high dose Qi Chai decoction groups,and the desloratadine group were significantly higher(P＜0.05).Compared with high dose group,the serum IFN-γ level of low dose Qi Chai decoction group and loratadine group were significantly lower(P＜0.05).Conclusion:The Qi Chai decoction can down-regulate the serum IL-4 levels and up-regulate the serum IFN-γ levels of the rats with allergic rhinitis.

IL-4;IFN-γ Allergic rhinitis rat model;Qi Chai decoction

R246.81

A

10.3969/j.issn.1000-2669.2015.02.003

胥彪（1985-），男，碩士研究生，E-mail：xbxubiao@126.com

胡文健（1966-），男，副教授，本科