劉 青，杜守穎，尼瑪次仁，米 久，次仁旺加

1北京中醫(yī)藥大學，北京 100102；2西藏藏醫(yī)學院

青藏高原不同種紅景天中沒食子酸含量的定量分析*

劉 青1,2，杜守穎1△，尼瑪次仁2，米 久2，次仁旺加2

1北京中醫(yī)藥大學，北京 100102；2西藏藏醫(yī)學院

目的：對青藏高原不同種紅景天中沒食子酸進行分析，建立定量分析方法，為其進一步利用提供依據。方法：采用HPLC法測定沒食子酸的含量，以30%乙醇提取樣品；Shim-pack VP-ODS色譜柱（250 mm×4.6 mm）；甲醇-0.04%磷酸溶液（10∶90）為流動相；檢測波長274 nm。結果：線性范圍為1.0μg/mL～200.0μg/mL（R=0.9999）,平均回收率為100.49%，RSD為1.8%。結論：該方法簡便，準確，重復性、回收率好，可用于青藏高原不同種紅景天中沒食子酸含量的測定。

紅景天;青藏高原；HPLC；沒食子酸

紅景天屬植物在我國有73種，西藏有32種，2個變種[1]，就其青藏高原紅景天而言，享有“高原人參”之美譽。既是珍貴藥用植物，亦是藥食同源植物，近年研究表明，紅景天具有抗缺氧、抗寒冷、抗微波輻射、延緩衰老和抗癌等功效，應用廣泛[2]。紅景天的多種功效與其含有多種活性成分密切相關，2010版《中華人民共和國藥典》中把紅景天苷作為紅景天的檢測指標，隨著研究的深入，發(fā)現沒食子酸在紅景天成分中占有較大比例，同時沒食子酸具有抗炎、抗突變、抗氧化、抗自由基等多種生物學活性[3]；目前主要應用于抗菌抗病毒、抗腫瘤方面，其他行業(yè)也有廣泛應用。本研究采用液相色譜法，以其活性成分沒食子酸為對照，對青藏高原紅景天進行定量分析研究，并對不同產地，不同品種進行比較，為進一步開發(fā)利用及其制劑的質量標準研究奠定基礎和提供依據。

1 儀器與材料

梅特勒A E200電子天平；島津LC-20A液相色譜儀，配S P D-20A紫外可見檢測器；S h im-p a c k VP-OD S色譜柱（250 mm×4.6 mm）；P h enomene x G emini OD S色譜柱（250 mm×4.6 mm）；W ondaSi l C18（150mm×4.6mm）；KQ-250D B超聲清洗器（250W，昆山超聲儀器有限公司）。甲醇（色譜純，F i sh er公司）；乙醇（分析純，成都全山化學試劑有限公司）；30%乙醇（取乙醇加水自配）；磷酸（上海紅衛(wèi)農藥廠）；蒸餾水（自制）。沒食子酸（中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-201204）。青藏高原不同種紅景天由西藏藏醫(yī)學院組織采集（共20個樣品）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 S h im-p a c k VP-OD S色譜柱（250mm×4.6mm）；流動相：甲醇-0.04%磷酸溶液（10：90）；柱溫：25℃；流速：1.0m L/min；檢測波長274 nm。

2.2 供試品溶液制備 取本品粉末約2.5 g，精密稱定，置50m L量瓶中，加30%乙醇20m L，20℃超聲處理（功率250W，頻率40 K H z）20分鐘，靜置室溫，加30%乙醇稀釋至刻度，搖均，精密量取5m L，置25m L量瓶中，加30%乙醇稀釋至刻度，搖均，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液制備 精密稱取沒食子酸對照品適量，加30%乙醇制成每1 m L中含0.2 m g的溶液，即得。

2.4 系統(tǒng)適應性試驗 取”2.3”項對照品溶液及供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件，各進樣20μl，測得H PLC圖譜。理論塔板數按沒食子酸峰計算不低于4000，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.5 線性關系的考察 精密配制系列濃度的沒食子酸對照品溶液1.0μg/m L、20.0μg/m L、40.0μg/m L、80.0μg/m L、120.4μg/m L、200.0μg/m L，分別精密進樣20μL，測定峰面積，見表1、圖2。

表1 沒食子酸線性范圍測定結果

圖2 沒食子酸線性范圍測定結果

根據上述試驗結果，沒食子酸濃度與其峰面積之間在1.0～200.0μg/m L范圍內，存在良好的線性關系（R=0.9999）。

2.6 精密度試驗 精密量取沒食子酸對照品溶液10μl（100μg/m L）重復進樣5次，其峰面積測量值，計算其R S D為0.2%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 任取樣品（2號樣品）按正文方法制備，分別在0、4、9、13、17、21小時測定，計算其R S D為0.1%，結果表明，樣品溶液在21小時內穩(wěn)定性良好。

2.8 重現性試驗 任取樣品（4號樣品）按正文方法制備，每隔1小時進樣1次，共6次，（R S D=0.5%n=6）。

2.9 回收率試驗 采用加樣回收法，精密稱取適量的已測知含量的紅景天（沒食子酸含量為3.546 m g/g；6號樣品）9份，分為低、中、高三個不同濃度，分別精密加入沒食子酸對照品溶液（1.0m g/g）7.1m L、9.0m L、10.5m L，計算加樣回收率，結果平均回收率為100.49%，R S D=1.8%。

2.10 樣品測定 取上述20個樣品，按”2.1”色譜條件測定，計算其中沒食子酸的含量，見表2。

表2 樣品測定結果

3 討論

根據相關文獻[4-5]，流動相比例為甲醇-0.04%磷酸溶液（10∶90）能保證沒食子酸峰與雜質峰的分離度、理論板數較好；在274 nm處有較高的吸收。對于紅景天中沒食子酸的提取溶劑選擇，比較了甲醇，70%甲醇，50%甲醇，30%甲醇，乙醇，70%乙醇，50%乙醇，30%乙醇，其中同濃度的紅景天藥材中，30%乙醇作為溶劑時沒食子酸的峰面積最大，故以30%乙醇作溶劑進行提取。本研究采用H PLC法對青藏高原不同種紅景天中沒食子酸進行了含量測定，方法精密度好，測定結果準確。從測定結果看，青藏高原不同種紅景天中沒食子酸含量分別為大花紅景天0.29～6.6 m g/g，圣地紅景天0.10～2.9 m g/g，卵萼紅景天1.0～1.6 m g/g，長鞭紅景天0.10 m g/g，狹葉紅景天0.28 m g/g。從采集的20個樣品看，傳統(tǒng)、市場都可以作為紅景天原藥材使用，但就沒食子酸含量差異的原因，主要是品種差異，其生長環(huán)境不同（如沙地、草地、巖石、溪流河畔等），還有采收時間、加工方法、貯藏條件等。

[1] 宋月英,韓慧文,郝素云,等.紅景天研究進展[J].武警醫(yī)學院學報[J],2004,13（1）:66-68.

[2] 尼瑪次仁,劉青,多杰仁青,等.青藏高原紅景天研究進展及存在問題[J].中華中醫(yī)藥雜志.2013,28(9):2675-2678.

[3] 李肖玲,崔嵐,祝德秋.沒食子酸生物學作用的研究進展[J].中國藥師,2004,7(10):767-769.

[4] 章娟,段虎成,畢開順.HPLC法同時測定大花紅景天中的4個酚類成分的含量[J].北方藥學,2011,8(7):13-14.

[5] 頓珠,劉青,索朗其美,等.HPLC法測定藏藥余甘子膏中沒食子酸的含量[J].中草藥,2010,41(9):1477-1478.

Quantitative AnalysisofGallic Acid in D ifferent Speciesof HongJingTian in Qinghai-Tibet Plateau

LIU Qing1,2,DU Shouying1△,NIMA Ciren2,MIJiu2,CIRENWangjia2
1 Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China; 2 Tibetan College of Tibetan Medicine

Objective:To provide reference for furtherutilization of gallic acid by analyzing gallic acid in differentspecies of HongJingTian(Rhodiola rosea L.)in Qinghai-Tibet plateau and establishing themethod of quantitative analysis.Methods:The contents of gallic acid were determined by HPLC,the samples were extracted w ith 30% ethanol;Shim-pack VP-ODS chromatographic column(250mm×4.6mm);acetonitrile-0.04%phosphoric acid(10∶90)as themobile phase;detection wavelength was 274 nm.Results:Linear rangewas between 1.0μg/m L and 200.0 μg/m L(R=0.9999),average recovery rateswere100.49%,RSD was1.8%.Conclusion:Themethod,which is simple, accurate,reproducible and good recovery rate,could be used for content determ ination of gallic acid in different speciesof HongJingTian in Qinghai-Tibetplateau.

HongJingTian;Qinghai-Tibetplateau;HPLC;gallic acid

R927.2

A

1004-6852(2015)07-0025-03

2014-10-25

973計劃前期研究專項（編號 2012CB722905）。

劉青（1976—），男，講師，在讀博士研究生。研究方向：中藥（藏藥）新型與技術。

△通訊作者：杜守穎（1960—），女，博士學位，教授，博士研究生導師。研究方向：中藥新劑型與制劑關鍵技術的研究。