王俊尹

【摘要】本文主要針對高效液相色譜法測定抗病毒藥物溶出度展開了研究，通過結(jié)合具體的試驗實例，對試驗所用的方法與結(jié)果作了詳細(xì)的介紹，并論述了最后所得的結(jié)果，以期能為有關(guān)方面的需要提供參考借鑒。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；抗病毒藥物；溶出度

【中圖分類號】R-0 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1671-8801（2015）01-0451-02

所謂的高效液相色譜法，是以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測。其具有著高壓、高速、高效等特點(diǎn)，在抗病毒藥物溶出度的測定中有著廣泛應(yīng)用。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1200高效液相色譜儀；四元泵；UV2450紫外分光光度計；ZRS-8G型智能溶出試驗儀；Simplicity超純水機(jī)；MS205DU電子天平。

1.2 試劑與試藥

阿昔洛韋對照品；阿昔洛韋片規(guī)格0.1g；甲醇；水為超純水；氫氧化鈉；鹽酸。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：依利特BDSC18（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫：30℃；流動相：甲醇-水（10∶90）；流速：1.0mL·min-1；檢測波長：254nm；進(jìn)樣體積：20μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取阿昔洛韋對照品23.32mg，置于25mL量瓶中，用0.4%氫氧化鈉溶液適量溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液S。

2.3 溶出介質(zhì)的配制

根據(jù)張啟明等報道的溶出介質(zhì)的選擇原則，參考金麗等多條實時溶出曲線對阿昔洛韋片的質(zhì)量再評價，結(jié)合阿昔洛韋的理化性質(zhì)及國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-054）-2003Z中阿昔洛韋分散片的溶出介質(zhì)為水，本文采用兩種pH值對比試驗，分別以水，0.1mol·L-1的鹽酸溶液為溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出度檢查。其它條件按《中國藥典》2010年版二部阿昔洛韋片檢查項下的溶出度測定條件：采用轉(zhuǎn)漿法，水浴溫度37.0±0.5℃，轉(zhuǎn)速50r·min-1，溶出時間30min，溶出介質(zhì)900mL。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1線性關(guān)系的考察：取“2.2項下”配制的對照品溶液，用水稀釋成系列濃度（4.664，9.328，18.656，27.984，46.64，93.28）μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取20μL注入液相色譜儀，按“2.1”色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，以峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，得到回歸方程：A=67.0880C+7.5073，r=0.9999。在4.664μg·mL-1～93.28μg·mL-1范圍內(nèi)，濃度與峰面積成良好的線性關(guān)系。

2.4.2精密度試驗：精密度取濃度為18.656μg·mL-1對照品溶液20μL注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，RSD=0.2%（n=6）。

2.4.3重現(xiàn)性試驗：取同一批號的樣品（A來源：某公司批號：20131104）按“2.3”項下操作，按“2.1”色譜條件進(jìn)行測定3次，測得其溶出量的RSD為0.3%（n=3）。結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.4.4穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一批號的樣品（同上）溶液20μL，分別于0，2，4，6，8，12h進(jìn)樣，測定峰面積，RSD=0.6%（n=6）。

2.4.5干擾實驗：分別吸取0.1mol·L-1鹽酸溶液A，水B，對照品溶液C，供試品溶液（溶出介質(zhì)為0.1mol·L-1鹽酸溶液D，溶出介質(zhì)為水E）各20μL，在“2.1”色譜條件下進(jìn)行測定。高效液相色譜圖譜中，0.1mol·L-1鹽酸溶液在254nm有較大的紫外吸收，水無紫外吸收，供試品溶液中鹽酸溶液可見明顯溶劑峰，但保留時間tR與阿昔洛韋對照品不同。

2.4.6加樣回收率試驗：采用加樣回收法，精密稱取已知含量的阿昔洛韋片（同上）適量，精密加入5mL的對照品溶液S，置于25mL量瓶中，用水稀釋成約20μg·mL-1的溶液，分別取上述溶液20μL，注入液相色譜儀，計算加樣回收率（見表1）。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=9）（mg）

2.5 樣品測定

取“1.2”項下阿昔洛韋片，按“2.3”項下制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算每批的溶出結(jié)果，同時將藥典方法的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，結(jié)果表明3批不同廠家的阿昔洛韋片在以水為溶出介質(zhì)與以0.1mol·L-1的鹽酸溶液（9-1000）為溶出介質(zhì)下溶出度均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的標(biāo)示量的80%的限度要求，兩種介質(zhì)，兩種測定方法結(jié)果基本一致（見表2、3）。

表2 阿昔洛韋片在水中溶出度結(jié)果

表3 阿昔洛韋片在鹽酸溶液溶出度結(jié)果

3 討論

（1）藥物的溶出度是評價藥品質(zhì)量及生產(chǎn)制備工藝的重要質(zhì)控項目，能全面，科學(xué)地評價不同企業(yè)生產(chǎn)的同藥品在體內(nèi)的溶出行為是否一致。提供最優(yōu)的標(biāo)準(zhǔn)的控制才能最真實的反應(yīng)患者使用該藥物的生物利用度。

（2）對比兩組數(shù)據(jù)，高效液相色譜法溶出結(jié)果比紫外分光光度法數(shù)值小。是因為高效液相色譜法避免了溶出介質(zhì)鹽酸溶液的紫外吸收干擾，及樣品中其他輔料的干擾。

（3）阿昔洛韋的紫外吸收光譜及其λmax的E（1%，1cm）值受pH（酸、中性、堿）的影響較大。按藥典方法測定時，對溶出度結(jié)果有一定的干擾。0.1mol·L-1的鹽酸溶液pH值為1.2，患者的胃液很難達(dá)到如此高值。水作為溶出介質(zhì)可以滿足溶出度限度要求，因此建議在《中國藥典》2015年版修訂時應(yīng)考慮將水作為阿昔洛韋片的溶出度檢查的溶出介質(zhì)，同時采用高效液相色譜法測定。

4 結(jié)語

綜上所述，本文就高效液相色譜法測定抗病毒藥物溶出度進(jìn)行了研究，并結(jié)合了具體的試驗實例，對高效液相色譜法在抗病毒藥物溶出度的測定試驗作了系統(tǒng)的闡述，相信對有關(guān)測定試驗方面的需要能有一定幫助。

參考文獻(xiàn)：

[1]苗立紅.高效液相色譜法測定替硝唑片的溶出度[J].首都醫(yī)藥.2014（20）.

[2]程佩素.高效液相色譜法測定多非利特膠囊的溶出度[J].中國藥房.2006（23）.