劉正奇 鐘琴 楊良山 曹躍朋 張雄峰 安陽(yáng)

【摘 要】目的：觀察苗藥痛風(fēng)停對(duì)尿酸鹽結(jié)晶誘導(dǎo)的SD模型大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腫脹度、步態(tài)分級(jí)、滑膜病理、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、IL-6及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的影響，探討苗藥痛風(fēng)停對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制。方法：將60只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組，苗藥痛風(fēng)停低、中、高劑量組，雙氯芬酸鈉組，模型對(duì)照組，每組10只。除空白對(duì)照組外，其余分別建立以尿酸鹽結(jié)晶誘導(dǎo)的大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，分別觀察和測(cè)量造模前及造模后6，12，24，48 h大鼠關(guān)節(jié)橫徑，并計(jì)算關(guān)節(jié)腫脹度；觀察大鼠24，48 h步態(tài)分級(jí)；造模后48 h處死大鼠，用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定細(xì)胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)。結(jié)果：各治療組對(duì)大鼠關(guān)節(jié)腫脹度、步態(tài)分級(jí)、滑膜病理改變和IL-1β、IL-6、TNF-α的表達(dá)有不同程度的改善，苗藥痛風(fēng)停中、高劑量組與雙氯芬酸鈉組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。結(jié)論：苗藥痛風(fēng)停能夠改善尿酸鹽結(jié)晶誘導(dǎo)的SD模型大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹度、步態(tài)分級(jí)及滑膜病理改變；苗藥痛風(fēng)停降低尿酸鹽結(jié)晶誘導(dǎo)的SD模型大鼠細(xì)胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α的表達(dá)，以中、高劑量作用明顯，并呈劑量依賴(lài)性。

【關(guān)鍵詞】 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；細(xì)胞因子；苗藥痛風(fēng)停；尿酸鹽；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.3969/j.issn.2095-4174.2015.08.002

【ABSTRACT】 Objective：To observe the effect of Miao medicine Tongfengting （苗藥痛風(fēng)停） on joint swelling，gait grading，pathological change of synovium，and the expression of IL-1β，IL-6 and TNF-α of SD rats with acute gout arthritis induced by monosodium urate crystal in order to study the mechanism of action of the medicine on acute gout arthritis.Methods：60 SD rats were randomly divided into a blank control group，low，medium and high dose groups of Miao medicine Tongfengting，a diclofenac sodium group and a model control group，10 rats in each group.Apart from the control group，models of acute gout arthritis induced bymonosodium urate crystal were established.The joint transverse diameter of model rats was observed and the joint swelling was measured respectively after 6，12，24 and 48 hours.The model rats were killed after 48 hours to measure the expression of IL-1β，IL-6 and TNF-α.Results：The joint swelling，gait grading，pathological change of synovium，IL-1β，IL-6 and TNF-α of SD rats all had different degrees of improvement in each treatment group.The difference between the medium and high dose groups and the diclofenac sodium group was not statistically significant （P > 0.05）.Conclusion：Miao medicine Tongfengting can improve the joint swelling，gait grading and pathological change of synovium and lower the expression of IL-1β，IL-6 and TNF-α which was obvious and dose dependent in the medium and high dose groups.

【Keywords】gout；cytokine；Miao medicine Tongfengting（苗藥痛風(fēng)停）；monosodium urate；experimental study

痛風(fēng)（gout）是體內(nèi)嘌呤代謝紊亂及/或排泄減少導(dǎo)致尿酸鹽（monosodium urate，MSU）沉積所引起的晶體性關(guān)節(jié)病。痛風(fēng)在我國(guó)的患病率約為0.15%～0.67%，較以前有明顯升高[1]。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎常常合并有心血管疾病、高血壓、2型糖尿病、肥胖、高脂血癥、代謝綜合征、慢性腎臟疾病和腎結(jié)石等[2]，而這些合并癥往往是NSAIDs和/或秋水仙堿常見(jiàn)的禁忌癥[3]。細(xì)胞因子白細(xì)胞介素IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等的高表達(dá)可導(dǎo)致、加重MSU結(jié)晶誘導(dǎo)的急性炎癥的發(fā)生和發(fā)展[4]。中醫(yī)學(xué)對(duì)痛風(fēng)治療有深入的認(rèn)識(shí)，積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)。苗藥痛風(fēng)停根據(jù)中醫(yī)理論和苗醫(yī)理論對(duì)痛風(fēng)認(rèn)識(shí)的結(jié)合而遣方組藥，由白虎加桂枝湯加減苗藥組成，通過(guò)本課題組多年臨床觀察、臨床研究和實(shí)驗(yàn)研究，其治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎療效顯著，安全性好，緩解痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎效果明顯，并具有降尿酸作用[5-7]。在前期實(shí)驗(yàn)研究中，筆者已經(jīng)證實(shí)苗藥痛風(fēng)停能夠抑制SD大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎IL-8、環(huán)氧化酶-2（COX-2）的表達(dá)，減輕關(guān)節(jié)滑膜炎癥[8-9]。本文旨在探討苗藥痛風(fēng)停對(duì)IL-1β、IL-6和TNF-α的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康雌雄SD大鼠60只，體質(zhì)量（200±20）g，由重慶滕鑫生物技術(shù)有限公司提供，合格證號(hào)：SCXK（渝）2014-0009。

1.2 主要試劑及儀器 尿酸鈉（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)BCBH7155V）；吐溫80（美國(guó)Amresco公司，批號(hào)20090120）；多粘菌素B（美國(guó)Amresco公司，批號(hào)2013105156）；氨基酸乙脂（上海伊卡生物技術(shù)有限公司，批號(hào)EK131219）；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛溶液（上海博谷生物科技有限公司，批號(hào)PT028）；IL-1β ELISA檢測(cè)試劑盒（上海研輝生物科技有限公司，批號(hào)CK-E30419R）；IL-6 ELISA檢測(cè)試劑盒（上海研輝生物科技有限公司，批號(hào)CK-E30646R）；TNF-α ELISA檢測(cè)試劑盒（上海研輝生物科技有限公司，批號(hào)CK-E30635R）；酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek有限公司，批號(hào)Synergy TM）；顯微鏡（日本OLYMPUS公司，批號(hào)BX51T-PHD-J11）；CMOS（日本OLYMPUS公司，批號(hào)BX51T-PHJ-D17）；切片機(jī)（德國(guó)Leica公司，批號(hào)RM2015）；冷凍離心機(jī)（北京離心機(jī)廠，批號(hào)LDZ5-2型）；電子天平（瑞士METTER，批號(hào)AE100型）；低溫冰箱（日本SANYO公司，批號(hào)MDF-382E型）；電子游標(biāo)卡尺：貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 苗藥痛風(fēng)停由生石膏15 g、知母12 g、黃柏12 g、川萆薢10 g、薏苡仁12 g、砂仁12 g、川牛膝15 g、甘草6 g等，加苗藥觀音草12 g、芭蕉根12 g、絡(luò)石藤15 g、大血藤15 g等組成。以上生藥均購(gòu)于貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院。取上藥煎湯濃縮，質(zhì)量分?jǐn)?shù)按實(shí)驗(yàn)需求的低、中、高分組分別濃縮至1.54，3.08，6.16 g·mL-1，置于4 ℃冰箱保存。雙氯芬酸鈉緩釋片（四川花新制藥有限公司，批號(hào)H19991402），臨用時(shí)將藥片充分研磨后用無(wú)菌蒸餾水配制成混懸液，然后配制成1.54 mg·mL-1的混懸液備用。

2 方 法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將60只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組，苗藥痛風(fēng)停低、中、高劑量組，雙氯芬酸鈉組，模型對(duì)照組，每組10只。

2.2 造模方法 將大鼠步態(tài)分級(jí)[10-11]作為各組SD大鼠的篩選標(biāo)準(zhǔn)，未達(dá)到0級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的SD大鼠則剔除不用。具體造模方法：依據(jù)Mc Carty DJ[12]的經(jīng)典造模方法，先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的烏拉坦（5 mL·kg-1）腹腔注射麻醉，然后常規(guī)消毒大鼠右側(cè)膝關(guān)節(jié)皮膚，稍彎曲膝關(guān)節(jié)，從關(guān)節(jié)正中或側(cè)方用6號(hào)注射針進(jìn)針，將尿酸鈉溶液10 mg（0.4 mL）及多粘菌素B 0.1 mL（10 U·mL-1）注入大鼠膝關(guān)節(jié)腔，空白對(duì)照組予相同劑量的生理鹽水關(guān)節(jié)腔注射。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，有3只大鼠因灌胃不當(dāng)死亡，2只大鼠因麻醉過(guò)深死亡，為保證樣本數(shù)量，及時(shí)填補(bǔ)。

2.3 給 藥 各組SD大鼠在相同條件下自由飲食1周后，開(kāi)始灌胃。根據(jù)成人與大鼠用藥等效劑量換算，中劑量等于將成人用藥劑量換算為大鼠用藥劑量，中劑量減半則為低劑量，中劑量加倍則為高劑量。苗藥痛風(fēng)停低、中、高劑量組分別按質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同每只灌胃2 mL，即低、中、高劑量組分別為每只1.54，3.08，6.16 g·d-1；雙氯芬酸鈉組灌胃劑量每只2 mL，即每只2.08 mg·d-1；空白對(duì)照組及模型對(duì)照組予以等體積的生理鹽水灌胃。各組大鼠連續(xù)灌胃3 d及造模前1 h進(jìn)行灌胃，每日1次。最后一次灌胃后1 h，按上述造模方法造模。造模后繼續(xù)給藥，每日1次，直至大鼠處死。

2.4 標(biāo)本取材 將大鼠用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的烏拉坦（5 mL·kg-1）腹腔注射麻醉后，股動(dòng)脈放血約4～6 mL，靜置約1 h后，以2500 r·min-1速度離心30 min，分離血清，用于ELISA檢測(cè)。大鼠放血后，將其處死，進(jìn)行常規(guī)消毒，沿后肢右膝關(guān)節(jié)正中縱行剪開(kāi)皮膚，暴露出膝關(guān)節(jié)，打開(kāi)膝關(guān)節(jié)腔，用眼科剪取完整的關(guān)節(jié)滑膜組織，用PBS水清洗去除血跡后，置于1.5 mL預(yù)冷的離心管中，然后加用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛約1 mL固定，迅速凍存在-80 ℃冰箱中。

2.5 檢測(cè)指標(biāo) 關(guān)節(jié)腫脹度：分別于造模前，造模后6，12，24，48 h用電子游標(biāo)卡尺在同一部位測(cè)定膝關(guān)節(jié)橫徑，造模前后的差值作為關(guān)節(jié)腫脹度。大鼠步態(tài)分級(jí)：按Coderre等[11]的方法觀察大鼠步態(tài)，0級(jí)，正常；1級(jí)，輕微跛行，受試下肢略有彎曲；2級(jí)，中度跛行，受試下肢剛觸及地面；3級(jí)，重度跛行，受試下肢離開(kāi)地面，三足著地行走。在造模后12，24 h評(píng)價(jià)大鼠步態(tài)分級(jí)。病理學(xué)檢測(cè)采用HE染色，先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛固定組織，石蠟包埋、切片。HE染色的主要步驟如下：先用二甲苯脫蠟，無(wú)水乙醇水化，蘇木素染色，鹽酸酒精分化，伊紅染色；之后用酒精將伊紅洗掉，以酒精梯度脫水中性樹(shù)膠封片后光鏡下觀察滑膜組織病理變化。ELISA檢測(cè)血清中IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)（具體操作方法按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行）。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，如果符合正態(tài)分布和方差齊性，不同組間比較采用One-Way ANOVA分析；方差齊性時(shí)用LSD法檢驗(yàn)，方差不齊性時(shí)用Tamhance's T2法檢驗(yàn)；如果不符合正態(tài)分布，則使用非參數(shù)檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用Kruskal-Wallis H及Mann-Whitney U檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度比較 造模后6 h，與空白對(duì)照組比較，各組關(guān)節(jié)腫脹度均不同程度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。造模后12 h，與空白對(duì)照組比較，各組關(guān)節(jié)腫脹度繼續(xù)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與模型對(duì)照組比較，各治療組關(guān)節(jié)腫脹度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與雙氯芬酸鈉組比較，苗藥痛風(fēng)停低、中、高劑量組關(guān)節(jié)腫脹度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。造模后24 h，各組關(guān)節(jié)腫脹度繼續(xù)升高，其中模型對(duì)照組關(guān)節(jié)腫脹度達(dá)到最高峰，與空白對(duì)照組比較，各組關(guān)節(jié)腫脹度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與模型對(duì)照組比較，各治療組關(guān)節(jié)腫脹度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與雙氯芬酸鈉組比較，苗藥痛風(fēng)停中、高劑量組關(guān)節(jié)腫脹度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；苗藥痛風(fēng)停低劑量組關(guān)節(jié)腫脹度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。之后各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹開(kāi)始下降，造模后48 h，模型對(duì)照組關(guān)節(jié)腫脹度繼續(xù)下降，與空白對(duì)照組比較，差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與模型對(duì)照組比較，雙氯芬酸鈉組，苗藥痛風(fēng)停中、高劑量組關(guān)節(jié)腫脹度下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01），苗藥痛風(fēng)停低劑量組關(guān)節(jié)腫脹度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；與雙氯芬酸鈉組比較，苗藥痛風(fēng)停中、高劑量組關(guān)節(jié)腫脹度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；與苗藥痛風(fēng)停高劑量比較，中劑量組關(guān)節(jié)腫脹度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；與苗藥痛風(fēng)停低劑量組比較，中劑量組關(guān)節(jié)腫脹度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表1。

3.2 各組大鼠步態(tài)分級(jí)比較 大鼠步態(tài)分級(jí)統(tǒng)計(jì)采用多個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)，造模后24 h，觀察各組大鼠步態(tài)，總體樣本差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2 = 29.800，P < 0.01）；與空白對(duì)照組比較，各造模組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與模型對(duì)照組比較，各治療組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；各治療組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。經(jīng)造模后48 h，總體樣本差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2 = 5.102，P > 0.05），說(shuō)明48 h后各組大鼠跛行步態(tài)逐漸緩解。見(jiàn)表2。

3.3 滑膜組織病理學(xué)形態(tài)改變 HE染色后，空白對(duì)照組關(guān)節(jié)滑膜組織光滑完整、無(wú)增生，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、無(wú)血管增生及纖維素滲出；苗藥痛風(fēng)停各劑量組及雙氯芬酸鈉組滑膜組織充血水腫，成纖維細(xì)胞增生，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，程度比模型對(duì)照組減輕；模型對(duì)照組滑膜充血水腫、周?chē)?xì)血管擴(kuò)張，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，主要為中性粒細(xì)胞。滑膜病理學(xué)顯示，苗藥痛風(fēng)停不同劑量均能減輕滑膜組織充血水腫及毛細(xì)血管擴(kuò)張，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕滑膜病理?yè)p害，從而減輕炎癥反應(yīng)。見(jiàn)圖1。

3.4 各組大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)情況 ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)量均增高，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與模型對(duì)照組比較，各治療組IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)量均有下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與雙氯芬酸鈉組比較，苗藥痛風(fēng)停中、高劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；與苗藥痛風(fēng)停高劑量組比較，中劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），低劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表3。

4 討 論

IL-1β是最經(jīng)典的炎癥調(diào)節(jié)劑，是調(diào)節(jié)炎癥的始動(dòng)因素，在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中，活化的IL-1β能調(diào)節(jié)其他細(xì)胞因子和炎癥趨化因子，募集中性粒細(xì)胞進(jìn)入MSU結(jié)晶沉積部位，放大炎癥反應(yīng)，從而加重關(guān)節(jié)炎癥[13]。IL-1β是痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過(guò)程中的關(guān)鍵因子，在急慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中起重要作用，對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的形成和關(guān)節(jié)破壞發(fā)揮重要作用[14]，采用IL-1抑制劑治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎取得了滿意的臨床療效[15]。IL-6也參與了痛風(fēng)的發(fā)生發(fā)展，當(dāng)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等病情活動(dòng)或關(guān)節(jié)破壞嚴(yán)重時(shí)，血清與關(guān)節(jié)液中IL-6的水平升高，IL-6作為判斷痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎疾病活動(dòng)性和嚴(yán)重程度的指標(biāo)[16]。MSU晶體使滑膜細(xì)胞和單核細(xì)胞生成IL-6增加。最新研究顯示，托珠單抗治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎后患者血清IL-6降低，痛風(fēng)石大小有所減小，不發(fā)熱，在此過(guò)程中患者沒(méi)有急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)作[17]。TNF-α是炎性細(xì)胞因子網(wǎng)鏈中的第1個(gè)細(xì)胞因子，不僅啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，而且能誘導(dǎo)其他細(xì)胞因子如IL-1β、IL-6、IL-8等炎癥細(xì)胞因子的過(guò)度表達(dá)，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大[18]。在MSU晶體誘導(dǎo)的痛風(fēng)模型中，如果阻斷TNF-α的產(chǎn)生，則E-選擇素的表達(dá)和中性粒細(xì)胞的募集明顯地受到抑制，證明了TNF-α在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。TNF-α抑制劑對(duì)于復(fù)雜的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎能夠有效緩解臨床癥狀，并且抑制MSU的繼續(xù)沉積[19]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制主要是飲食不節(jié)，過(guò)食肥甘厚味、辛辣之品，加上外感風(fēng)寒濕邪氣，損傷脾胃，脾失健運(yùn)，濕濁內(nèi)滯，聚于關(guān)節(jié)，濕聚成痰，痰濕為有形之邪，痹阻日久，氣血運(yùn)行不暢，則生瘀血，痰濕與瘀血互結(jié)阻滯臟腑經(jīng)絡(luò)氣血津液運(yùn)行，機(jī)體代謝紊亂，則發(fā)為痛風(fēng)。痰濕與瘀血互結(jié)則痛風(fēng)長(zhǎng)期不愈，反復(fù)發(fā)作。苗醫(yī)認(rèn)為，疾病是由不良的生存環(huán)境、季節(jié)氣候因素和外來(lái)毒素（如風(fēng)毒、氣毒、寒毒、水毒）等引起人體的損傷。苗藥痛風(fēng)停由經(jīng)方白虎加桂枝湯加減苗藥觀音草、芭蕉根、絡(luò)石藤、大血藤等組成，綜觀全方共奏清熱解毒、健脾利濕、活血化瘀之效。

本實(shí)驗(yàn)采用ELISA檢測(cè)顯示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01），說(shuō)明造模是成功的，各治療組IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)均有所下降，以苗藥痛風(fēng)停中、高劑量組顯著。各造模組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度在造模后6 h開(kāi)始腫脹，12 h后繼續(xù)升高，24 h達(dá)到高峰，48 h后逐漸緩解，在造模后12 h，各治療組關(guān)節(jié)腫脹明顯低于模型對(duì)照組（P < 0.01），在24 h和48 h分別表現(xiàn)出以苗藥痛風(fēng)停中、高劑量組緩解明顯。而各組大鼠步態(tài)分級(jí)則以24 h模型對(duì)照組明顯，出現(xiàn)中、重度跛行，各治療組跛行程度較輕，48 h后基本緩解，苗藥痛風(fēng)?？擅黠@緩解大鼠關(guān)節(jié)腫脹度和步態(tài)分級(jí)。通過(guò)病理學(xué)觀察顯示，各治療組滑膜組織充血、水腫，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較模型對(duì)照組減輕，說(shuō)明苗藥痛風(fēng)停能夠改善滑膜病理?yè)p害，減輕炎癥反應(yīng)。綜上所述，筆者推測(cè)苗藥痛風(fēng)停對(duì)MSU誘導(dǎo)的SD大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的改善可能是通過(guò)抑制下游細(xì)胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)減輕炎癥反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)的，并呈現(xiàn)出劑量依賴(lài)性。

5 參考文獻(xiàn)

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì).原發(fā)性痛風(fēng)診斷和治療指南[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2011，15（6）：410-411.

[2] Keenan RT，O'Brien WR，Lee KH，et al.Prevalence of contraindications and prescription of pharmacologic therapies for gout[J].Am J Med，2011，124（2）：155-163.

[3] Richette P，Bardin T.Should prednisolone be first-line therapy for acute gout？[J].Lancet，2008，372（9646）：1301-1301.

[4] Liu R，O'Connell M，Johnson K，et al.Extracellular signal-regulated kinase 1/extracellular signal-regulated kinase 2 mitogen-activated protein kinase signaling and activation of activator protein 1 and nuclear factor kappaB transcription factors play central roles in interlerkin-8 expression stimulated by monosodium urate monohydrate and calcium pyrophosphate crystals in monocytic cells[J].Arthritis Rheum，2000，43（5）：1145-1155.

[5] 曹躍朋，黃華，鐘琴，等.苗藥痛風(fēng)停湯治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎60例[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2013，2（5）：5-6，10.

[6] 付德紅，鐘琴，馬武開(kāi)，等.苗藥痛風(fēng)停湯內(nèi)服配合水晶膏外敷治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎療效觀察[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，7（6）：494-496.

[7] 鐘琴，劉正奇，劉漢順，等.痛風(fēng)停膠囊配合金黃膏外敷治療痛風(fēng)35例[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)：學(xué)術(shù)版，2008，15（9）：154-155.

[8] 鐘琴，劉正奇，安陽(yáng)，等.苗藥痛風(fēng)停湯對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠血清IL-8的影響[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2014，3（1）：16-18.

[9] 劉正奇，鐘琴，馬武開(kāi)，等.苗藥痛風(fēng)停湯對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎SD模型大鼠關(guān)節(jié)滑膜COX-2表達(dá)的影響[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（4）：27-29.

[10] Coderre TJ，Wall PD.Ankle joint urate arthritis（AJUA） in rat：analternative animal model of arthritis to that produce by Freund's adjuvant[J].Pain，1987，28（3）：379-393.

[11] Coderre TJ，Wall PD.Ankle joint urate arthritis in rats provides a useful tool for the evaluation of analgesic and anti-arthritic agents[J].Pharmmacol Biochem Behav，1988，29（3）：461-466.

[12] 金沈銳，秦旭華.痛風(fēng)及高尿酸血癥動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀和評(píng)價(jià)[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2005，13（1）：55-58.

[13] Church LD，Cook GP，McDermott MF.Primer：inflammasomes and interleukin 1beta in inflammatory disorders[J].Nat Clin Pract Rheumatol，2008，4（1）：34-42.

[14] Chen CJ，Shi Y，Hearn A，et al.MyD88-dependent IL-1 receptor signaling is essential for gouty inflammation stimulated by monosodium urate crystals[J].J Clin Invest，2006，116（8）：2262-2271.

[15] Terkeltaub R，Sundy JS，Schumacher HR，et al.The interleukin 1 inhibitor rilonacept in treatment of chronic gouty arthritis：results of a placebo-controlled，monosequence crossover，non-randomised，single-blind pilot study[J].Ann Rheum Dis，2009，68（10）：1613-1617.

[16] Takahashi M.Inflammatory cytokines in the pathogenesis of atherosclerosis[J].Nihon Rinsho，2011，69（1）：30-33.

[17] Mokuda S，Kanno M，Takasugi K，et al.Tocilizumab improved clinical symptoms of a patient with systemic tophaceous gout who had symmetric polyarthritis and fever：An alternative treatment by blockade of interleukin-6 signaling[J].SAGE Open Medical Case Reports，2014，2：2050313X13519774.

[18] Li X，Huang Q，Ong CN，et al.Chrysin sensitizes tumor necrosis factor-α-induced apoptosis in human tumor cells via suppression of nuclear factor-kappaB[J].Cancer Lett，2010，293（1）：109-116.

[19] Tausche AK，Richter K，Gr?ssler A，et al.Severe gouty arthritis refractory to anti-inflammatory drugs：treatment with anti-tumour necrosis factor alpha as a new therapeutic option[J].Ann Rheum Dis，2004，63（10）：1351-1352.

收稿日期：2015-05-03；修回日期：2015-06-15