吳 波，羅厚強(qiáng)，段龍川，楊飛萍

(1.溫州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江溫州325000;2.溫州科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)科系;3.溫州市農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)中心)

磺胺間甲氧嘧啶(SMM)是高效人工合成類抗菌藥，抗菌作用和預(yù)防細(xì)菌感染效果屬磺胺類中最強(qiáng)［1、2］，常用于防治畜禽菌源性感染和球蟲?。?］，也可用作飼料添加劑，以提高畜禽抗病力和生產(chǎn)性能?；前奉愃幬餁埩羝谳^長，容易在畜禽產(chǎn)品中殘留。藥物殘留可破壞人體造血系統(tǒng)，引起溶血性貧血癥、粒細(xì)胞缺乏癥、血小板減少癥等，容易導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生［4、5］。

藥物的原型及代謝產(chǎn)物在機(jī)體內(nèi)的殘留消解是一個(gè)復(fù)雜的過程，不同畜種的殘留消解規(guī)律有所不同［6］，國內(nèi)外的科研人員曾研究了SMM 在豬［1］、山羊［7］、家兔［8］、馬［9］等動(dòng)物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程。但是，黃羽肉雞可食組織中的藥物殘留消解規(guī)律研究至今未見報(bào)道。為了保證黃羽肉雞產(chǎn)品安全可靠，維護(hù)消費(fèi)者利益，筆者通過磺胺間甲氧嘧啶藥物在黃羽肉雞組織內(nèi)的休藥期驗(yàn)證試驗(yàn)，以掌握該藥物在不同組織內(nèi)的殘留消解規(guī)律，同時(shí)為合理給藥以達(dá)到最佳療效提供參考，特進(jìn)行本試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 藥品及儀器 磺胺間甲氧嘧啶鈉:商品名制菌磺，SMM 含量45%，生產(chǎn)批號(hào):20140121，購自廣東某動(dòng)物保健品有限公司。SMM 對(duì)照品:含量99.23%，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司，純度不低于98.0%。ACQUITY UPLC-Xevo TQ 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電噴霧離子(ESI)源;高速冷凍離心機(jī)，超聲清洗儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，漩渦混勻器。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 40日齡黃羽肉雞160 羽，體重1.5 ±0.2 kg，公母各半，試驗(yàn)前確保無磺胺類藥物使用記錄。

供試雞隨機(jī)分為對(duì)照組和低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)三個(gè)磺胺類藥物梯度劑量試驗(yàn)組，每組40 羽。

1.3 飼養(yǎng)管理及給藥方法 供試肉雞全部籠養(yǎng)，自由采食和飲水。40日齡開始，對(duì)照組僅飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組飼料中分別以50 mg/kg、100 mg/kg 和200 mg/kg 水平添加磺胺間甲氧嘧啶鈉，連喂7 d 后停藥，停藥后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定供試黃羽肉雞可食組織中SMM 殘留量。

1.4 采樣及樣品處理 停藥后0 d，3 d，10 d，15 d，20 d，25 d，28 d，30 d，32 d，35 d 時(shí)間點(diǎn)每組隨機(jī)選取4 羽，稱重后立即屠宰、取樣。每雞各取胸肌和腿肌約25 g、全肝、全腎，樣品編號(hào)后置－20℃冷凍保存，待測(cè)。

取5.0 g 經(jīng)切碎勻漿的可食組織樣品，置50 mL離心管中，加入無水硫酸鈉5 g 和乙腈20 mL，渦旋混勻2 min，超聲5 min，以8 000 r/min 冷凍離心5 min。將上層提取液轉(zhuǎn)移至100 mL 棕色雞心瓶中，殘?jiān)尤胍译?0 mL 重復(fù)操作1 次。合并提取液，向雞心瓶中加入異丙醇10 mL。置40℃以下水浴減壓濃縮至近干，用氮?dú)獯蹈?。?zhǔn)確加入1.0 mL 初始流動(dòng)相，渦旋混勻溶解殘留物，轉(zhuǎn)移至10 mL 具塞聚丙乙烯離心管中，加入正己烷1 mL，混勻，以10 000 r/min 冷凍離心5 min，取下層液過0.2 μm 微孔濾膜，濾液待測(cè)定。

1.5 測(cè)定方法

色譜條件:色譜柱:ACQUITYUPLCTMBEHC18色譜柱(100 mm×21 mm，1.7 μm;Waters 公司);柱溫35℃;樣品溫度10℃;進(jìn)樣體積5 μL;流動(dòng)相A為乙腈，B 為0.1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸水溶液;流速:0.25 mL/min。

質(zhì)譜條件:電離方式ESI +;電離電壓:3.50 kV;離子源溫度:150℃;錐孔反吹氣流量:50 L/h;脫溶劑氣溫度:350℃;脫溶劑氣流量:800 L/h;采集模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);碰撞室氣流量:0.2 mL/min。

1.6 回收率和精密度測(cè)定 采用未檢測(cè)出磺胺間甲氧嘧啶鈉的肌肉、肝及腎樣品作為空白樣品，分別進(jìn)行加標(biāo)回收及精密度試驗(yàn)，每個(gè)濃度設(shè)4 個(gè)平行樣品，結(jié)果詳見表1。

表1 方法回收率及精密度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

由表1可見，加標(biāo)回收率范圍100% ～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于9.0%，表明SMM 0.1 mg/kg殘留濃度附近具有較高的準(zhǔn)確度。

3 結(jié)果與分析

3.1 停藥后各時(shí)間點(diǎn)黃羽肉雞可食組織中SMM 殘留量測(cè)定 詳見表2。

表2 磺胺間甲氧嘧啶在黃羽肉雞組織中的消解規(guī)律

由表2可見，對(duì)照組肉雞的肌肉、肝、腎組織中均未檢測(cè)到SMM。試驗(yàn)組肉雞各停藥時(shí)間點(diǎn)可食組織中SMM 殘留濃度，停藥0 d 時(shí)，中劑量組肌肉、肝和腎組織中殘留量分別為5.231 mg/kg、10.240 mg/kg 和15.439 mg/kg，SMM 在組織中濃度分布差異較大，三個(gè)梯度試驗(yàn)組組織殘留量高低順序依次為腎＞肝＞肌肉。

SMM 在停藥0－3 d 區(qū)間內(nèi)殘留消解速度較快，如圖1所示。其中，腎組織在0 d 時(shí)殘留濃度最高，殘留量下降速度最為迅速，中劑量試驗(yàn)組10 d后，殘留量低于我國最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)(0.1 mg/kg)［10］，殘留濃度為0.090 mg/kg，停藥30 d 后，未檢出殘留物;中劑量試驗(yàn)組肝組織在停藥15 d 后SMM 殘留量已低于最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，殘留濃度為0.088 mg/kg，停藥35 d 后，未檢出殘留物;肌肉組織SMM 殘留代謝消解相對(duì)緩慢，停藥30 d 后，藥物殘留量為0.084 mg/kg。

圖1 磺胺間甲氧嘧啶在黃羽肉雞組織中的消解規(guī)律

3 小結(jié)與討論

三個(gè)劑量試驗(yàn)組在黃羽肉雞腎組織中代謝消解較快，其次是肝組織，肌肉組織中SMM 代謝消解速度較緩慢。在0 d，三個(gè)梯度劑量試驗(yàn)組SMM 殘留濃度差異明顯，15 d 后殘留濃度及消解速度趨于一致。中劑量試驗(yàn)組肌肉、肝、腎組織分別停藥30 d、15 d、10 d 后，殘留量均低于我國規(guī)定的最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。

2005年版《中國獸藥典》規(guī)定磺胺間甲氧嘧啶在肉雞中的休藥期為28 d。黃羽肉雞品種生長周期相對(duì)較長，藥物代謝速度可能低于其他肉雞品種，肌肉組織中的SMM 殘留量在28 d 時(shí)則尚未達(dá)到安全標(biāo)準(zhǔn)。

根據(jù)本次試驗(yàn)，筆者認(rèn)為針對(duì)黃羽肉雞品種，在臨床使用SMM 時(shí)，28 d 的休藥期可能尚不安全，應(yīng)按照30 d 或者以上的休藥期執(zhí)行，才能確保黃羽肉雞可食組織中的SMM 殘留低于國家規(guī)定的最高限量標(biāo)準(zhǔn)。

［1］岳永波，楊國輝，魏占勇，等.磺胺間甲氧嘧啶在豬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及生物利用度［J］.畜牧與獸醫(yī)，2005，37(10):34－36.

［2］華南農(nóng)學(xué)院.獸醫(yī)藥理學(xué)［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1980:228.

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［10］中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第235 號(hào).動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量［S］.