閆景彬閆秀梅陳 斌孫洪偉

超聲引導(dǎo)射頻消融術(shù)對(duì)肝癌患者免疫功能的影響

閆景彬1閆秀梅2陳 斌3孫洪偉3

目的 觀察射頻消融術(shù)（RFA）對(duì)肝癌患者免疫功能的影響。方法 87例肝癌患者按治療方法分為RFA組45例和手術(shù)組42例。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩組治療前后外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T和CD56+NK細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值變化；通過(guò)細(xì)胞C3受體花環(huán)形成率（RBCC3BRR）、紅細(xì)胞黏附腫瘤細(xì)胞花環(huán)率（RBC－TRR）和紅細(xì)胞吸附免疫復(fù)合物花環(huán)形成率（RBC－ICR）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)外周血紅細(xì)胞免疫功能；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清Th1型細(xì)胞因子（IL－2、IFN－γ、TNF－α）含量。結(jié)果 RFA組治療15天CD3+、CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值和NK細(xì)胞數(shù)目與治療前比較顯著升高（P均＜0.05）；治療30天上述指標(biāo)繼續(xù)升高（P均＜0.05）；手術(shù)組治療15天后CD3+、CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值和NK細(xì)胞數(shù)目與治療前比較升高不顯著（P＞0.05），治療30天后較治療前顯著升高（P均＜0.05）。治療30天后，兩組CD8+T細(xì)胞數(shù)目較治療前均有所下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。RFA組治療15天RBC－ICR與治療前比較顯著下降（P＜0.05），RBC－C3bRR、RBC－TRR顯著升高（P均＜0.05）；手術(shù)組治療30天后上述指標(biāo)才開(kāi)始顯著改善（P均＜0.05），但與同期RFA組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。RFA組治療15天IL－2、IFN－γ、TNF－α濃度與治療前比較顯著升高（P均＜0.05），治療30天后上述指標(biāo)繼續(xù)升高（P均＜0.05）；手術(shù)組治療30天后IL－2、IFN－γ、TNF－α濃度與治療前比較顯著升高（P均＜0.05），但顯著低于同期RFA組（P均＜0.05）。結(jié)論 與手術(shù)治療相比較，RFA能更好地改善肝癌患者的淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞免疫功能，促進(jìn)Th1型細(xì)胞因子分泌，對(duì)肝癌治療產(chǎn)生有益的影響。

肝癌；射頻消融術(shù)；手術(shù)治療；免疫功能；Th1型細(xì)胞因子

肝癌（hepatic carcinoma）是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，手術(shù)切除一直是臨床首選治療手段。但由于肝癌起病隱匿，多中心發(fā)生及早期播散、轉(zhuǎn)移，使得外科手術(shù)切除率僅為20%～55%，術(shù)后復(fù)發(fā)率也較高，并發(fā)癥偏多[1]。近20年來(lái)，超聲引導(dǎo)射頻消融術(shù)（radio frequency ablation，RFA）作為一種原位滅活腫瘤細(xì)胞的介入手段,在原發(fā)性、繼發(fā)性肝癌的根治及姑息性治療上得到廣泛應(yīng)用，具有安全有效、微創(chuàng)、耐受性好、并發(fā)癥少等特點(diǎn)[2]。據(jù)報(bào)道，RFA除局部熱凝治療殺死腫瘤細(xì)胞，毀滅腫瘤組織外，還能改善患者的免疫功能[3－5]。本研究通過(guò)對(duì)肝癌患者RFA和手術(shù)治療前后免疫功能、肝功能變化進(jìn)行比較分析，探討RFA在肝癌治療方面的優(yōu)勢(shì)，為RFA的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 臨床資料

選取本院腫瘤外科2012年2月—2013年4月經(jīng)臨床或肝穿刺活檢病理證實(shí)的肝癌患者87例，男53例，女34例；年齡36～74歲，平均年齡（56.41± 6.73）歲；其中原發(fā)性肝細(xì)胞癌（HCC）61例，轉(zhuǎn)移性肝癌26例。并且滿足以下條件：①單個(gè)癌灶≤5cm，或多個(gè)癌灶（≤4個(gè)且每個(gè)≤3cm）；②肝癌患者未接受其他治療；③無(wú)合并免疫系統(tǒng)疾患，半個(gè)月內(nèi)無(wú)細(xì)菌、病毒感染史，且近半年未接受影響機(jī)體免疫功能的藥物治療；④門(mén)靜脈或下腔靜脈內(nèi)無(wú)癌栓，亦無(wú)肝外轉(zhuǎn)移；⑤肝功能Child－pugh分級(jí)為A或B級(jí)，血小板計(jì)數(shù)＞50×109/L，凝血酶原時(shí)間＜18s。

87例按治療方法分為RFA組45例，手術(shù)組42例。兩組患者平均年齡、性別、肝功能分級(jí)、AFP等級(jí)等比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。患者均自愿接受手術(shù)或RFA治療，術(shù)前由本人或家屬簽字。治療方法經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，接受治療后1個(gè)月內(nèi)，患者不再接受化療、放療或免疫等其他治療。

2 治療方法

2.1 手術(shù)組 根據(jù)臨床分期、患者肝功能情況，經(jīng)術(shù)前準(zhǔn)備、保肝治療后，于全麻下采用肝葉切除或肝葉不規(guī)則切除術(shù)。切緣均達(dá)到癌灶旁1.5cm以上，確保無(wú)癌殘留。

2.2 RFA組 采用日立公司EUB7500型彩色多普勒診斷儀，探頭頻率3.5～4.0MHz。美國(guó)達(dá)隆公司RF－2000射頻治療儀，發(fā)射頻率500kHz，功率100W；取適當(dāng)體位，以超聲明確定位癌灶后，確定進(jìn)針點(diǎn)。常規(guī)消毒鋪巾，2%利多卡因于穿刺局部逐層麻醉至肝包膜，超聲引導(dǎo)下將射頻針經(jīng)皮或開(kāi)腹刺入肝臟癌灶預(yù)定位置；展開(kāi)射頻針，調(diào)整半徑，通入射頻電流，電流強(qiáng)度從小到大、序貫治療，由計(jì)算機(jī)根據(jù)阻抗控制。若癌灶較大（＞5cm），采取多點(diǎn)、交叉、重疊消融至瘤體完全毀損，以毀損腫瘤及周?chē)?.5～1.0cm的肝組織為目的，最大限度地滅活癌灶，減少殘留與復(fù)發(fā)。

2.3 檢測(cè)指標(biāo) 兩組患者均于治療前及治療后第1、15、30天空腹抽取肘靜脈血5mL，部分血抗凝用于檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群比例和紅細(xì)胞免疫功能；部分血不加抗凝劑，常規(guī)制備血清。－20℃條件下保存待用，用于檢測(cè)免疫相關(guān)因子。

采用美國(guó)碧迪公司FACSCantoⅡ型流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD56+NK細(xì)胞的比例，鼠抗人CD3－PE－Cy5/CD4－FITC/CD8－PE三色熒光標(biāo)記抗體，鼠抗人CD56－PE－CY7熒光標(biāo)記抗體購(gòu)自碧迪公司。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，由專(zhuān)門(mén)技術(shù)員負(fù)責(zé)流式儀器操作。

采用郭峰等[6]方法測(cè)定患者外周血紅細(xì)胞C3受體花環(huán)形成率（RBC－C3bRR）、紅細(xì)胞黏附腫瘤細(xì)胞花環(huán)率（RBC－TRR），紅細(xì)胞吸附免疫復(fù)合物花環(huán)形成率（RBC－ICR）。酵母多糖凍干試劑，補(bǔ)體致敏酵母多糖凍干試劑，小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞凍干試劑由本院免疫室提供。

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定患者外周血血清IL－2、IFN－γ、TNF－α含量。相關(guān)ELISA試劑盒均購(gòu)自北京達(dá)科為生物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用美國(guó)賽默飛世爾科技全波長(zhǎng)Multiskan Spectrum酶標(biāo)儀測(cè)定和記錄結(jié)果。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用F檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 兩組治療前后外周血淋巴細(xì)胞亞群變化比較RFA組與治療前比較，RFA治療后第1天，外周血淋巴細(xì)胞亞群比例無(wú)明顯變化（P＞0.05）；治療后第15天，CD3+T、CD4+T、CD56+NK細(xì)胞數(shù)目和CD4+/ CD8+比值均升高，與治療前和治療后第一天比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），CD8+T細(xì)胞數(shù)目有所降低，但與治療前和治療后第一天比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后第30天，CD3+T、CD4+T、CD56+NK細(xì)胞數(shù)目和CD4+/CD8+比值均進(jìn)一步升高，與治療前和治療第1天后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），但與治療后第15天比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。CD8+T細(xì)胞數(shù)目進(jìn)一步降低，但與治療前和治療后第1、15天比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

手術(shù)組與治療前比較，手術(shù)治療后第1天，CD3+T、CD4+T、CD56+NK細(xì)胞數(shù)目和CD4/CD8比值略有下降，CD8+T細(xì)胞數(shù)目略有上升，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后第15天，外周血淋巴細(xì)胞亞群變化不顯著。治療后第30天，CD3+T、CD4+T、CD56+NK細(xì)胞數(shù)目和CD4+/CD8+比值均升高，與治療前和治療后第1、15天比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；兩組CD8+T細(xì)胞數(shù)目無(wú)顯著變化（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

組間同時(shí)期比較，治療后第15、30天，除CD8+T細(xì)胞外，RFA組其他外周血淋巴細(xì)胞亞群比例和CD4+/CD8+比值均顯著高于手術(shù)組（P均＜0.05）。見(jiàn)表2。

3.2 兩組治療前后紅細(xì)胞免疫功能比較 RFA組治療后第1天，RBC－C3bRR、RBC－TRR、RBC－ICR與治療前比較無(wú)顯著變化（P＞0.05）；治療后第15、30天后與術(shù)前、術(shù)后第1天比較，RBC－C3bRR、RBCTRR顯著增高，RBC－ICR顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），但第15、30天之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。手術(shù)治療后第1、15天后，RBC－C3bRR、RBC－TRR、RBC－ICR與治療前比較無(wú)顯著變化（P＞0.05）；手術(shù)30天后與治療前、治療第1、15天比較，RBC－C3bRR、RBC－TRR顯著升高（P均＜0.05），RBCICR顯著下降（P＜0.05）。同指標(biāo)兩組間比較，治療前差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療后，RFA組紅細(xì)胞免疫指標(biāo)與手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

3.3 兩組治療前后血清Th1型細(xì)胞因子含量比較RFA組血清Th1型細(xì)胞因子IL－2、IFN－γ、IFN－α含量治療15天后升高，與治療前和治療第1天后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），治療30天后進(jìn)一步升高，但與治療15天后比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。手術(shù)組治療第1、15天后，血清Th1型細(xì)胞因子IL－2、IFN－γ、TNF－α含量與治療前比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療30天后，Th1型細(xì)胞因子含量顯著升高，與手術(shù)前及術(shù)后第1、15天比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。兩組間治療15、30天IL－2、IFN－γ、TNF－α含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），見(jiàn)表4。

表2 兩組治療前后外周血淋巴細(xì)胞亞群比較（%±s）

表2 兩組治療前后外周血淋巴細(xì)胞亞群比較（%±s）

注：與治療前比較，△P＜0.05；與治療后第1天比較，*P＜0.05；與治療后第15天相比，▲P＜0.05；與手術(shù)組同期比較，□P＜0.05 RFA：超聲引導(dǎo)射頻消融術(shù)

組別RFA組手術(shù)組例數(shù)45 42治療前治療后第1天治療后第15天治療后第30天治療前治療后第1天治療后第15天治療后第30天CD3+T 59.20±8.61 58.52±7.98 71.42±7.07△*□72.39±7.53△*□58.21±9.28 55.8±8.88 60.70±6.44 67.57±5.64△*▲CD4+T 38.24±8.09 37.35±5.28 46.74±4.91△*□48.26±5.85△*□39.23±10.02 36.13±6.77 39.11±4.03 43.05±4.17△*▲CD8+T 21.49±5.91 21.15±5.79 19.01±5.44 18.77±5.30 21.60±13.21 22.3±6.26 21.59±4.36 20.35±3.85 CD4/CD8+ 1.66±0.88 1.69±0.75 2.42±0.56△*□2.61±0.71△*□1.85±0.85 1.62±0.27 1.82±0.33 2.15±0.66△*▲CD56+NK 9.75±6.97 10.56±4.07 19.59±4.89△*□21.18±5.24△*□8.37±5.42 6.48±3.55 9.49±4.05 16.53±5.27△*▲

4 討論

肝癌患者生存期短，生存質(zhì)量差。傳統(tǒng)治療手段如手術(shù)、化療、放療等都無(wú)法將患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞徹底清除，而只是解除或減輕患者的腫瘤負(fù)荷，治療后宿主體內(nèi)都?xì)埩粢欢ǖ哪[瘤細(xì)胞，而這些細(xì)胞能否被機(jī)體清除或形成新的病灶與患者免疫功能呈負(fù)相關(guān)[7－8]。若機(jī)體抗腫瘤免疫功能異常，腫瘤細(xì)胞可在免疫監(jiān)視失控下迅速增殖引起復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。因此，術(shù)后患者免疫功能狀態(tài)與預(yù)后有直接關(guān)系。然而傳統(tǒng)治療往往較大程度地干擾了患者的免疫功能[9]。

RFA治療肝癌療效肯定，作為一種熱凝固治療，其可以增強(qiáng)患者機(jī)體抗腫瘤免疫，有利于控制殘留腫瘤細(xì)胞的增殖，減少?gòu)?fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[10]。RFA使病灶發(fā)生凝固性壞死，清除免疫抑制因子的來(lái)源，解除宿主的免疫抑制狀態(tài)；治療創(chuàng)傷小，有利于機(jī)體免疫功能的恢復(fù)；熱療導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞表面抗原決定簇暴露或改變，增強(qiáng)腫瘤的抗原性，加上大量壞死腫瘤組織碎片入血，以及熱療刺激熱休克蛋白和炎癥反應(yīng)產(chǎn)生等原因，從而加強(qiáng)刺激機(jī)體的免疫反應(yīng)[11]。

研究表明，肝細(xì)胞癌患者細(xì)胞免疫功能低下，處于免疫抑制狀態(tài)，表現(xiàn)為外周血各淋巴細(xì)胞亞群數(shù)目的異常，即機(jī)體CD3+、CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞和CD4+/CD8+比值明顯降低，CD8+T細(xì)胞升高。T細(xì)胞亞群的變化均與肝細(xì)胞癌的惡性程度有關(guān)。CD4+T細(xì)胞具有輔助和誘導(dǎo)功能，是免疫應(yīng)答的主要反應(yīng)細(xì)胞；CD8+T是主要的效應(yīng)細(xì)胞，但部分CD8+T細(xì)胞具有與CD4+T細(xì)胞相反的作用，可使腫瘤逃逸機(jī)體的免疫監(jiān)視；CD4+/CD8+比值可直接反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)；而NK細(xì)胞在清除循環(huán)系統(tǒng)中的腫瘤細(xì)胞，防止血行播散中有著重要作用。因此，通過(guò)測(cè)定這些淋巴細(xì)胞亞群數(shù)目可較好地反映腫瘤患者免疫狀態(tài)。文獻(xiàn)[12]報(bào)道，肝癌患者行RFA術(shù)后2周，血清CD4+水平和CD4+/CD8+比值較術(shù)前明顯升高，而RBC－ICR水平明顯降低，RBC－C3bRR、RBCTRR顯著升高[13]。Vanagas等[14]研究發(fā)現(xiàn)，HCC患者RFA術(shù)后7、14天，患者外周血CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+較治療前明顯升高。上述文獻(xiàn)結(jié)果表明，RFA后患者免疫功能有一定的改善，但這些研究結(jié)果均為2周內(nèi)變化。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RFA治療第15天后，CD3+、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)目，以及CD4+/CD8+比值即較術(shù)前顯著升高（P＜0.05）；治療第30天后，這些指標(biāo)繼續(xù)升高。而外科手術(shù)治療第30天后這些指標(biāo)較術(shù)前才有顯著升高（P＜0.05）。兩組CD8+T細(xì)胞數(shù)目較術(shù)前均有所下降，但并不顯著（P＞0.05）。本研究結(jié)果說(shuō)明，RFA治療后機(jī)體抗腫瘤免疫功能短時(shí)間內(nèi)有明顯改善，而手術(shù)則改善緩慢。同時(shí)顯示治療第15、30天后，RFA組患者的CD3+、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)目，CD4+/CD8+比值均顯著高于手術(shù)組，說(shuō)明RFA治療后患者免疫功能維持于較高水平。

表3 兩組治療前后紅細(xì)胞免疫功能比較（%，±s）

表3 兩組治療前后紅細(xì)胞免疫功能比較（%，±s）

注：與治療前比較，△P＜0.05；與治療后第1天比較，*P＜0.05；與治療后第15天比較，▲P＜0.05；與同期手術(shù)組比較，□P＜0.05 RFA：超聲引導(dǎo)射頻消融術(shù)

組別RFA組手術(shù)組例數(shù)45 42治療前治療后第1天治療后第15天治療后第30天治療前治療后第1天治療后第15天治療后第30天RBC－C3bRR 9.23±2.41 10.05±2.09 20.34±6.46△*□24.15±6.18△*□9.52±2.49 10.58±2.31 12.70±4.12 17.57±5.37△*▲RBC－TRR 18.02±2.15 17.35±2.68 25.13±3.59△*□27.14±4.65△*□19.42±2.17 18.50±2.79 18.61±3.63 23.60±3.07△*▲RBC－ICR 15.46±3.93 16.56±4.21 8.15±3.58△*□4.21±4.64△*□14.43±4.12 16.23±2.20 12.35±4.43 9.53±4.08△*▲

表4 兩組治療前后Th1型細(xì)胞因子含量比較（pg/mL，±s）

表4 兩組治療前后Th1型細(xì)胞因子含量比較（pg/mL，±s）

注：與治療前比較，△P＜0.05；與治療后第1天比較，*P＜0.05；與治療后第15天比較，▲P＜0.05；與同期手術(shù)組比較，□P＜0.05 RFA：超聲引導(dǎo)射頻消融術(shù)

組別RFA組手術(shù)組例數(shù)45 42治療前治療后第1天治療后第15天治療后第30天治療前治療后第1天治療后第15天治療后第30天IL－2 87.12±10.14 90.15±2.09 98.34±9.82△*□102.25±12.08△*□89.10±8.49 85.15±7.03 87.70±10.02 95.15±9.73△*▲IFN－γ 38.36±7.36 40.65±8.81 55.36±6.49△*□58.38±7.53△*□39.84±6.93 35.05±7.67 42.16±9.25 51.60±11.30△*▲TNF－α 65.12±8.19 63.15±6.51 79.48±8.15△*□80.21±5.16△*□64.14±9.37 66.32±8.72 68.35±8.74 70.55±7.60△*▲

在抗腫瘤細(xì)胞免疫反應(yīng)中，CD4+T細(xì)胞處于核心位置，主要分泌Th1型細(xì)胞因子。其中Th1型細(xì)胞因子IL－2是T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可活化T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞并誘量T細(xì)胞分泌IFN－γ，TNF－α等細(xì)胞因子；刺激NK細(xì)胞增殖，促進(jìn)NK細(xì)胞分泌IFN－γ；誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞和自然殺傷T細(xì)胞的產(chǎn)生，并增強(qiáng)其腫瘤殺傷活性。本研究結(jié)果顯示，RFA治療15天后肝癌患者外周血血清IL－2、IFN－γ、TNF－α濃度顯著升高（P＜0.05），30天后繼續(xù)升高。雖然手術(shù)治療30天后Th1型細(xì)胞因子濃度顯著升高（P＜0.05），但顯著低于同期RFA組（P＜0.05）。說(shuō)明RFA滅活肝癌組織后較手術(shù)治療更能激活免疫細(xì)胞、促進(jìn)Th1型細(xì)胞因子分泌，可產(chǎn)生較為明顯的Th1型免疫應(yīng)答，顯著提高患者機(jī)體的抗肝癌免疫功能。

腫瘤產(chǎn)生的大量抗原與血中抗體形成的循環(huán)免疫復(fù)合物，被認(rèn)為是造成腫瘤免疫抑制的因素之一，而人體清除免疫復(fù)合物主要靠紅細(xì)胞完成。有關(guān)臨床研究提示，腫瘤是否發(fā)生轉(zhuǎn)移與紅細(xì)胞數(shù)量關(guān)系不大，而與其免疫功能高低密切相關(guān)[15]。本研究中RFA治療第15天后RBC－ICR較治療前顯著下降（P＜0.05），RBC－C3bRR、RBC－TRR顯著升高（P＜0.05），說(shuō)明黏附在紅細(xì)胞上的免疫復(fù)合物降低及CR1活性增高，導(dǎo)致紅細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的清除能力增強(qiáng)。而手術(shù)治療第30天后患者紅細(xì)胞免疫指標(biāo)才有顯著改善，且顯著低于同期RFA治療組（P＜0.05）。

總之，RFA治療可顯著改善肝癌患者機(jī)體的淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞免疫功能，提高機(jī)體免疫功能，從而對(duì)肝癌的治療效果產(chǎn)生有益的影響。雖然手術(shù)治療也可改善肝癌患者免疫功能，但我們認(rèn)為手術(shù)治療僅打破患者免疫耐受，無(wú)助于顯著提高患者抗腫瘤免疫功能。

［1］樊嘉，王征.肝癌外科治療的進(jìn)展［J］.實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2011，8（1）：16－19.

［2］彭振維，徐立，陳敏山，等.原位射頻消融與手術(shù)治療小肝癌對(duì)比研究［J］.中國(guó)實(shí)用外科雜志，2009，28（8）：633－636.

［3］Yang JD，Nakamura I，Roberts LR.The tumor microenvironment in hepatocellular carcinoma：current status and therapeutic targets.In：Seminars in cancer biology［J］.Elsevier，2011（16）：35－43.

［4］杜清華，李霄，王振東，等.肝癌射頻消融與手術(shù)切除對(duì)機(jī)體抗腫瘤免疫狀態(tài)的影響［J］.安徽醫(yī)藥，2010，14（11）：1317－1319.

［5］Lau WY，Lai EC.The current role of radiofrequency ablation in the management of hepatocellular carcinoma：a systematic review［J］.Annals of surgery，2009，249（1）：20－25.

［6］郭峰，李承邰，趙中平，等.正常人紅細(xì)胞免疫功能的初步研究［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1982，3（6）：188－189.

［7］覃英容，林源，莫顯偉，等.原發(fā)性肝癌患者手術(shù)前后免疫功能狀態(tài)的研究進(jìn)展［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2012，33（8）：1670－1671.

［8］莫顯偉，林源.原發(fā)性肝癌手術(shù)患者的免疫狀態(tài)［J］.中國(guó)癌癥防治雜志，2009，1（3）：299－300.

［9］Fridman WH，Pagès F，Sautes－Friaman C，et al.The immune contexture in human tumours：impact on clinical outcome［J］.Nature Reviews Cancer，2012，12（4）：298－306.

［1 0］Liu GJ，Moriyasu F，Hirokawa T，et al.Expression of heat shock protein 70 in rabbit liver after contrast－enhanced ultrasound and radiofrequency ablation［J］.Ultrasound in medicine&biology，2010，36（1）：78－85.

［1 1］張旸，曹穎平，楊升，等.原發(fā)性肝癌患者手術(shù)前后Th1類(lèi)細(xì)胞因子的水平變化［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2007，29（7）：581－583.

［1 2］臺(tái)桂香.腫瘤免疫治療的研究進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì)［J］.中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2009，16（5）：427－430.

［1 3］莫世發(fā)，賈乾斌.細(xì)胞免疫功能變化與肝癌的關(guān)系研究進(jìn)展［J］.中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2012，19（4）：456－458.

［1 4］Vanagas T，Gulbinas A，Pundzius J，et al.Radiofrequency ablation of liver tumors（I）：biological background［J］.Medicina（Kaunas），2010，46（1）：13－17.

［1 5］馬宏偉，鄭世民，趙良友，等.紅細(xì)胞免疫研究進(jìn)展［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2009，45（4）：79－80.

（收稿：2014－08－03 修回：2014－10－27）

Effects of Radio Frequency Ablation on Immune Function of Hepatic Carcinoma Patients

YAN Jingbin1,YAN Xiumei2,CHEN Bin3,SUN Hongwei3. 1 Department of Ultrasound,Wenzhou Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine,Wenzhou(325000),China;2 Department of Pediatrics,the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou(325000),China;3 Department of Ultrasound,the first Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou(325000),China.

Objective To explore the effect of radio frequency ablation（RFA）on post－operative immune function of hepatic carcinoma patients.Methods Eighty seven patients with hepatic carcinoma were randomly divided into two groups:RFA group（n=45）and surgical resection group（n=42）.The percentage of CD3+T cells,CD4+T cells,CD8+T cells and CD56+NK cells and the ratio of CD4+/CD8+T cells in peripheral blood of patients were determined by flow cytometry analysis.Red blood cell C3b receptor rosette（RBC－C3bRR）,tumor red blood cell rosette（RBC－TRR）and red blood cell immune complex rosette（RBC－ICR）were identified to detect the immune function of red blood cells.Thl type cytokines（IL－2,IFN－γ,TNF－α）in the sera were analyzed by ELISA assay. Results Compared to prior－treatment,CD3+,CD4+T cells and NK cells and CD4+/CD8+ratio increased significantly on D15 after RFA（all P＜0.05）and pushed up further on D30.However,they did not increase significantly on D15 after treatment in surgical group（all P＞0.05）and elevated to a significantly different level on D30 after treatment（all P＜0.05）.The percentage of CD8+T cells in both groups decreased on D30 after treatment,but not significantly（all P＞0.05）.On D15 after RFA,RBC－ICR decreased significantly and RBC－C3bRR,RBC－TRR in－creased significantly（all P＜0.05）.However,these immunological indicators in surgical group improved significantly on D30 after treatment（all P＜0.05）,and there are significant difference in them between RFA group and surgical group（all P＜0.05）.Additionally,IL－2,IFN－γ,and TNF－α in the sera raised significantly on D15 after RFA treatment（all P＜0.05）,and they kept on increasing on D30 after RFA.The serum level of these Thl type cytokines increased significantly on D30 after surgical resection（all P＜0.05）,but lower than that in RFA group（all P＜0.05）. Conclusion Compared with surgical treatment,RFA may further improve immune function of lymphocytes and red blood cells of hepatocellular carcinoma patients,promote secretion of Th1 type cytokines,which may benefit the treatment of hepatocellular carcinoma.

Hepatic carcinoma;Radio frequency ablation;Surgical resection;Immune function; Th1 type cytokines

浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.LY12H03005）

1浙江省溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院超聲科（溫州 325000）；2溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院兒科（溫州 325000）；3溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院超聲科（陳斌）、肝膽外科（孫洪偉）（溫州 325000）

閆景彬，Tel：0577－88913947；E－mail：48183846@qq.com