祝 輝，羅自力，杜建紅，何德云，鐘元高，申冬妮，李 佳

氯霉素氫化可的松滴耳液是常用醫(yī)院制劑，收載于《中國醫(yī)院制劑規(guī)范》西藥制劑（第二版）[1]。其主要成分為氯霉素和氫化可的松，具有抗炎、抗過敏作用，臨床用于中耳炎的治療?，F(xiàn)行檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法測定制劑中氯霉素含量，卻未對氫化可的松含量作具體規(guī)定。文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC法同時(shí)測定氯霉素氫化可的松滴耳液中兩組分含量[2-4]，所選用的流動(dòng)相為不同比例甲醇-水，氯霉素和氫化可的松在5 min內(nèi)先后出峰，特別是氯霉素出峰時(shí)間約3 min，易受溶劑峰干擾。本研究參考《中國藥典》2010版（二部）中氯霉素和氫化可的松原料藥及其制劑含量測定方法[5-6]，以離子對試劑——庚烷磺酸鈉為流動(dòng)相調(diào)節(jié)劑，建立了同時(shí)檢測氯霉素和氫化可的松含量的HPLC方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，為制劑標(biāo)準(zhǔn)提高提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（Agilent1100，美國），優(yōu)普系列超純水器（UPT-Ⅰ，成都超純科技有限公司），超聲波清洗器（KQ5200E，昆山市超聲儀器有限公司），電子分析天平（BT25S，賽多利斯，德國）。

1.2 試藥 氯霉素對照品（130555-200602，中國藥品生物制品檢定所，純度99.4%），氫化可的松對照品（100152-200602，中國藥品生物制品檢定所，純度：100%），庚烷磺酸鈉（20130316，成都市科龍化工試劑廠），二甲基甲酰胺（20110309，重慶中渝化工試劑廠），冰醋酸（20130606，成都市科龍化工試劑廠），乙腈（A998-4，F(xiàn)isher公司），超純水（自制），氯霉素氫化可的松滴耳液（批號：130820A、130911A、131025A，某醫(yī)院自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 混合對照品溶液制備 精密稱取氯霉素對照品 10.20 mg、氫化可的松對照品 10.11 mg，分別置10、50 ml量瓶中，加水溶解，稀釋并定容至刻度，搖勻，作為對照品儲備液A、B；再分別精密量取儲備液A 1 ml，儲備液 B 1 ml置10 ml量瓶中，加水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液制備 精密量取氯霉素氫化可的松滴耳液1 ml置50 ml量瓶中，加水稀釋，定容至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 陰性對照溶液制備 按照處方工藝制備陰性對照，參照“2.1.2”項(xiàng)下制備成溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 色譜柱：WondaSil色譜柱（C18-WR；4.6 mm×250 mm；5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%庚烷磺酸鈉溶液（取0.1%的庚烷磺酸鈉溶液500 ml與二甲基甲酰胺5 ml、冰醋酸0.5 ml混勻，超聲脫氣 5 min，即得）（26∶74），檢測波長 ：0～16 min 為 278 nm，16～20 min 為 245 nm，20～25 min 為 278 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：20 μl。系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：陰性對照在氯霉素和氫化可的松出峰處無干擾（圖1）。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下對照品溶液 10、15、20、25、30、40 μl，分別注入 HPLC 儀，記錄出峰時(shí)間與峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（X，μg/ml）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得氯霉素線性回歸方程式為 Y=27.021X+9.71，r=1 （n=6）；氫化可的松線性回歸方程式為 Y=40.867X-7.53，r=0.9999（n=6）。 結(jié)果表明：氯霉素在 4.08～204 μg/ml，氫化可的松在 10.11～40.44 μg/ml范圍內(nèi)，與峰面積均呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號為 130820A樣品 6份，按“2.1.2”供試品溶液制備方法得供試品溶液，照“2.2”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)行含量測定，記錄峰面積。結(jié)果：氯霉素、氫化可的松峰面積RSD分別為0.5%、0.6%（n=6），表明該方法重復(fù)性試驗(yàn)好。

圖1 高效液相色譜

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下對照品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件依次連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20 μl，記錄峰面積，結(jié)果：氯霉素、氫化可的松峰面積的RSD分別為0.5%、0.7%（n=5），表明該方法精密度試驗(yàn)好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號為130820A樣品稀釋溶液， 室溫下存放，1 d 內(nèi)依次在第 2、5、8、12、16、20、24 h，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果：氯霉素、氫化可的松峰面積的RSD分別為0.9%、1.0%（n=7），表明該樣品在 24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收試驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品9份（批號：130820A，含氯霉素和氫化可的松分別為2.505 mg/ml、0.512 mg/ml）， 每 份 1 ml， 按 80% 、100%、120%比例，分別加入氯霉素和氫化可的松對照品適量，照“2.1.2”供試品溶液制備方法稀釋至刻度，搖勻，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測定 將130820A、130911A、1310 25A 3個(gè)批次樣品按照“2.1.2”方法處理，每個(gè)批次平行取2份，制備供試品溶液；再精密稱取對照品2份，照“2.1.1”方法處理制備對照品溶液，每份供試品溶液及對照品溶液按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件方法依次進(jìn)樣2次，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品百分含量，結(jié)果見表2。

表2 氯霉素氫化可的松滴耳液的含量測定結(jié)果（mg/mI）

3 討論

氯霉素氫化可的松滴耳液來源于醫(yī)院制劑，主要成分為氯霉素和氫化可的松，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度計(jì)法測定氯霉素含量，并未對氫化可的松含量做具體規(guī)定，不能對該藥品進(jìn)行全面質(zhì)量監(jiān)控，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有一定局限性。已有文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC方法同時(shí)檢測氯霉素和氫化可的松含量，但文獻(xiàn)方法中兩組分出峰時(shí)間短，特別是氯霉素出峰時(shí)間過快（約3 min），存在溶劑峰干擾。本研究選擇庚烷磺酸鈉作為離子對調(diào)節(jié)劑，有效提高了兩組分保留時(shí)間，出峰時(shí)間優(yōu)化為15 min左右，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，新建HPLC方法適合用于同時(shí)檢測氯霉素和氫化可的松含量。

檢測波長的選擇：以流動(dòng)相為空白，在200～400 nm波長范圍內(nèi)，掃描氯霉素和氫化可的松紫外吸收，結(jié)果顯示氯霉素、氫化可的松分別在278 nm、245 nm有最大吸收峰。因此，本研究設(shè)定初始檢測波長278 nm，待氯霉素出峰之后，變換檢測波長為245 nm，有效提高了對氯霉素和氫化可的松的檢測靈敏度。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.中國醫(yī)院制劑規(guī)范（西藥制劑第二版）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1995：158-159.

[2]李小燕.HPLC法測定氯霉素氫化可的松滴耳液中兩組分的含量[J].色譜,1998,16（1）:71-73.

[3]陳豪，劉芳群，曾建國,等.HPLC法測定氯霉素氫化可的松滴耳液中兩組分的含量[J].中國藥師，2010,4（13）：585-586.

[4]金克林.高效液相色譜法測定氯霉素氫化可的松滴耳液中氯霉素和氫化可的松的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2011,6（20）：507-508.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1029-1032.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：550-552.