李為黨，謝秋利，李慧娜，李慶海△

(1.河南中醫(yī)學(xué)院，鄭州 450008;2.河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院，鄭州 450008)

參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠TNF-α、IL-6的影響?

李為黨1，謝秋利2，李慧娜2，李慶海2△

(1.河南中醫(yī)學(xué)院，鄭州 450008;2.河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院，鄭州 450008)

目的:觀察參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠TNF-α、IL-6的影響。方法:取健康Wistar大鼠60只，隨機(jī)選出8只作為正常對照組，52只大鼠采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支復(fù)制充血性心力衰竭大鼠動(dòng)物模型，4周后做心臟彩色多普勒超聲評價(jià)，EF≤50%為合格。按EF≤50%入選標(biāo)準(zhǔn)分為3組，即西藥治療組(培哚普利0.1 mg/kg·d;美托洛爾0.5 mg/kg·d)、中藥治療組(參麥寧心合劑3 mg/kg·d)、模型對照組(生理鹽水1 ml/kg·d)給予灌胃2周。于最后1次灌胃后處死動(dòng)物取血，測定大鼠血清中TNF-a、IL-6的水平。結(jié)果:與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清TNF-α、IL-6水平顯著增高，LVEF、SV均顯著降低。中藥治療組和西藥對照組血清TNF-α、IL-6水平均較模型對照組顯著降低，LVEF、SV明顯提高。結(jié)論:參麥寧心合劑可明顯提高充血性心力衰竭大鼠的左室射血分?jǐn)?shù)和每搏輸出量，可明顯降低充血性心力衰竭大鼠血清TNF-a、IL-6水平。

參麥寧心合劑;充血性心力衰竭;腫瘤壞死因子-α;白介素-6

充血性心力衰竭系指在有適量靜脈血回流的情況下，由于心臟收縮和(或)舒張功能障礙，心排血量不足以維持組織代謝需要的一種病理狀態(tài)。李慶海教授結(jié)合幾十年臨床實(shí)踐采用自擬方參麥寧心合劑治療心力衰竭取得良好的效果。本實(shí)驗(yàn)通過研究參麥寧心合劑對心衰大鼠TNF-α、IL-6的影響，進(jìn)一步闡述其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

10～12周齡SPF級健康雄性Wistar大白鼠60只，體質(zhì)量180～200 g，由山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)提供(生產(chǎn)許可證號scxk魯20080002)。動(dòng)物飼料及墊料由鄭州大學(xué)動(dòng)物中心生產(chǎn)，河南省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一消毒后提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

參麥寧心合劑由安陽市中醫(yī)院提供(250 ml/瓶，批號z05050137);培哚普利片(規(guī)格4 mg，批號H20534053)天津;酒石酸美托洛爾，規(guī)格25 mg(批號H20065355)，石家莊以嶺藥業(yè)公司生產(chǎn);青霉素(80萬單位，批號H13020657)，華北制藥有限公司生產(chǎn);水合氯醛(批號20100614)，鄭州派尼有限公司生產(chǎn);利多卡因(5 ml∶0.1 g，H31021072);呋塞米注射液(規(guī)格2 ml∶20 mg，H12020527)，湖北天藥藥業(yè)股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

試劑盒由鄭州金城檢驗(yàn)中心提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器

小型動(dòng)物呼吸機(jī)(型號DW3000-B);低溫高速離心機(jī)(SIGMA3-18K GERMANY SIGMA);高壓蒸汽滅菌鍋TMQ-CV，山東新華;心臟彩超機(jī):ACUSON Cypress，美國 Florida;B超耦合劑:YY0299，天津;精密天平:FAII04，上海精科;微波爐:G80w23ysl-V9.格蘭仕;手術(shù)針、線、剪刀、鑷子、止血鉗均由河南省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)

大鼠常規(guī)、分籠飼養(yǎng)，籠中墊約2～3 cm的玉米芯墊料，每籠4只。飲用水取自小動(dòng)物消毒機(jī)，采用光照12 h、黑夜12 h、溫度24±2℃、濕度40% ～60%。采用IVO通風(fēng)設(shè)備，每2 d更換1次墊料，水與飼料由大鼠隨意攝取，保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔、安靜，避免噪聲及其他干擾。

2.2 模型復(fù)制方法

方法［1］，手術(shù)當(dāng)天稱重后，利用3.5%水合氯醛按大鼠體質(zhì)量0.8 ml/100 g腹腔注射進(jìn)行麻醉。待大鼠麻醉平穩(wěn)后置于手術(shù)臺，然后將心前區(qū)手術(shù)部位的體毛剪干凈。隨后用14 g的穿刺針套管作為氣管導(dǎo)管插入氣管，將氣管導(dǎo)管和呼吸機(jī)相連，調(diào)整呼吸機(jī)工作狀態(tài)，在無菌操作下，于胸骨左側(cè)第3、4肋間橫向切開皮膚長約1.5 cm的切口，鈍性分離軟組織并暴露心臟后，將呼吸機(jī)放置工作狀態(tài)，潮氣量為14 ml/kg，呼吸頻率為60～65次/ min開始機(jī)械通氣。待機(jī)械通氣順暢后用碘伏消毒皮膚，在左側(cè)第4肋間剪開皮膚，逐層分離肌肉，利用開胸器分開肋間隙，打開胸腔，暴露心臟。用酒精棉簽擋住肺葉，并用鑷子撕開心包膜，清楚暴露左冠狀動(dòng)脈，心電示波器Ⅰ導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)ST段抬高，術(shù)后給予大鼠青霉素40 μ/只，同時(shí)給予呋塞米、利多卡因各1ml，腹腔注射。維持1周每天1次，以抗感染。術(shù)后4周作心臟無創(chuàng)性心功能檢測(EF≤50%)，入選30只。

2.3 分組及給藥方法

EF≤50%的大鼠入選后按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、中藥治療組、西藥治療組3組，另設(shè)空白對照組8只。

2.4 給藥方法

中藥治療組給予參麥寧心合劑3.0 mg/kg·d，基礎(chǔ)西藥組給予培哚普利0.1 mg/kg·d、美托洛爾0.5 mg/kg·d。模型對照組給予生理鹽水1 ml/kg·d劑量灌胃，每天灌胃1次，持續(xù)灌胃14 d。各組大鼠在實(shí)驗(yàn)期間均常規(guī)飼料、清潔水喂養(yǎng)。至灌胃結(jié)束，剩余大鼠總計(jì)38只。

2.5 3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉后，通過腹主動(dòng)脈采血。室溫靜置2 h，用離心機(jī)以2000轉(zhuǎn)/分離心，30 min，取血清，-70℃冰箱保存，備用。

3 觀察指標(biāo)及測定方法

3.1 一般基本觀察

觀察包括進(jìn)食、水量、體質(zhì)量、體溫、毛色、毛態(tài)、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、尿量以及排便情況等。

3.2 心電圖變化

各組大鼠利用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉后待大鼠麻醉后，置于檢查臺上，將探針分別插進(jìn)大鼠左、右上肢和左下肢的皮下，用生物信號采集、處理系統(tǒng)描記大鼠心電圖并觀察心率。

3.3 心功能測定方法

3.5 %水合氯醛0.8 ml/100 g腹腔淺麻醉后行超聲心動(dòng)圖測定，探頭頻率7.5～12.5 MHz，用二維超聲切面，選取標(biāo)準(zhǔn)左室乳頭肌短軸切面和左室長軸切面結(jié)合M型和多普勒超聲進(jìn)行檢查，微機(jī)自動(dòng)作出結(jié)果分析。

3.4 利用酶聯(lián)免疫吸附法測定大鼠血清腫瘤壞死因子(TNF-a)和白介素(IL-6)的水平。具體操作按說明書進(jìn)行。

3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物60只，造模52只，造模過程中死亡4只，4周后復(fù)查心臟彩超，經(jīng)檢測成功復(fù)制心衰模型30只，EF≤50%的隨機(jī)分為3組，每組10只。灌胃期間中藥治療組、西藥治療組及模型組各死亡2只共6只，至灌胃結(jié)束實(shí)際觀察到大鼠32只。

4.1 參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠LVEF、SV、HR的影響(見表1)

4.2 參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠血清TNF-α、IL-6的影響

5 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組比較模型組大鼠血清TNF-α、IL-6水平顯著升高(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組比較，西藥治療組以及中藥治療組大鼠血清 TNF-α、IL-6水平顯著降低(均 P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明參麥寧心合劑可有效降低心力衰竭大鼠血清TNF-α、IL-6濃度，增加心肌收縮力，抑制體內(nèi)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)被激活以及炎性因子的釋放，抑制心室重塑，保護(hù)心肌細(xì)胞。

表1 參麥寧心干預(yù)后充血性心力衰竭大鼠LVEF、SV、HR的情況

充血性心力衰竭屬于中醫(yī)學(xué)“心悸”、“喘病”、“痰飲”等范疇，乃正氣不足、病久所致心失所養(yǎng)、氣陰兩虛、心脈瘀阻而發(fā)病，治宜益氣養(yǎng)陰、化痰祛瘀之法。參麥寧心合劑主要藥物由人參、麥冬、五味子、玉竹、茯苓、葶藶子、車前子、當(dāng)歸、丹參、生龍牡、枳實(shí)、金銀花等組成，具有益氣養(yǎng)陰、活血利水之功效。方中人參、麥冬大補(bǔ)元?dú)狻B(yǎng)陰生津，為君藥;五味子、玉竹、云苓益氣健脾、養(yǎng)陰清心安神，為臣藥;葶藶子、車前子、桑白皮宣肺平喘、利水消腫;當(dāng)歸、丹參活血養(yǎng)血、化瘀行血;金銀花、黃連清解郁熱;生龍牡收斂固澀、鎮(zhèn)心安神;枳實(shí)破氣消積、調(diào)理氣機(jī)，共為佐使，共奏活血利水、益氣養(yǎng)陰、清郁除煩、邪去正安之效。諸藥合用養(yǎng)陰不助濕，利水不傷陰，補(bǔ)而不壅、苦而不燥。補(bǔ)氣養(yǎng)陰、活血利水則氣血充足、鼓動(dòng)有力、瘀散水行、郁熱自消、心安神暢，諸證悉除。現(xiàn)代藥理研究表明，人參總皂甙可以抑制血栓素A2的生成，通過抗氧自由基和抗脂質(zhì)過氧化作用而保護(hù)心肌細(xì)胞［2］。胡愛萍等［3］研究表明，丹參可明顯減少心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，提示丹參可對抗缺氧對心肌細(xì)胞的損傷。葶藶子的水提取物具有顯著強(qiáng)心和增加冠脈流量的作用，且不增加心肌耗氧量。枳實(shí)的有效成分可以加強(qiáng)心肌收縮力，減慢心率，增加心輸出量、冠脈流量和腎血流量等，此外還有明顯的抗血栓、抗血小板聚集、降低紅細(xì)胞聚集的作用。

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［3］胡愛萍，潘亞梁，葉治國.丹參對缺氧/復(fù)氧心肌的保護(hù)作用涉及百日咳毒素敏感的G蛋白［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2004，21(5):358.

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R285.5

:B

:1006-3250(2015)11-1396-02

2015-04-15

河南省科技廳基金項(xiàng)目(14207254)

△通訊作者:李慶海，Tel:13838396198，E-mail:lqh960918@ sina.com。