劉　平，孫　林（.江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學院，江西樟樹　3300；.安徽農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，合肥　30036）

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雞胚消化器官組織學發(fā)育過程觀察

劉平1，孫林2
（1.江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學院，江西樟樹331200；2.安徽農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，合肥230036）

摘要：通過對孵化1～8日齡的雞胚進行連續(xù)切片，HE染色，對雞胚消化器官胃、腸、肝臟、胰腺進行組織學連續(xù)性觀察，詳細描述雞胚消化器官組織發(fā)育過程。試驗結(jié)果表明，在4日齡雞胚消化器官胃、肝臟、胰腺均開始發(fā)育；在6日齡時腺胃和肌胃開始分化；至8日齡肝臟已有肝小管和肝小葉結(jié)構(gòu)，腺胃壁開始出現(xiàn)腺管，未出現(xiàn)腺泡。胃功能的發(fā)育完善較肝臟、胰腺、腸的發(fā)育晚，可能與雞胚早期主要消化吸收卵黃等脂類物質(zhì)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：雞胚；消化器官；組織學

現(xiàn)代家禽的高度集約化生產(chǎn)要求家禽具有繁殖力高、生長速度快、飼料利用率高等特點，因此對家禽自身生理特點的研究一直被人們所重視[1-2]。雞胚胎消化系統(tǒng)是胚胎發(fā)育過程中最早開始形成的器官之一，系統(tǒng)、詳細地了解消化器官的發(fā)生與發(fā)育過程，對家禽生理生化指標以及營養(yǎng)指標的確定和飼養(yǎng)管理等方面，都具有重要的理論和實踐意義。雖然雞胚胎發(fā)育的研究歷史較長，但詳細描寫雞胚發(fā)育特別是消化器官的發(fā)育的資料卻甚少，雞胚消化管發(fā)育的研究主要集中在早期各個胚層分化發(fā)育的研究或者某個或者器官的分化及組織特異性因子表達的研究。對雞胚某個器官或者組織發(fā)育進行研究（如胰臟、肝臟）以及對早期雞胚前腸、神經(jīng)嵴、內(nèi)胚層等分化進行研究，基本局限于解剖學資料和少量的雞胚免疫器官發(fā)育的研究[3-10]。本研究以雞的消化系統(tǒng)發(fā)生發(fā)育為主要研究對象，重點觀察胚胎發(fā)育各期中消化系統(tǒng)發(fā)生發(fā)育的組織學變化，為動物胚胎學與動物發(fā)育生物學理論進行補充和完善，也為新生雛雞的營養(yǎng)指標和飼養(yǎng)管理指標的確定提供必要的依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗材料

羅曼雞受精卵，購自于杭州某雞場。

1.2試驗設備

電子天平（Acculab ALC-210.2）、實體顯微鏡（Leica zoom 2000）、正置三目顯微鏡（Leica DMLS2）、電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海森信DRP-9162型）、輪轉(zhuǎn)式切片機（浙江金華科迪KD1508）、電熱恒溫水浴鍋（山東龍口市先科）。

1.3試驗設計

孵化于1～8日齡的羅曼雞胚蛋中，每天隨機抽取各日齡雞胚3枚，取出胚盤進行常規(guī)組織學染色和檢查。

1.4試驗方法

選取的各日齡胚蛋摘取胚盤，Bouin固定液固定，常規(guī)石蠟制片，以厚度5 μm連續(xù)切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡篩選檢查和照相[11]。

2　試驗結(jié)果

1日齡胚胎圖見圖1。

圖1　 1日齡三胚層　160×

由圖1可見，胚胎已經(jīng)有了三胚層的分化，中胚層細胞（原條）尚未伸展形成頭突以及發(fā)育成脊索。雞胚消化管的基本成分和大消化腺都將由內(nèi)胚層形成，口腔和泄殖腔將由內(nèi)胚層和外胚層共同形成，雞胚內(nèi)胚層與卵黃之間的空腔即為原始的消化道，此后胚胎進入器官分化階段。

2日齡胚胎圖見圖2。

由圖2可見，2日齡胚胎原條已完成，并形成原溝、原窩和原結(jié)。當頭形成時，內(nèi)胚層隨著頭部的突出而伸凹入其中，形成一個袋狀管腔，這管腔就是前消化道（前腸），此腔為扁平狀腔道，以內(nèi)胚層細胞作為消化道的壁，消化道底部直接為卵黃物質(zhì)，管腔通向卵黃囊的口叫前腸門。前腸將發(fā)育成口腔、食管、腺胃、肌胃、肝臟和胰腺。觀察雞胚的組織切片可見此時雞胚已經(jīng)形成了脊索和神經(jīng)管，在脊索和神經(jīng)管下方內(nèi)胚層向內(nèi)凹陷已形成袋狀管腔即前腸，從本試驗所取2日齡雞胚切片中未見食管和胃的分化。

圖2　脊索、神經(jīng)管、前腸　160×

3日齡胚胎圖見圖3。

圖3　 3日齡食管　400×

由圖3可見，先前與咽對應的外胚層向下凹陷與內(nèi)胚層形成口板破裂，前腸與外界相通。尾褶出現(xiàn)，形成后腸，使消化道形成了前、中、后3個區(qū)。由咽部分化出食管的原始構(gòu)造，此時食管黏膜上皮較厚，由復層柱狀細胞構(gòu)成，胞質(zhì)嗜堿性較強，細胞較大，核大而圓，染色較深。沒有發(fā)現(xiàn)食管腺的分化，黏膜上皮未發(fā)生角化。中間為薄層固有層，外層為一層很薄的間充質(zhì)細胞構(gòu)成外膜。在本期胚胎中未觀察到肝臟和胰腺的組織結(jié)構(gòu)。

4日齡胚胎圖見圖4～6。

由圖4可見，此時雞胚前消化道的末端膨大形成胃的前身，但胃壁還未分化出黏膜、肌層和漿膜等構(gòu)造，胃壁表面平整且均為復層立方或復層矮柱狀上皮，與食管壁結(jié)構(gòu)無差異，尚無腺胃和肌胃的分化。接近胃后方與兩條臍腸系膜靜脈會合，與附近的消化管壁形成一對小肝盲囊，隨后合并成一條肝突。

由圖5可見，本試驗所取的4日齡雞胚的肝已經(jīng)具有一定形態(tài)。由圖6可見，此時肝由巨大的肝竇和大量的肝細胞組成，肝細胞呈多邊形，核大而圓，數(shù)量眾多，排列成肝板，肝板縱橫交錯，未形成肝小葉結(jié)構(gòu)，肝竇空隙較大，但肝竇中沒有成血細胞。

5日齡胚胎組織圖見圖7、8。

圖4　 4日齡胃　400×

圖5　 4日齡肝臟　160×

圖6　 4日齡肝臟　400×

圖7　 5日齡肝臟　400×

圖8　 5日齡胰腺　160×

由圖7可見，消化道位于體腔的近正中，整個消化道除中段稍膨大外，顯微結(jié)構(gòu)基本一致。消化道的表面仍為復層立方或復層矮柱狀上皮細胞，上皮的游離面稍有起伏，上皮外為間充質(zhì)。肝臟由寬大、血竇和血竇之間的肝細胞及不同時期的成血細胞組成。

由圖8可見，肝細胞呈多邊形，圓核，胞質(zhì)嗜酸性染色。肝竇變大，內(nèi)充滿成血細胞。成血細胞大多為圓形，細胞較小，胞質(zhì)染色呈嗜堿性、嫌色、嗜酸性不等。胰腺位于胃與小腸之間的系膜中，以兩條鄰近的導管開口于小腸，導管的遠端分出許多小的腺管芽。腺細胞數(shù)量較少，分布于大量上皮細胞中，還未出現(xiàn)腺泡與胰島的分化。

6日齡胚胎組織圖見圖9～11。

由圖9可見，孵育約第6天初，食管腔消失，肌胃與腺胃開始分化。腺胃開始呈現(xiàn)腺細胞的微細結(jié)構(gòu)，胃黏膜表面開始出現(xiàn)一些凹陷，將發(fā)育成胃小凹，胃腺將開口于此，但胃壁固有層仍然為復層立方或復層矮柱狀細胞，未出現(xiàn)淺層單管腺和深層復管腺的結(jié)構(gòu)。由圖10可見，肌胃除肌層和外膜變厚外未有其他變化。肝臟發(fā)育迅速，肝細胞比成血細胞體積大，但仍未出現(xiàn)肝小葉的結(jié)構(gòu)。消化道腸段部分有了一些變化，固有層細胞增多，固有層變厚，導致腸壁變厚，并且在黏膜層內(nèi)側(cè)出現(xiàn)一些腸絨毛狀突起。由圖11可見，從胃到卵黃柄以及卵苗柄后部1/3的區(qū)段發(fā)育成為小腸。后消化道則發(fā)育成為大腸。在胃以后小腸的第一個彎曲所形成的腸將發(fā)育為十二指腸；其后部發(fā)育為空腸和回腸，空腸腸壁較厚，腸腔較窄，黏膜層很薄，固有層卻很厚，黏膜下層厚度比固有層稍薄，在腸壁外側(cè)可見發(fā)達的環(huán)行肌和縱行肌。在小腸與大腸的分界處稍微膨大，將在該處萌生出一對盲腸。

圖9　 6日齡胃　160×

圖10　 6日齡小腸臟　400×

圖11　 6日齡小腸　400×

7日齡胚胎組織圖見圖12～15。

由圖12可見，此時肝臟已是腹腔內(nèi)最大的器官。血管在肝細胞索之間形成竇狀隙，各個竇狀隙匯聚于中央靜脈，肝小管的結(jié)構(gòu)已經(jīng)十分顯著。腺胃與肌胃的分化更加顯著，腺胃的胃小凹進一步加深。由圖13可見，此時胃黏膜已經(jīng)變成單層立方上皮細胞，細胞略呈方形，細胞核大而圓，固有層開始變薄，黏膜下層變的比較發(fā)達。胃壁的外層是較為發(fā)達的肌層。由圖14可見，肌胃表面沒有形成胃小凹，黏膜層和固有層變薄，但肌層和漿膜進一步加厚，形成一個在消化道中較堅實的肌性器官。由圖15可見，小腸壁開始出現(xiàn)一些皺襞，黏膜層變薄成為由單層柱狀上皮細胞構(gòu)成，黏膜下層變的比較發(fā)達，在黏膜下層外有比較薄的一圈環(huán)行肌和縱行肌。腸絨毛發(fā)育不顯著，未出現(xiàn)腸腺的結(jié)構(gòu)。

圖12　 7日齡腺胃　160×

圖13　 7日齡腺胃　400×

圖14　 7日齡肌胃　400×

圖15　 7日齡小腸　400×

8日齡胚胎組織圖見圖16～18。

由圖16可見，消化道已能初步分出嗉囊段、腺胃、肌胃、小腸和大腸。肌胃與腺胃區(qū)分較為顯著。腺胃黏膜上皮為單層立方上皮，上皮表面凹凸不平，上皮的基底面下方有一層黏膜肌。部分黏膜上皮下陷到固有膜中形成一些大的腺管，未見到腺泡和腺管分支。由圖17可見，此圖為肌胃胃壁放大圖，可以看出此時肌胃管徑很大，管腔狹小，肌層增厚，膜質(zhì)部發(fā)達，黏膜表面有一層嗜堿性染色的稠密物，黏膜上皮為柱狀上皮，黏膜層較薄，肌層與漿膜發(fā)達，胃壁游離面與基底面平整。由圖18可見，此時肝細胞索形成的竇狀隙匯聚于中央靜脈，肝小管和肝小葉都比較顯著。十二指腸管腔內(nèi)可見發(fā)達的縱行皺襞，黏膜上皮為復層立方上皮，核大而圓。上皮外面依次是含有大量細胞的間充質(zhì)、原始肌層和細胞稀少的間充質(zhì)。

圖16　 8日齡腺胃　400×

圖17　 8日齡肌胃　400×

圖18　 8日齡肝臟　400×

3　討論

試驗結(jié)果表明，雞胚的消化器官，如胃、肝臟、胰腺雖然在3～4日齡時幾乎同時發(fā)育，但胃分化為腺胃和肌胃，8日齡剛出現(xiàn)腺管，其功能的完善需要等到12日齡。而腸、胰腺、肝臟結(jié)構(gòu)功能的完善約在8日齡基本完成。這可能是由于雞胚初期的發(fā)育主要依靠吸收卵黃物質(zhì)來進行。卵黃物質(zhì)含量中絕大多是脂類，碳水化合物很少[12]。這與消化器官中肝臟、小腸是脂肪的主要消化場所相吻合。

腺胃與肌胃早在6日齡時就開始出現(xiàn)分化，腺胃的黏膜層開始變薄，出現(xiàn)胃小凹并開始加深，腺胃的黏膜下層變的發(fā)達，固有膜出現(xiàn)大腺管；肌胃黏膜沒有出現(xiàn)胃小凹，黏膜層變薄，但肌層和漿膜變的很厚，向肌性器官發(fā)育。腺胃黏膜深層的復管狀腺比腺胃黏膜淺層和肌胃黏膜中的單管狀腺結(jié)構(gòu)復雜，肌胃的肌層比腺胃和腸管的肌層發(fā)達。由此可見，器官中結(jié)構(gòu)較復雜或較發(fā)達部分需要較長的發(fā)育時間，往往發(fā)育較早；復腺的發(fā)育中先有腺管，后有腺管分支和腺泡。與哺乳動物消化器官的胚胎發(fā)育相比，雖然最終形態(tài)和發(fā)育的時間表不同，但在這兩點上是一致的[13-14]。

雞胚中肝臟在4日齡初步分化，主要由大量的肝細胞和巨大的肝竇組成，肝細胞數(shù)量眾多，排列成肝板，成血細胞幾乎沒有。5日齡時，肝竇隙出現(xiàn)了不同時期的血細胞，還沒有肝小葉結(jié)構(gòu)。7～8日齡時，成血細胞大量減少，肝細胞成矮柱狀連成管狀索，肝小葉與肝小管結(jié)構(gòu)已經(jīng)形成?？梢姡u胚中肝臟的發(fā)育十分快速且顯著，可能與前期主要營養(yǎng)物質(zhì)來源于卵黃有關(guān)。

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Observation of Histological Development Process of Digestive Organs in Chicken Embryo

LIU Ping1, SUN Lin2
（1. College of Jiangxi Agricultural Engineering, Zhangshu 331200, Jiangxi China；2. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 23003, China）

Abstract:The microstructures of the muscular stomach, glandular stomach, intestines, liver and pancreas of chicken embryos from one day to eight day during the incubation period were examined successively by means of se?ries slice of chicken embryo and pigmentation by HE, compared with organs of chicking, and their morphagenesises were explored. The results showed that the development of stomach, liver and pancreas of chicken embryos began to form on day 4 post-hatching; the development of glandular stomach and muscular stomach began to differentiate on day 6 post-hatching; liver had hepatic lobule and hepatic tubule on day 8 post-hatching, the gland duct of the glan?dular stomach come, and acini of the glandular stomach didn't appear. During the incubation period, development of intestines, liver and pancreas of chicken embryos get to mature earlier than stomach. It may be associated with diges?tim and absorption of yolk in early embryo of children.

Key words:chicken embryo; digestive organ; histology

作者簡介：劉平（1981-），女，山東萊蕪人，碩士，中級工程師，主要從事家禽生產(chǎn)及營養(yǎng)方向的研究。

收稿日期：2014-11-20

中圖分類號：S852.1

文獻標志碼：A

文章編號：1001-0084（2015）02-0006-05