楊蘊(yùn)華 韓中波

Xpert Mtb/RIF技術(shù)在結(jié)核病診斷及耐藥檢測(cè)中的應(yīng)用

楊蘊(yùn)華 韓中波

目的評(píng)價(jià)Xpert Mtb/RIF檢測(cè)技術(shù)在檢測(cè)臨床標(biāo)本診斷結(jié)核病及利福平耐藥檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)1128例初診肺結(jié)核可疑患者痰標(biāo)本進(jìn)行涂片鏡檢， 改良羅氏培養(yǎng)和Xpert Mtb/RIF檢測(cè)， 評(píng)價(jià)各種方法結(jié)核桿菌檢測(cè)靈敏度、傳統(tǒng)藥敏方法和Xpert Mtb/RIF檢測(cè)利福平耐藥性的對(duì)比分析。結(jié)果臨床診斷結(jié)果作為最終標(biāo)準(zhǔn)， 涂片鏡檢的陽(yáng)性率為24.0%、改良羅氏培養(yǎng)方法的陽(yáng)性率為42.6%、Xpert Mtb/RIF技術(shù)的陽(yáng)性率為49.4%；以傳統(tǒng)藥敏方法為標(biāo)準(zhǔn)， Xpert Mtb/RIF檢測(cè)利福平耐藥性的靈敏度為89.5%、特異性為97.6%。結(jié)論Xpert Mtb/RIF技術(shù)檢測(cè)結(jié)核桿菌有較高的靈敏度， 同時(shí)還可以檢測(cè)結(jié)核桿菌對(duì)利福平的藥敏結(jié)果， 方法簡(jiǎn)單、操作便捷、安全， 在基層結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

Xpert Mtb/RIF技術(shù)；結(jié)核??；耐藥檢測(cè)

結(jié)核病是嚴(yán)重危及全球的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。目前耐藥、流動(dòng)人口和HIV感染已經(jīng)成為當(dāng)今結(jié)核病控制所面臨的三大難題， 其中結(jié)核桿菌耐藥性市我國(guó)結(jié)核病控制中起主要限制性作用的因素。結(jié)核病、耐藥結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)相對(duì)滯后。目前， 涂片鏡檢、改良羅氏培養(yǎng)、傳統(tǒng)比例法藥敏仍然是我國(guó)基層實(shí)驗(yàn)室的主要診斷手段， 抗酸染色涂片鏡檢方法敏感性較低， 只有30%左右， 傳統(tǒng)固體培養(yǎng)及藥物敏感性檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)（需2～3個(gè)月）， 難以實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)核病、耐藥結(jié)核病的早期診斷和及時(shí)治療。亟需引進(jìn)新的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)輔助結(jié)核病、耐藥結(jié)核病的診斷。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的發(fā)展， Xpert Mtb/RIF技術(shù)利用實(shí)時(shí)熒光定量核酸檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)結(jié)核桿菌， 同時(shí)檢測(cè)利福平是否耐藥， 逐漸被廣泛關(guān)注。Xpert Mtb/RIF技術(shù)使用半定量巢氏熒光PCR， 該方法針對(duì)結(jié)核桿菌利福平耐藥決定區(qū)rpoB基因設(shè)定引物、探針， 進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)， 根據(jù)其是否發(fā)生基因突變， 來(lái)檢測(cè)標(biāo)本中是否含有結(jié)核桿菌及結(jié)核桿菌是否對(duì)利福平耐藥， 整個(gè)過(guò)程只需2～3 h。前處理后的實(shí)驗(yàn)過(guò)程均在Xpert Mtb/RIF儀器中進(jìn)行，反應(yīng)結(jié)束自動(dòng)給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

本文針對(duì)初診肺結(jié)核可疑患者痰標(biāo)本進(jìn)行涂片鏡檢， 改良羅氏培養(yǎng)和Xpert Mtb/RIF檢測(cè)， 評(píng)價(jià)各種方法結(jié)核桿菌檢測(cè)靈敏度、傳統(tǒng)藥敏方法和Xpert Mtb/RIF檢測(cè)利福平耐藥性的對(duì)比分析。對(duì)Xpert Mtb/RIF檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 材料 2012年10月～2014年8月期間吉林市結(jié)核病防治研究所及吉林市各縣區(qū)所收治的結(jié)核病患者或疑似結(jié)核病患者共1128份痰標(biāo)本。

1.2 檢測(cè)方法 對(duì)1128份痰標(biāo)本進(jìn)行抗酸染色涂片檢測(cè)、改良羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)， 中性羅氏培養(yǎng)基比例法藥敏操作及結(jié)果判定。其操作均按《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

Xpert Mtb/RIF檢測(cè)， 取1 ml痰標(biāo)本置放到前處理管中，加入相當(dāng)于痰標(biāo)本2倍體積的痰標(biāo)本處理液， 將前處理管劇烈搖動(dòng)或者在渦旋振蕩器上震蕩20 s， 無(wú)可見(jiàn)塊狀痰標(biāo)本， 靜置15 min。

使用專(zhuān)用無(wú)菌吸管， 將取2 ml處理后樣品由加樣孔緩慢加入Cartridge反應(yīng)盒內(nèi)。將Cartridge反應(yīng)盒放入其中， 關(guān)上模塊， 檢測(cè)開(kāi)始。反應(yīng)結(jié)束后， 在Xpert Dx系統(tǒng)窗口查看結(jié)果。

1.3 檢測(cè)指標(biāo) MTB 檢出極低：CT值＜16， MTB 檢出低: CT值=16～22， MTB 檢出中等：CT值=22～28 ， MTB 檢出高: CT值＞28。

RIF resistance 檢出：利福平耐藥（R）RIF resistance 未檢出：利福平敏感（S）RIF resistance 不確定：利福平耐藥結(jié)果無(wú)法判讀。

2 結(jié)果

2.1 1128例初診肺結(jié)核可疑患者， 經(jīng)X線(xiàn)、CT、實(shí)驗(yàn)室檢查，臨床最終確診肺結(jié)核病413例， 確診率為36.6%。

2.2 Xpert Mtb/RIF檢測(cè)結(jié)核桿菌應(yīng)用價(jià)值的評(píng)價(jià) 對(duì)1128例初診肺結(jié)核可疑患者痰標(biāo)本進(jìn)行涂片鏡檢， 改良羅氏培養(yǎng)和Xpert Mtb/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率分別為24.0%（99/413）、42.6%（176/413）、49.4%（204/413）。Xpert Mtb/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率高于涂片鏡檢， 改良羅氏培養(yǎng)法。

2.3 Xpert Mtb/RIF檢測(cè)利福平耐藥的應(yīng)用價(jià)值 Xpert Mtb/ RIF檢測(cè)結(jié)果報(bào)告時(shí)間只需2～3 h， 遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于培養(yǎng)（2個(gè)月）、培養(yǎng)藥敏（3個(gè)月）的報(bào)告時(shí)間。Xpert Mtb/RIF檢測(cè)利福平耐藥與傳統(tǒng)方法比較， 敏感度為89.5%、特異性為97.6%。見(jiàn)表1。

表1 Xpert Mtb/RIF檢測(cè)利福平耐藥與傳統(tǒng)方法比較（n）

3 討論

我國(guó)是結(jié)核病高發(fā)地區(qū)， 2010年結(jié)核病流調(diào)結(jié)果顯示，我國(guó)活動(dòng)性肺結(jié)核患病率為459/10萬(wàn)， 結(jié)核病耐藥情況嚴(yán)重，對(duì)結(jié)核病、耐藥結(jié)核病的早期診斷和及時(shí)治療尤為重要， 基層實(shí)驗(yàn)室對(duì)結(jié)核病的主要診斷手段還主要是涂片、培養(yǎng)。涂片的低敏感性、培養(yǎng)及藥敏報(bào)告的時(shí)效性， 難以實(shí)現(xiàn)結(jié)核病的早期診斷和及時(shí)治療。近年來(lái)， Xpert Mtb/RIF檢測(cè)系統(tǒng)逐漸在基層推廣使用， 本文對(duì)Xpert Mtb/RIF檢測(cè)技術(shù)在檢測(cè)臨床標(biāo)本診斷結(jié)核病及利福平耐藥檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。

Xpert Mtb/RIF核酸檢測(cè)采用Cepheid公司GeneXpert檢測(cè)系統(tǒng)， 是一種半巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR體外診斷技術(shù)， 針對(duì)rpoB基因81bp利福平耐藥核心區(qū)間（RRDR）設(shè)計(jì)引物、探針， 檢測(cè)其是否發(fā)生突變， 診斷患者是否結(jié)核以及是否對(duì)利福平耐藥。本研究Xpert Mtb/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率為49.4%， 高于涂片鏡檢、改良羅氏培養(yǎng)法的陽(yáng)性檢出率， 且時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于培養(yǎng)（6～8周）。Xpert Mtb/RIF檢測(cè)利福平耐藥與傳統(tǒng)方法比較， 敏感度為89.5%、特異性為97.6%。表明Xpert Mtb/ RIF技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值較高， 可以對(duì)肺結(jié)核的早期診斷及合理規(guī)范治療起到很好作用。

Xpert Mtb/RIF檢測(cè)技術(shù)是世衛(wèi)組織認(rèn)可的一種全新的結(jié)核病快速檢測(cè)新方法， 具有簡(jiǎn)單， 僅需1個(gè)步驟的準(zhǔn)備工作；快捷， 只需2 h可得出報(bào)告；生物安全要求低， 具備生物安全柜就可操作。同時(shí)具有較高的陽(yáng)性檢出率， Xpert Mtb/RIF檢測(cè)利福平耐藥與傳統(tǒng)方法比較， 有較高的敏感性和特異性，在基層結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.07.139

2014-11-05］

132011 吉林市結(jié)核病防治研究所