柏素萍 李崢璟 劉大東 王旭

糖尿病足潰瘍時(shí)血小板聚集、釋放和膜糖蛋白Ⅵ變化的臨床研究

柏素萍 李崢璟 劉大東 王旭

目的研究糖尿病足潰瘍患者血小板聚集、釋放和膜糖蛋白Ⅵ（GPⅥ）的變化。方法42例2型糖尿病患者按有無糖尿病足分為：非糖尿病足（DM）組（未患糖尿病足）17例和糖尿病足（DFU）組25例；同時(shí)選取15例健康志愿者為對照組。檢測空腹血糖值、糖化血紅蛋白、血小板聚集率、血小板P選擇素釋放和血小板GPⅥ陽性率。結(jié)果DFU組空腹血糖值和糖化血紅蛋白（HbA1c）兩項(xiàng)指標(biāo)均高于對照組（P＜0.05）；DFU組血小板聚集率顯著高于對照組與DM組（P＜0.05）；DFU組血小板P選擇素釋放高于對照組與DM組（P＜0.05）；DFU組的GPⅥ陽性率高于對照組和DM組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論血小板功能的變化可能與糖尿病足的發(fā)病有關(guān)。

糖尿病足；潰瘍；血小板；聚集率；膜糖蛋白Ⅵ；P選擇素

糖尿病足是發(fā)生于糖尿病患者下肢遠(yuǎn)端的神經(jīng)異常與不同程度的周圍血管病變， 是導(dǎo)致糖尿病患者致殘致死的主要原因［1-3］。血小板的異常活化引起的血栓在其病程中扮演重要的角色， 但關(guān)于糖尿病足時(shí)血小板功能的變化的研究尚未見報(bào)道， 本文將分析血糖水平、糖化血紅蛋白（hemoglobin A1c ， HbA1c）、血小板功能參數(shù)與糖尿病足潰瘍病情的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 42例2型糖尿病患者（1999年WHO標(biāo)準(zhǔn)診斷）均來自本院門診及住院患者， 平均年齡（60±5）歲。按有無糖尿病足分為：非糖尿病足（diabetes mellitus ， DM）組17例和糖尿病足（diabetic foot ulceration ， DFU）組25例；DFU的患者均符合經(jīng)典Wagner分級法的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ級［4］， 同時(shí)選取15例健康志愿者作為對照組。排除有嚴(yán)重肝腎疾患、心力衰竭、動(dòng)靜脈血栓患者， 入選者2周內(nèi)未服用阿司匹林、氯吡格雷等影響血小板及凝血功能的藥物。

1.2 標(biāo)本采集 采集受試者空腹靜脈血6 ml， 2 ml注入含EDTA-K2抗凝劑的抗凝管中、混勻待測HbA1c。另外4 ml注入含枸櫞酸鈉抗凝劑的抗凝管中， 以150 g離心10 min， 分離出富含血小板血漿（platelet rich plasma， PRP）， 待測血小板的相關(guān)指標(biāo)。同時(shí)檢測受試者的空腹血糖值。

1.3 血小板功能檢測 取上述PRP于LBY-NJ4A全自動(dòng)血小板聚集儀（北京普利生）上檢測血小板聚集率。同時(shí)取上述PRP于流式細(xì)胞儀上檢測血小板的P選擇素（美國 Santa Cruz生物公司）和膜糖蛋白GPⅥ（美國 BD生物公司）［5］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)， 單因素方差分析采用one-way ANOVA。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DM組和DFU組患者的空腹血糖與HbA1c含量均較對照組顯著增高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）， DM組和DFU組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）， 見表1。

2.2 對血小板聚集率的分析顯示：DFU組的血小板聚集率較對照組、DM組高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對血小板P選擇素釋放的分析顯示：DM組的P選擇素與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）， DFU組P選擇素較DM組和對照組明顯高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對血小板GPⅥ的陽性率分析顯示： DM組和DFU組的血小板GPⅥ陽性率均較對照組高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）， DFU組GPⅥ的陽性率較DM組明顯高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表1 空腹血糖與HbA1c比較（ x-±s）

表2 各組血小板的功能參數(shù)比較（ x-±s， %）

3 討論

隨著生活水平的提高， 糖尿病發(fā)病率逐年上升， 繼發(fā)于糖尿病的一系列并發(fā)癥嚴(yán)重威脅患者的健康與生命［6］。糖尿病足是糖尿病常見的重要并發(fā)癥之一， 是糖尿病致殘、致死的主要原因。研究顯示， 中國有12%～15%糖尿病患者會(huì)發(fā)生糖尿病足部潰瘍［7］。糖尿病足發(fā)病機(jī)制復(fù)雜， 高血糖及脂代謝異常所引起的廣泛的微血栓形成在糖尿病足的發(fā)生與發(fā)展中扮演重要的角色［8，9］。

血小板是一種由巨核細(xì)胞分化而來的無核細(xì)胞， 主要參與機(jī)體的病理生理性止血， 但最近研究顯示血小板與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)［10，11］。研究證實(shí)， 糖尿病時(shí)患者體內(nèi)產(chǎn)生一種毒性物質(zhì)——糖基化終產(chǎn)物（advanced glycation end products， AGEs）， 該物質(zhì)能夠通過與血小板上的CD36受體特異性結(jié)合， 從而激活血小板， 活化后的血小板的粘附、聚集和釋放功能明顯增強(qiáng)［12］。血小板的聚集反應(yīng)是血小板的一個(gè)重要生理特性， 是血小板參與止血和血栓形成過程的重要因素之一。本研究發(fā)現(xiàn)DFU患者血小板的聚集率明顯高于DM患者和對照組患者。此外， 活化后的血小板也會(huì)釋放大量的物質(zhì)參與機(jī)體的凝血和炎癥反應(yīng)， P選擇素是衡量血小板釋放功能的重要指標(biāo)［13］。本研究發(fā)現(xiàn)DFU患者血小板的P選擇素釋放明顯高于DM患者和對照組患者。血小板表面的膜糖蛋白GPⅥ是血小板表面的一種免疫超家族受體，GPⅥ介導(dǎo)了血小板的活化， 啟動(dòng)生理性與病理性的血栓形成［14，15］， 本研究發(fā)現(xiàn)DFU患者血小板的GPⅥ陽性率明顯高于DM患者。血小板的聚集率、P選擇素釋放和GPⅥ的陽性率在DFU和DM患者體內(nèi)存在明顯地差異， 因此作者推測對血小板的聚集率、P選擇素釋放和GPⅥ陽性率的檢測有助于對DFU的判斷與防治提供客觀的指標(biāo)依據(jù)。

本研究首次揭示了血小板的功能與糖尿病足的發(fā)生發(fā)展相關(guān)， 為糖尿病足的基礎(chǔ)研究以及臨床防治提供了新的思維，對于糖尿病并發(fā)癥及合并癥的監(jiān)控有重要臨床意義。

［1］ Dixon JB， le Roux CW， Rubino F， et al.Bariatric surgery for type 2 diabetes.Lancet， 2012， 379（9833）:2300-2311.

［2］ Hobizal KB， Wukich DK.Diabetic foot infections: current concept review.Diabet Foot Ankle， 2012:3.doi:10.3402/dfa.v3i0.18409.

［3］ Alexiadou K， Doupis J.Management of diabetic foot ulcers.Diabetes Ther， 2012， 3（1）:4.

［4］ Korkmaz M， Erdogan Y， Balci M， et al.Preoperative medical treatment in patients undergoing diabetic foot surgery with a Wagner Grade-3 or higher ulcer: a retrospective analysis of 52 patients.Diabet Foot Ankle， 2012:3.doi: 10.3402/dfa.v3i0.18838.

［5］ Liu D， Liang F， Wang X， et al.Suppressive effect of CORM-2 on LPS-induced platelet activation by glycoprotein mediated HS1 phosphorylation interference.PLoS One， 2013， 8（12）:e83112.

［6］ Tabák AG， Herder C， Rathmann W， et al.Prediabetes: a high-risk state for diabetes development.Lancet， 2012， 379（9833）:2279-2290.

［7］ 馮雪琴， 張漢奎， 蘭海麗， 等.糖尿病足部潰瘍感染情況及其影響因素分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2010， 7（14）:1423-1428.

［8］ Bowering CK.Diabetic foot ulcers， Pathophysiology， assessment，and therapy.Can Fam Physician， 2001（47）:1007-1016.

［9］ Dinh T， Tecilazich F， Kafanas A， et al.Mechanisms involved in the development and healing of diabetic foot ulceration.Diabetes， 2012，61（11）:2937-2947.

［10］ Gieger C， Radhakrishnan A， Cvejic A， et al.New gene functions in megakaryopoiesis and platelet formation.Nature， 2011， 480（7376）: 201-208.

［11］ Gardiner EE， Andrews RK.Platelets: envoys at the infection frontline.J Infect Dis， 2013， 208（6）:871-873.

［12］ Zhu W， Li W， Silverstein RL.Advanced glycation end products induce a prothrombotic phenotype in mice via interaction with platelet CD36.Blood， 2012， 119（25）:6136-6144.

［13］ Trzeciak-Ryczek A， Tokarz-Deptu?a B， Deptu?a W.Plateletsan important element of the immune system.Pol J Vet Sci， 2013，16（2）:407-413.

［14］ Moroi M， Jung SM.Platelet glycoprotein Ⅳ: its structure and function.Thromb Res， 2004， 114（4）:221-233.

［15］ Arthur JF， Shen Y， Chen Y， et al.Exacerbation of glycoprotein VI-dependent platelet responses in a rhesus monkey model of Type 1 diabetes.J Diabetes Res， 2013:370212.doi: 10.1155/2013/370212.

Clinical research of platelet aggregation, release and change of membrane glycoprotein Ⅵ in diabetic foot ulceration

BAI Su-ping,
LI Zheng-jing, LIU Da-dong, et al.
Department of Burn and Plastic Surgery, Jiangsu Zhenjiang City Affiliated Hospital of Jiangsu University, Zhenjiang 212001, China

ObjectiveTo research platelet aggregation， release and change of membrane glycoprotein Ⅵin diabetic foot ulceration.MethodsA total of 42 patients with type 2 diabetes mellitus were divided into non diabetic foot （DM）group （without diabetic foot） with 17 cases and diabetic foot （DFU） group with 25 cases.Another 15 healthy volunteers were selected as control group.Detection was made on fasting blood-glucose， glycosylated hemoglobin， platelet aggregation rate， platelet P-selectin release， and platelet GP Ⅵ positive rate.ResultsDFU group had higher indexes of fasting blood-glucose and glycosylated hemoglobin （HbA1c） than the control group（P＜0.05）.DFU group had higher platelet aggregation rate than the control group and DM group （P＜0.05）.DFU group had higher platelet P-selectin release than the control group and DM group （P＜0.05）.DFU group had higher GP Ⅵ positive rate than the control group and DM group， and the differences had statistical significance （P＜0.05）.ConclusionChange of platelet function have relationship with the progress of diabetic foot.

Diabetic foot; Ulceration; Platelet aggregation rate; Membrane glycoprotein Ⅵ; P-selectin

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.07.013

2014-11-07］

江蘇省鎮(zhèn)江市科技支撐計(jì)劃指導(dǎo)性項(xiàng)目（項(xiàng)目編號：F22012040）

212001 江蘇省鎮(zhèn)江市江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院燒傷整形科

李崢璟