唐榮，王曉敏，嚴秀英

(撫州市疾病預(yù)防控制中心，江西 撫州344000)

流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，潛伏期短，傳播速度快。流感病毒分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。A型流感病毒抗原性易發(fā)生變異，曾多次引起世界大流行[1]。人群對變異株普遍易感，防控難度加大。通過流感網(wǎng)絡(luò)實驗室對流感病毒進行監(jiān)測分析可以了解毒株流行和變異情況，科學(xué)制定流感的防控策略。本文對2014年撫州市第一人民醫(yī)院流感監(jiān)測結(jié)果進行分析，了解本地區(qū)流感的流行特征。

1 材料與方法

1.1 標本來源 由國家級哨點醫(yī)院撫州市第一人民醫(yī)院采集發(fā)病3d以內(nèi)的流感樣病例[2](發(fā)熱、體溫≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一者)的咽拭子標本共1068例。每周二、四送樣。所有標本采集后4℃保存，并在48h內(nèi)運送至撫州市疾控中心流感實驗室進行病毒核酸檢測及毒株分離。未能及時檢測的標本放-70℃保存。

1.2 細胞株 狗腎傳代細胞(MDCK)由江西省疾病預(yù)防控制中心疾檢所提供，本實驗室液氮保存。

1.3 主要儀器與試劑 Promega Maxwell 16核酸純化擴增儀及配套試劑盒，Bio-Rad CFX-96熒光

PCR儀，江蘇碩世流感檢測試劑盒，國家流感中心血凝和血凝抑制試驗標準抗體。所有試劑和耗材均在有效期內(nèi)使用。

1.4 實驗方法

1.4.1 核酸檢測 所有標本用Promega核酸純化儀提取病毒RNA，實時熒光定量PCR先進行流感病毒A、B型核酸檢測，對A型陽性標本再進行新甲H1N1、 季節(jié)性 H3N2 和禽流感 H5、H7、H9、N9 檢測。對B型流感陽性進行B-Yamagata(BY)和BVictoria(BV)檢測。每次實驗均設(shè)立陽性對照和陰性對照。

1.4.2 病毒分離培養(yǎng)和鑒定 選擇生長良好的對數(shù)生長期MDCK細胞消化傳代，80%~90%成片生長時用于病毒分離。收集細胞病變液用HA和HI進行分型鑒定。

1.5 統(tǒng)計分析 使用SPSS 13.0統(tǒng)計分析，組間比對采用卡方檢驗，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 流感病毒核酸檢測結(jié)果 2014年共采集并檢測流感樣咽拭子標本1068例，陽性201例，核酸檢測陽性率為18.82%(201/1068)。其中新甲H1N1 35 例(17.42%)，季節(jié)性 H3N2 97 例(48.25%)，BY 69例(34.33%)。新甲NIN1僅出現(xiàn)在春季，夏季以季節(jié)性H3N2為主，11-12月份只有BY流行。陽性率最高的是1、3和7月份。各月病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果見表1。

2.2 不同性別流感核酸檢測情況 1068例咽拭子標本中男性640例，女性428例，男女比例為1.51：1。流感病毒核酸檢出陽性男性組為121例(60.20%)，女性組為80例(39.80%)。尚未發(fā)現(xiàn)男女兩組間流感核酸陽性檢出率有統(tǒng)計學(xué)差異 (χ2=0.008，P>0.05)。

表1 撫州市2014年流感核酸檢測和病毒分離表

2.3 不同年齡流感核酸檢測情況 1068例流感監(jiān)測樣本中，年齡最小的1個月，最大的87歲。核酸陽性率最高的是≥15歲年齡組51.79%(58/112)，其次為≥60歲年齡組29.31%(17/58)。不同年齡組流感監(jiān)測結(jié)果見表2。各年齡組流感病毒陽性分離率差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 (χ2=121.73，P<0.05)。

表2 2014年撫州市流感核酸檢測年齡分布表

2.4 流感病毒分離情況 流感病毒核酸陽性樣本進行MDCK分離鑒定，共分離毒株63例，陽性分離率為5.90%(63/1068)。其中新甲H1N1 12例，占全年陽性毒株總數(shù)的19.05%；季節(jié)性H3N2 16例，占25.40%；BY 35例，占55.55%，以BY分離數(shù)量最多。1、3和7月份病毒毒株分離數(shù)較多，1月份以新甲HIN1和H3N2為主，3月份以BY為主，7月份以H3N2為主。病毒分離數(shù)量與核酸陽性檢出率相一致。流感病毒分離情況見表1。

3 討論

流感病毒包膜上主要有植物血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)二種抗原，抗原變異形成新的亞型容易造成廣泛流行[3]。流感病毒是全球監(jiān)測性傳染病，是預(yù)防和控制流感的主要措施之一[4]。撫州市2014年流感監(jiān)測樣本采用實時熒光定量RT-PCR方法檢測。流感病毒核酸檢測結(jié)果顯示全年各個月份均有陽性樣本的檢出。2014年撫州市有多種流感亞型在人群中流行，檢出的病毒型別主要有新甲H1N1、季節(jié)性H3N2和BY，未檢出BV，與本省其他地區(qū)過去十年優(yōu)勢流行株有較大不同[5，6]。通過監(jiān)測我們發(fā)現(xiàn)2014年撫州市流感流行主要集中在春季1至3月份和夏季7、8月份。1至3月份有新甲H1N1、季節(jié)性H3N2和BY同時流行，4至12月份沒有出現(xiàn)過新甲H1N1型。4至10月以季節(jié)性H3N2為主，伴有少量BY，到11、12月份只有BY流行。我國北方城市流感一般在冬春季節(jié)流行[7-9]，我市夏季7月份出現(xiàn)的季H3N2流行高峰，這與我國南方城市夏季是主要流行季節(jié)的觀點相一致[10-12]。從以上結(jié)果可以看出，撫州市2014年流感流行主要在春季和夏季，沒有出現(xiàn)冬季高發(fā)的流行特征，與本省其他地區(qū)流感流行特征也存在差異[13,14]。從流感病毒核酸檢測陽性樣本的年齡分析我們發(fā)現(xiàn)各個年齡組流感核酸均檢出陽性標本。核酸陽性率最高的是≥15歲年齡組，占到51.7 9%，此人群多以學(xué)生為主。校內(nèi)密切接觸和空氣傳播是其主要因素，極易造成學(xué)生之間的廣泛流行。這與龐晶晶[15,16]等的報告不一致。其次為≥60歲年齡組，占29.31%，此組老年人普遍抵抗力降低，更易感染流感病毒。對不同性別流感核酸檢測我們尚未發(fā)現(xiàn)男女兩組間流感核酸陽性檢出率有統(tǒng)計學(xué)差異,這與江西省近幾年的分析結(jié)果相一致[6]。

對流感病毒核酸檢測陽性的樣本進行病毒分離，全年共分離出流感毒株63例，分離率為5.90%。全年分離出毒株最多的是BY，占全年陽性毒株總數(shù)的55.55%。我市從6月到8月份流感病毒分離數(shù)下降，這可能與夏季天氣炎熱，樣本保存和運輸?shù)葪l件有關(guān)。流感病毒分離率與流感發(fā)病率、采樣液、采集方法、樣本的運送和保存以及分離技術(shù)等密切相關(guān)，各個環(huán)節(jié)共同影響流感毒株分離的效果。我們也將在以后的工作中重點從這幾個方面入手，嚴格操作程序，提高病毒分離率。

[1]郭元古,程小雯.流行性感冒病毒及實驗技術(shù)[M].北京:中國三峽出版社,1997:122.

[2]衛(wèi)生部.全國流感監(jiān)測方案(2010年版)[S].北京:衛(wèi)生部.2010.

[3]Mullooly JP,Bridges CB,Thompson WW,et al.Influenza and RSV associated hospitalization among adults[J].Vaccine,2007,25(5):846-855.

[4]朱玉芝,楊明,蘇楊.流感病毒快速檢測分離鑒定新技術(shù)的應(yīng)用[J].中國公共衛(wèi)生管理,2006,22(3):233-234.

[5]鄒明霞,謝昀,曾艷文,等.江西省2006-2008年流感監(jiān)測哨點醫(yī)院病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2010,37(23):4408-4410.

[6]周珺,熊英,李健雄,等.2009年-2012年江西省流感病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2014,24(12):1771,1775.

[7]高燕,方立群,張勇,等.中國大陸季節(jié)性流感活動的空間分布特征[J].中華流行病學(xué)雜志,2010,30(11):1097-1101.

[8]黃芳,郭娟,崔淑娟,等.北京市甲型H1N1流感病毒病原學(xué)監(jiān)測分析[J].中華流行病學(xué)雜志,2010,30(5):494-496.

[9]喬鳳娟,劉紅.長春市2011-2013年流感監(jiān)測情況分析[J].中國衛(wèi)生工程學(xué)，2014,13(1):69-72.

[10]沈方正.流感病毒變異與流行性感冒流行與預(yù)防[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué),2005,17(12):561,567.

[11］熊英,鄒明霞,謝昀,等.2004年江西省流行性感冒病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2005,15(9):1103,1108.

[12]鄒明霞,謝昀,熊英,等.2004-2007年江西省流行性感冒監(jiān)測哨點醫(yī)院病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果分析[J].疾病監(jiān)測,2009,24(7):484-486.

[13]陳玉紅,魏維杰,黃秋艷.宜春市 2013年流感病毒檢測結(jié)果分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2014,32(6):793-794.

[14]鄧蘭,李晶鑫,鐘知情.2009年至 2013年萍鄉(xiāng)市流感病例樣本real-time RT-PCR結(jié)果分析 [J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2014,32(5):511-512.

[15]龐晶晶,路燕,胡三梅,等.2013年北京市中心城區(qū)流感病原學(xué)特征[J].首都公共衛(wèi)生,2014,(8):158-161.

[16]謝曉紅,陶力新,王仁剛.上海市奉賢區(qū)2010年流感監(jiān)測情況分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2012,22(2):326-327.