吳穎虹，王仁杰，朱少波，劉小景，張玨，江金梅

(景德鎮(zhèn)市第二人民醫(yī)院，江西 景德鎮(zhèn)333000)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率與病死率均較高[1]。而異黏蛋白(metadherin，MTDH)基因可激活多條刺激細胞增殖，侵襲，細胞生存和耐藥的信號轉(zhuǎn)導通路，可直接影響c-myc、Ha-ras等相應基因的表達水平[2]。本文重點研究了乳腺癌中MTDH的表達及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移二者關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 從江西景德鎮(zhèn)市第二人民醫(yī)院2008年1月-2013年1月收治的乳腺癌患者中抽取樣本30例，其中24例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，6例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，本次所取的30例患者均分別取腫瘤處組織與癌旁的正常組織(大于5cm)，患者均為女性，年齡37~58歲，平均(30.21±1.8)歲，所選組織標本均經(jīng)病理確認。

1.2 材料 試劑需用型兔抗人MTDH單克隆抗體，兔抗人雌激素受體蛋白(ER)、HER-2單克隆抗體、兔抗人孕激素受體(PR)以及相應的PV6000SP試劑盒，DAB顯色試劑盒等，所有試劑與材料均來自于北京中山金橋生物技術(shù)公司。

1.3 方法 所有免疫組化組織切片均進行水化、脫蠟、加熱修復抗原處理，并使用3%的過氧化氫甲醇溶液來削弱內(nèi)源性氧化物酶活性，并在山羊血清封閉抗原內(nèi)，依次滴加抗ER、MTDH、HER-2、PR等抗體過夜，生物素化二抗，DAB顯色，蘇木素復染后封片，結(jié)束后將其置于光鏡下觀察，用PBS緩沖液作陰性對照，用乳腺癌陽性標準作陽性對照，所有標本均經(jīng)DAB染色后，可見細胞核、細胞膜、細胞質(zhì)中有棕黃色顆粒沉著，從每例患者所選的標準的中選取5個高倍鏡視野，在依照細胞染色程度與陽性染色細胞本身所占比例來作評分[3]。可將染色程度評分情況如下：0分：不著色；1分：淡黃色；2分：黃色；3分：棕褐色；陽性染色細胞百分比評分情況如下：0分：陽性細胞低于25%；1分：陽性細胞在25%~50%之間；2分：陽性細胞在50%~75%之間；3分：陽性細胞超過75%。將染色程度與陽性染色細胞百分比評分相加后的最終結(jié)果相加，低于2分為陰性，高于2分為陽性。

2 結(jié)果

2.1乳腺癌及癌旁乳腺組織中MTDH蛋白的表達30例乳腺癌患者中23例的組織內(nèi)有檢測到MTDH蛋白的表達，表達率為76.67%，另有9例患者的癌旁乳腺組織中有檢測到MTDH蛋白的表達，表達率為30%。

2.2 陽性檢出率情況 MTDH基因在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者中的陽性檢出率高達87.50%，而無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者中，MTDH陽性率為33.33%(P<0.05)。 見表 1。

表1 乳腺癌患者臨床資料與MTDH基因表達關(guān)系

2.3 MTDH、ER、PR及HER-2之間的關(guān)系 MTDH、ER、PR及HER-2在乳腺癌組織內(nèi)的表達為：在乳腺癌組織免疫組化檢測內(nèi)MTDH均表達在腫瘤細胞膜與細胞漿中(圖1)。僅有極少部分表達在細胞核中，陽性檢出率為76.67%；ER表達于癌細胞的細胞核與細胞漿，陽性率為91.67%(圖2)；PR表達于癌細胞核與細胞漿，陽性率為63.64%(圖3)；HER-2表達于細胞膜上，陽性率為83.33%(圖4)。

圖1 MTDH的表達

圖2 ER的表達

圖3 PR的表達

圖4 Her-2的表達

3 討論

最早發(fā)現(xiàn)MTDH是在人原始胚胎星形細胞中[4]，在人體的其它正常組織內(nèi)完全無表達，但在腫瘤病變區(qū)內(nèi)卻呈高表達，與腫瘤的生長關(guān)系緊密[5]。此外，通過對小鼠體內(nèi)噬菌體進行篩查，得知乳腺癌與MTDH之間關(guān)系緊密[6]。因MTDH重點定位在染色體8q22，齊全的MTDH基因有3611bp[7]，其中包括12個外顯子與11個內(nèi)含子，而第22與1968才是最主要的表達序列，最終編碼產(chǎn)物為異黏蛋白[8]，屬于高堿性Ib性跨膜蛋白，大部分均定位在51與72之間的氨基酸殘基上[9]。

而MTDH大多表達在腫瘤細胞內(nèi)胞膜與胞漿中，并與人體NF-κB內(nèi)的p56產(chǎn)生作用，將NF-kB信號通路完全激活，賦予了NF-κB調(diào)節(jié)人體免疫、炎癥反應、凋亡等多種功能[10]。此外，MTDH表達位置多是由細胞漿向細胞核發(fā)生轉(zhuǎn)移，受TNF-α、HIF-1α等基因的影響較明顯，此種轉(zhuǎn)移與乳腺癌患者復發(fā)轉(zhuǎn)移有緊密關(guān)聯(lián)[11]。同時細胞漿向細胞核轉(zhuǎn)移后，還會與病變腫瘤細胞內(nèi)的P53基因產(chǎn)生作用，促使人體腫瘤細胞快速增殖[12]，使得乳腺癌疾病不斷惡化，降低了患者生存時間[13]。本文中重點對乳腺癌中MTDH的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系展開分析，結(jié)果表明，30例乳腺癌患者中23例的組織內(nèi)有檢測到MTDH蛋白的表達，表達率為76.67%，另有9例患者的癌旁乳腺組織中有檢測到MTDH蛋白的表達，表達率為30%，乳腺癌患者淋巴結(jié)快速轉(zhuǎn)移與體內(nèi)的MTDH關(guān)系緊密(P<0.05)，若患者體內(nèi)的MTDH基因檢出率越高，說明發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率越高，其可作為判斷乳腺癌患者有無發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移的重要指標。此外，MTDH不受ER、PR、HER-2等參數(shù)值的影響，ER在癌細胞中的陽性率為91.67%；PR在癌細胞中的陽性率為63.64%；HER-2在癌細胞中的陽性檢出率為83.33%?？梢?，MTDH不受乳腺癌患者的年齡、ER、PR、HER-2等影響，而乳腺癌)MTDH高表達者發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移的幾率較大。這為臨床中乳腺癌疾病的治療和研究提供了更多的理論依據(jù)。

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