李愛敏，唐曙明，陳海霞，劉彩艷

(深圳市人民醫(yī)院，廣東 深圳518020)

地中海貧血(thalassemia，簡稱地貧)是一種臨床常見的遺傳性溶血性疾病，是由于調(diào)控珠蛋白合成的基因缺失或突變引起α鏈和β鏈合成數(shù)量不平衡而造成的[1]。在我國南方地區(qū)發(fā)病廣泛。廣東省人群中α及β地貧總的基因攜帶率高達(dá)11.07%，其中α地貧的基因攜帶率為8.53%，β地貧的基因攜帶率為2.54%[2]。血液學(xué)表型分析法是國內(nèi)外地貧篩查和診斷指南推薦的方法，國際地貧篩查標(biāo)準(zhǔn)為MCH<27pg和MCV<78fl，其缺陷是存在部分輕型β地貧，靜止型α地貧的漏檢[3，4]。國內(nèi)對(duì)于MCV、MCH篩查陽性的地貧基因型分布報(bào)道很多，對(duì)于MCV、MCH篩查陰性的地貧基因攜帶者基因型分布報(bào)道不多。本研究為提高地貧篩查的靈敏度，取MCV82fl或MCH27pg作為截?cái)帱c(diǎn)，通過對(duì)2013年1月至2015年4月在我院產(chǎn)檢的地貧基因攜帶者的基因檢測結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，探討MCV、MCH篩查陰性時(shí)主要漏檢的地貧基因類型，為優(yōu)化地貧診斷流程提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 2013年1月至2015年4月在深圳市人民醫(yī)院龍華分院產(chǎn)檢自愿進(jìn)行α、β地貧基因檢測的孕婦2681名，年齡19～45歲。參照2012年我國衛(wèi)生部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T405-2012)《血細(xì)胞分析參考區(qū)間》提供的MCV和MCH參考區(qū)間值[5]，選取 MCV<82fl、MCH<27pg作為截?cái)嘀?則 MCV≥82fl、MCH≥27pg為地貧初篩表型陰性。

1.2 儀器與試劑 hema9600 PCR擴(kuò)增儀 (珠海黑馬公司)，Combi-H12 分子雜交儀(韓國)，LH 780 全自動(dòng)血細(xì)胞分析(美國貝克曼公司)；α-地中海貧血基因診斷試劑盒(gap-PCR法)檢測α-地貧基因3種缺失(--SEA、-α3.7、-α4.2)和 β 地中海貧基因檢測試劑盒(膜反向雜交法)，檢測17種位點(diǎn)突變CD41-42(-TTCT)，CD17(A →T)，CD43(G→T)，CD71-72(+A)，IVS-2-654(C→T)，-28(A→G)，-29(A→G)，CD26(G→A),CAP+40-+43(-AAAC),CD14-15(+G),CD27/28(+C),-32(C→A),-30(T→C),CD31(-C),Int(ATG→AGG),IVS-I-1(G→T)和 IVS-I-5(G→C)),均為深圳益生堂生物企業(yè)有限公司產(chǎn)品。

1.3 檢測方法 采集患者靜脈血2～3ml，EDTA-K2抗凝。當(dāng)天用全自動(dòng)血液分析儀檢測紅細(xì)胞參數(shù)；剩余標(biāo)本于2～8℃冰箱保存集中進(jìn)行基因檢測，用全血基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增后進(jìn)行3種缺失型α-地貧基因和17種β地貧基因突變檢測。具體步驟嚴(yán)格按試劑說明書操作。

2 結(jié)果

2681例孕婦中，地貧初篩陽性的孕婦894例，地貧初篩陰性的孕婦1787例。共檢出地貧基因攜帶者366例，其中檢出α-地貧235例，β地貧115例，α合并β復(fù)合型地貧16例。在1787例地貧初篩表型陰性的孕婦中，檢出地貧基因攜帶者52例，占總檢出地貧的14.21%(52/366)，其中αα/-α3.746 例、-α4.2/αα3例、β 地貧 (均為 CAP 雜合子)2例、α復(fù)合β地貧(基因型-α3.7/CD26)1例，分別占檢出的88.46%、5.77%、3.85%、1.92%。見表1。

表1 地貧初篩表型陰性地貧基因攜帶情況

3 討論

地中海貧血臨床上分布最廣和最嚴(yán)重的主要是α鏈珠蛋白地貧及β鏈珠蛋白地貧。正常人含有4個(gè)正常α珠蛋白基因(αα/αα)及2個(gè)正常的β珠蛋白基因(β/β)。根據(jù)α地貧基因缺失的數(shù)量，臨床上分為 α 地中海貧血靜止型(－α/αα)、標(biāo)準(zhǔn)型(－－/αα)、HbH 病(－－/－α)及 Bart胎兒水腫(－－/－－)。 β 地貧分為單雜合子地貧(β0/＋/β)及雙重雜合子或純合子地貧(β0/＋/β0/＋)及 αβ 復(fù)合型地貧[6]。

本研究數(shù)據(jù)顯示，在初篩陰性 (MCV≥82fl、MCH≥27pg)的孕婦人群中，主要檢出的是αα/-α3.7和 -α4.2/αα，提示在 MCV≥82fl、MCH≥27pg 的孕婦中，仍有可能是靜止型α地貧基因的攜帶者。α珠蛋白基因缺陷的數(shù)目是引起α-地貧不同血液學(xué)表型的直接原因。--SEA/αα是兩個(gè)α基因異常，故MCH、MCV改變較為明顯，因此該基因出現(xiàn)在MCV≥82fl、MCH≥27pg的人群中的報(bào)道較為罕見。一般來說，α2基因的轉(zhuǎn)錄活性略高于α1基因,-α4.2/αα 是 α2 基因完全缺失，αα/-α3.7是 α2基因部分缺失，因此-α4.2/αα的血液學(xué)指標(biāo)改變程度比 αα/-α3.7略為明顯[7]，導(dǎo)致在 MCV≥82fl、MCH≥27pg的人群中 αα/-α3.7檢出率要大于-α4.2/αα；同時(shí)，在我國南方五省αα/-α3.7的檢出率高于-α4.2/αα[8-12]，也可能造成兩者的構(gòu)成比差異。這與本研究結(jié)果(αα/-α3.7占 88.46%，α4.2/αα 占 5.77%)一致。

在檢出的115例β-地貧中，17種β突變基因共檢測出9種突變類型，從高到低依次是IVS-2-654、CD41-42、、CD17、 -28、CD71-72、INS-1-1、CAP 、-29、βEM 。 本 研究中 ， 在 MCV≥82fl、MCH≥27pg的孕婦人群中僅檢出CAP雜合子2例，在β-地貧基因中的比率為1.74%(2/115)。結(jié)果說明MCV≥82fl、MCH≥27pg時(shí)不能排除個(gè)別輕型β地貧基因型。本研究還發(fā)現(xiàn)1例靜止型α地貧合并輕型β地貧基因者，可能是α地貧合并β地貧時(shí)，在β肽鏈合成減少的同時(shí),α肽鏈亦合成減少,使二者不平衡的狀態(tài)得以平衡。亦有蔡永林等[13]報(bào)道過--SEA/CD41-42復(fù)合型1例(MCV：84fl MCH：28.3pg)。由于本研究收集到的α復(fù)合β地貧型例數(shù)較少，是否在該人群中還有其他復(fù)合基因攜帶者，有待后續(xù)探討。

本研究結(jié)果表明，在血液型表型陰性的孕婦人群中，漏檢的主要是靜止型α地貧、少部分輕型β地貧和α合并β地貧，由于他們的MCH、MCV區(qū)間與健康人群間有較大的重疊區(qū)，故很難通過血液表型篩查來發(fā)現(xiàn)。而漏檢率最高的是靜止型α地貧，其危害在于它與HbH病密切相關(guān)，HbH病雖非致死性疾病，但它嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量。強(qiáng)制婚檢取消后，孕前或孕后檢查就尤顯重要。目前國內(nèi)地貧篩查的方法主要有血常規(guī)、紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)、血紅蛋白電泳等[14]，這些方法操作簡單，價(jià)格較低，雖能篩出絕大多數(shù)典型的地貧基因攜帶者，但輕型地貧攜帶者易漏檢。也不能區(qū)分血液學(xué)表型特征類似但基因型不同的個(gè)體。地貧攜帶者個(gè)體的確診、地貧的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷均有賴于基于DNA分析的基因分型[15]。

因此，建議對(duì)于地貧高發(fā)區(qū)人群，夫妻雙方均需做血液學(xué)初篩，若一方確定為α地貧，另一方無論MCV、MCH是否正常，都建議進(jìn)行相應(yīng)的地貧基因檢測，為孕產(chǎn)婦考慮是否選擇終止妊娠，減少HbH胎兒、甚至Bart胎兒水腫的出生提供了可靠的科學(xué)參考。對(duì)指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育，提高人口素質(zhì)有重要意義。

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