曹龍古，歐陽丹明，周志雄，陳蘇芳，張艷

(湘南學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)檢驗系，湖南 郴州423000)

梅毒(Syphilis)是一種全球性分布、嚴重危害成人和新生兒健康的的性傳播疾病(STD)，由蒼白密螺旋體蒼白亞種(俗稱梅毒螺旋體)(Treponema pallidum,Tp)引起。盡管努力采取了一系列綜合防治措施，但近年來全球梅毒發(fā)病仍以20%速度增長，每年新增病例數(shù)高達1500萬[1]，主要出現(xiàn)在發(fā)展中國家，在發(fā)達國家也死灰復(fù)燃，從2006年開始超過淋病發(fā)病數(shù)而位居STD首位[2]，梅毒的高發(fā)已成為我國乃至全球共同高度關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。

梅毒螺旋體的人工培養(yǎng)問題迄今仍未解決，直接顯微鏡檢查容易造成漏檢，因此血清學(xué)檢測梅毒抗體對于梅毒的輔助診斷及療效觀察尤為重要[3]。梅毒血清學(xué)試驗分為兩大類：非梅毒螺旋體抗原血清試驗和梅毒螺旋體抗原血清試驗，每一類檢測試驗具體來說又包括多種試驗方法，本研究通過對目前臨床上比較常用的四種血清學(xué)檢驗方法在各期梅毒的檢驗結(jié)果進行綜合分析，以期探索出一種更加合適的檢測模式，為臨床準確診斷梅毒提供直接的實驗診斷依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1標本來源 我校附屬醫(yī)院2014年4月至2015年3月的門診及住院梅毒患者共183例，男性82例，女性101例，年齡1天~82歲，經(jīng)臨床科室醫(yī)生確診：一期梅毒患者86例，二期梅毒患者53例，胎傳梅毒21例，隱性梅毒23例。梅毒臨床診斷標準和臨床診斷分期依據(jù)參照衛(wèi)生部衛(wèi)生行業(yè)標準《梅毒診斷標準》(WS273-2007)。217例正常對照血清標本均來自我院同期健康體檢者，檢查梅毒、艾滋及乙肝均為陰性。

1.2 試劑和方法 梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(TP-ELISA)試劑購自珠海麗珠試劑公司生產(chǎn)的試劑盒；甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)試劑購自上海榮盛生物公司生產(chǎn)的試劑盒；梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)試劑購自日本富士瑞必歐株式會社生產(chǎn)的試劑盒；梅毒膠體金試驗(SYP)試劑購自廈門英科新創(chuàng)科技公司生產(chǎn)的診斷試劑盒。四種檢測試驗的具體操作方法均嚴格按照各自試劑盒的要求進行，結(jié)果判斷亦依據(jù)試劑盒標準判斷。儀器設(shè)備主要有DNM960Z-G酶標儀，DEM-3自動洗板機，上海躍進醫(yī)療器械一廠產(chǎn)振蕩儀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS軟件進行統(tǒng)計，計數(shù)資料以率表示，各方法的敏感性及特異性分析采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四種血清學(xué)檢驗方法(TRUST、ELISA、TPPA和SYP)對400例血清標本的檢測結(jié)果 見表1。

表1 四種檢驗方法檢測結(jié)果[n(%)]

2.2 四種檢驗方法特異性、敏感性比較 ELISA、TPPA和SYP三種方法的敏感性均很高，分別為96.7%、99.4%和98.9%，三者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05)，ELISA、TPPA和SYP三種方法的敏感性均高于TRUST法(P＜0.05)；四種方法的特異性均很高，分別為97.7%、98.6%、99.5%和98.6%，四者之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 四種檢驗方法特異性、敏感性(%)

3 討論

通常正常人體感染梅毒螺旋體后4~10周左右，血清中可產(chǎn)生一定量的抗類脂質(zhì)抗原的非特異性反應(yīng)素(抗脂質(zhì)抗體，臨床上習(xí)慣稱非特異性抗體)和抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體[4]。

測定非特異性抗體的主要試驗方法有性病研究所實驗室試驗(VDRL)、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡試驗(RPR)和TRUST三種，其中后兩種方法目前在臨床上應(yīng)用最多，我院目前采用TRUST法檢測非特異性抗體。由于非特異性抗體的出現(xiàn)時間晚于特異性抗體，而且晚期梅毒又可能轉(zhuǎn)陰，故該方法的敏感性有所欠缺 (本研究結(jié)果TRUST敏感性只有72.7%說明了此觀點)，因此，TRUST不適合Ⅰ期梅毒早期以及Ⅲ期的診斷[5]，對潛伏期以及神經(jīng)梅毒也不敏感。此外，該方法易受風(fēng)疹、麻疹、麻風(fēng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及風(fēng)濕性心臟病等疾病干擾[6]，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。所以單獨TRUST陽性意義不大。但TRUST滴度變化與梅毒治療情況呈正相關(guān)，故該方法適宜臨床療效觀察、隨訪及梅毒復(fù)發(fā)的輔組診斷[7，8]。

測定特異性抗體的主要試驗方法有熒光密螺旋體抗體吸收試驗(FTA-ABS)、梅毒螺旋體熒光抗體雙染色試驗(FTA-ABS-DS)、抗梅毒螺旋體抗體的微量血凝檢測 (MHA-TP)、TP-ELISA、TPPA 和SYP等方法，其中后三種方法目前在我省臨床應(yīng)用最多。

47KD、45KD、17KD、15KD 等蛋白分子為梅毒螺旋體外膜的脂蛋白，具有較好免疫活性，國內(nèi)外梅毒TP-ELISA試劑盒主要是選用以上的分子為抗原[9]，可用于各期梅毒診斷，敏感性特異性均達96%以上，是梅毒血清學(xué)診斷試驗的常用方法，加上全自動酶免疫分析系統(tǒng)的廣泛應(yīng)用，大大減少了傳統(tǒng)手工操作的人為誤差，尤其適用于臨床大批量標本的測定[10]。但本研究也發(fā)現(xiàn)，TP-ELISA在Ⅰ期梅毒的檢測中出現(xiàn)了6例假陰性結(jié)果，出現(xiàn)此種情況是由于標本中過量特異性抗體分別與固相抗原及標記抗原分別結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，顯色大大降低，此時正確的處理辦法是把標本做系列稀釋[11]。同時TP-ELISA在健康對照組檢測中，出現(xiàn)了3例老年人假陽性病例，此種情況可能與老年人免疫功能異常，容易產(chǎn)生一些針對連接用的白蛋白抗體或者是一些異常蛋白質(zhì)干擾了ELISA反應(yīng)[12,13]，臨床檢驗中應(yīng)注意。

SYP采用免疫層析式雙抗原夾心法原理，該法具有操作簡單、結(jié)果觀察直觀快速、不需要特殊儀器設(shè)備等優(yōu)點，已經(jīng)廣泛應(yīng)用到獻血員現(xiàn)場初篩、門診創(chuàng)傷性醫(yī)療設(shè)備檢查治療前傳染病快速篩查以及其它梅毒抗體定性試驗及方法的比對中[14]。該方法同時也檢測出了1例假陰性結(jié)果，經(jīng)查證原因為標本是高血脂標本，造成顯色不清晰而影響結(jié)果判斷。

TPPA法所檢測的抗體屬于特異性抗體，且結(jié)果與抗體的濃度呈正相關(guān)，不隨抗菌藥物的治療及病程的發(fā)展而改變。TPPA具有高敏感性、高特異性的特點(本研究結(jié)果在99.4%以上)，但由于操作較復(fù)雜，且試劑價格昂貴，因此該試驗一般僅用于篩選試驗陽性標本的確診試驗，目前絕大多數(shù)醫(yī)院檢驗科均把該方法作為梅毒螺旋體特異性抗體診斷的金標準[15]。

綜上所述，四種方法各有優(yōu)缺點，TRUST敏感性較差，適宜臨床療效觀察、隨訪及梅毒復(fù)發(fā)的輔組診斷；TP-ELISA敏感性特異性高，適用于臨床大批量標本的測定；SYP敏感性特異性高，適用于其它梅毒抗體定性試驗的比對；TPPA高敏感性、高特異性，可用作陽性標本的確診試驗。最后，結(jié)合各方法優(yōu)缺點，探索出梅毒螺旋體合理的檢測模式：先用TP-ELISA初篩→陽性標本同時采用SYP比對→兩種定性方法結(jié)果不符→用TPPA確診→陽性TRUST非特異性抗性滴度。相信采用上述四種檢驗方法對梅毒螺旋體抗體的全面檢測，肯定能夠得到正確結(jié)果，為臨床醫(yī)生對梅毒的診斷提供重要的參考依據(jù)。

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