潘 科， 張人弘， 鄭 娟， 張丹丹， 陳崢宏， 王 菲， 魏 剛， 綦廷娜**

(1.黔南州人民醫(yī)院 消化內(nèi)科， 貴州 都勻 558000； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 微生物學(xué)教研室， 貴州 貴陽 550025)

黔南州280例胃鏡檢查患者幽門螺桿菌感染及抗生素耐藥情況*

潘 科1， 張人弘1， 鄭 娟1， 張丹丹1， 陳崢宏2， 王 菲2， 魏 剛2， 綦廷娜2**

(1.黔南州人民醫(yī)院 消化內(nèi)科， 貴州 都勻 558000； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 微生物學(xué)教研室， 貴州 貴陽 550025)

目的： 了解黔南州280例胃鏡檢查患者幽門螺桿菌(H.pylori)感染狀況及其對抗生素耐藥情況。方法: 采集黔南州280例行胃鏡檢查的上消化道疾病患者胃黏膜組織，采用快速尿素酶法(RUT)診斷H.pylori感染，比較不同民族、性別、疾病類型患者的H.pylori感染率，對RUT試驗(yàn)陽性的胃黏膜組織進(jìn)行H.pylori微需氧分離培養(yǎng)，以改良瓊脂稀釋法(界值法)檢測各H.pylori臨床菌株對阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的敏感性，比較不同民族來源的臨床分離株對抗菌藥物的耐藥率。結(jié)果: 280例上消化道疾病患者H.pylori感染率為86.1%(241/281)，不同民族和不同性別上消化道疾病患者H.Pylori感染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；消化性潰瘍患者H.Pylori感染率(95.4%)>慢性胃炎患者H.Pylori感染率(84.1%)>胃癌患者H.Pylori感染率(76.9%)，P<0.05；經(jīng)分離培養(yǎng)獲得74株H.pylori，對阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的耐藥率分別為5.4%(4/74)、20.3%(15/74)、86.5%(64/74)、29.7%(22/74)；分離自漢族和少數(shù)民族患者的H.Pylori對4種抗菌藥物的耐藥率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論: 上消化道疾病患者H.pylori感染率較高，H.Pylori對甲硝唑和克拉霉素耐藥率較高，對阿莫西林和左氧氟沙星耐藥率較低。

螺桿菌，幽門； 感染； 抗生素類； 耐藥性

幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,H.pylori)感染與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃癌以及胃黏膜相關(guān)惡性淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)。H.pylori流行情況呈全球分布狀態(tài)，感染人數(shù)超全球人口總數(shù)的1/2[1]。不同國家和地區(qū)報(bào)道的H.pylori感染率不盡相同，常常隨該地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展?fàn)顩r、居住條件、生活飲食習(xí)慣、人口密度等社會環(huán)境和經(jīng)濟(jì)因素而變化[2]。H.pylori根除治療可以促進(jìn)潰瘍的愈合、降低胃癌的發(fā)病率，目前H.pylori根除方案中抗菌藥物組成方案有4種：(1)阿莫西林及克拉霉素，(2)阿莫西林及左氧氟沙星，(3)阿莫西林及呋喃唑酮，(4)四環(huán)素及甲硝唑或呋喃唑酮[3]。隨著這些藥物在各種感染性疾病治療中的廣泛應(yīng)用，H.pylori耐藥菌株不斷增加，已成為影響H.Pylori根除率的嚴(yán)重問題。了解地區(qū)性H.pylori感染及耐藥情況，有利于掌握當(dāng)?shù)氐腍.pylori流行情況并指導(dǎo)臨床選擇合適的治療方案以提高根除率。本研究采用快速尿素酶法(rapid urease testing，RUT)檢測了黔南州280例少數(shù)民族和漢族上消化道疾病患者胃黏膜組織H.pylori感染情況，并進(jìn)行了H.pylori臨床菌株的微需氧分離培養(yǎng)及藥物敏感性試驗(yàn)，報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 質(zhì)控菌株H.pylori菌株NCTC l l637，獲贈(zèng)于中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所，貴州醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室保存。

1.1.2 試劑 快速尿素酶試紙(珠海市克迪科技開發(fā)有限責(zé)任公司)，哥倫比亞培養(yǎng)基(青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)，MH培養(yǎng)基(杭州天和微生物試劑有限公司)，脫纖維綿羊血(采自貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，幽門螺桿菌添加劑(英國，OXOID)，微需氧產(chǎn)氣袋(日本，三菱化學(xué)株式會社)，厭氧罐(日本，三菱化學(xué)株式會社)，H.pylori轉(zhuǎn)送液(100 g/L蔗糖+50%小牛血清)，左氧氟沙星(中國食品藥品檢定研究院，批號130455-201106)，克拉霉素(中國食品藥品檢定研究所130558-200902)，阿莫西林(中國食品藥品檢定研究院，批號130409-201011)，甲硝唑(中國食品藥品檢定研究院，批號100191-200606)。

1.1.3H.pylori16SrDNA特異性引物 采用文獻(xiàn)[4]引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，上游引物5′-CTTGCTA GAGT GCTGAT TA-3′，下游引物5′-TCCCACACTCTA GAATA GT-3′，擴(kuò)增目的片段長度為550 bp。

1.2 方法

1.2.1H.pylori感染的診斷 2013年8月～2014年8月，于胃鏡下采集黔南州人民醫(yī)院消化科胃鏡室行胃鏡檢查的280名上消化道疾病患者的胃竇和胃體處胃黏膜組織各一塊，采用RUT法檢測H.pylori，取少量胃黏膜組織塊置于快速尿素酶試紙內(nèi)，1～3 min內(nèi)觀察試紙呈櫻紅色，判斷為試驗(yàn)陽性。

1.2.2H.pylori的分離培養(yǎng)和鑒定 取RUT試驗(yàn)陽性的胃黏膜組織浸漬于H.pylori轉(zhuǎn)送液，置厭氧罐中微需氧條件下迅速運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室剪碎后接種于含有H.pylori選擇性添加劑的哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基中，37 ℃微需氧條件下培養(yǎng)4～5 d。將疑似菌株經(jīng)革蘭染色初步鑒定后劃線分離培養(yǎng)，挑取單菌落傳代培養(yǎng)并經(jīng)革蘭染色、快速尿素酶試驗(yàn)和H.pylori16S rDNA特異性PCR擴(kuò)增進(jìn)行鑒定。將陽性菌株保存于脫纖維綿羊血中，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 藥物敏感性試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[5]中的美國臨床實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦的改良瓊脂稀釋法檢測H.pylori對阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的敏感性。取2 μL待檢H.pylori菌液分別點(diǎn)種在各含藥MH血瓊脂平板中(克拉霉素、阿莫西林、左氧氟沙星終濃度為1 mg/L，甲硝唑終濃度為8 mg/L)微需氧培養(yǎng)4 d后觀察，若接種點(diǎn)有細(xì)菌生長判為耐藥。實(shí)驗(yàn)均重復(fù)兩次，以NCTC l l637作為質(zhì)控菌株。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察280例上消化道疾病患者H.pylori感染率，比較不同民族、性別、疾病類型患者的H.pylori感染率，觀察各H.pylori臨床菌株對阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的敏感性，比較不同民族來源的臨床分離株對抗菌藥物的耐藥率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對不同民族、性別和疾病類型患者的H.pylori感染率以及不同民族來源臨床分離菌株的耐藥率比較用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1H.pylori感染率

280例上消化道疾病患者H.Pylori感染率為86.1%(241/280)，不同民族和不同性別患者H.Pylori感染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1和表2。不同疾病類型患者H.Pylori感染率比較，消化性潰瘍患者H.Pylori感染率(95.4%)>慢性胃炎患者H.Pylori感染率(84.1%)>胃癌患者H.Pylori感染率(76.9%)，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

2. 2H.pylori分離培養(yǎng)和鑒定

280例臨床標(biāo)本經(jīng)分離培養(yǎng)，共得到微需氧生長、革蘭染色陰性螺桿菌、快速尿素酶試驗(yàn)陽性及16S rDNA鑒定陽性的H.pylori共74株。

2.3 藥物敏感性試驗(yàn)

74株臨床分離H.Pylori對阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的耐藥率分別為5.4%(4/74)、20.3%(15/74)、86.5%(64/74)、29.7%(22/74)，分離自少數(shù)民族與漢族患者的H.Pylori對4種抗生素耐藥率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

表1 不同民族上消化道疾病患者胃黏膜H. Pylori感染率

表2 不同性別上消化道疾病患者胃黏膜H. Pylori感染率

表3 不同類型上消化道疾病患者胃黏膜H. Pylori感染率

表4 不同民族患者H. Pylori菌株藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

我國H.pylori感染率較歐美等發(fā)達(dá)國家偏高，成人感染率達(dá)到42.0%～84.6%，各地區(qū)報(bào)道數(shù)據(jù)不盡相同[6]。本研究結(jié)果顯示黔南州醫(yī)院上消化道疾病患者H.pylori感染率為86.1%，與董秋萍等[7]報(bào)道的83.23%基本相符，處于國內(nèi)較高水平。黃頻等[8]報(bào)道男性上消化道疾病患者H.pylori感染率高于女性患者，而本研究中上消化道患者的H.pylori感染率卻無性別差異。本研究中也未顯示出H.pylori感染率的民族差異，可能與兩類人群混雜聚居、生活飲食習(xí)慣逐漸同化等因素有關(guān)。H.pylori感染后可通過誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)黏膜上皮組織增生與異常凋亡，調(diào)節(jié)癌基因與抑癌基因，并產(chǎn)生尿素酶、空泡毒素等致病因子引發(fā)慢性胃炎、消化性潰瘍、胃癌及胃黏膜相關(guān)惡性淋巴瘤等疾病[9]，本研究顯示280例上消化道疾病患者中消化性潰瘍患者的H.pylori感染率最高(95.4%)，而胃癌患者感染率最低(76.9%)。這與李雪梅等[10]報(bào)道的胃癌組患者H.pylori感染率高于其他上消化道疾病組不一致，可能與近年來社會環(huán)境或飲食習(xí)慣等非幽門螺桿菌感染因素(如吸煙、飲酒)導(dǎo)致胃癌所占比重升高有關(guān)[11]。本研究資料顯示3種疾病類型的患者H.pylori感染率均高于75%，提示H.pylori感染是導(dǎo)致本地區(qū)上消化道疾病尤其是消化性潰瘍的重要因素，有必要對這些患者實(shí)施有效的H.pylori根除治療以促進(jìn)潰瘍的愈合、降低胃癌的發(fā)病率。

然而，隨著臨床上抗生素的廣泛使用，使得H.pylori對抗生素的耐藥問題日益突出。H.pylori耐藥率在不同國家和地區(qū)不盡相同。了解地區(qū)性H.Pylori菌株耐藥率變化趨勢有助于該地區(qū)選擇合適的抗生素進(jìn)行根除治療及采取有效的應(yīng)對措施以提高H.Pylori根除率。

甲硝唑?qū)傧趸溥蝾愃幬铮湓谖竷?nèi)的作用不受胃酸的影響，具有高穩(wěn)定性和高活性，且價(jià)格便宜，往往被作為治療H.Pylori感染的首選藥物之一。但由于甲硝唑的廣泛使用，尤其在口腔疾病和婦科疾病中的廣泛使用，導(dǎo)致國內(nèi)外普遍報(bào)道H.Pylori耐藥菌株正日益增多。Francis Mégraud等[5]報(bào)道，H.pylori對甲硝唑的耐藥率為20%～80%(平均30%～40%)，楊天敢等[12]報(bào)道浙江省臺州地區(qū)甲硝唑耐藥率高于93%。本研究分離的74株Hp對甲硝唑的耐藥率高達(dá)86.5%，高于劉苓等[13]報(bào)道的臨近地區(qū)貴陽H.pylori甲硝唑耐藥率63.33%，提示本地區(qū)H.pylori對甲硝唑的耐藥率已達(dá)到較高水平，應(yīng)引起臨床的注意?？死顾貙俅蟓h(huán)內(nèi)酯類抗生素，具有耐酸、能溶解于低pH胃液中的特性，口服后生物利用度好，不良反應(yīng)少，被認(rèn)為是H.pylori根除治療方案中最有效的抗生素。因其價(jià)格偏高，十年前在中國并不常將其用于H.pylori的根除治療。隨著人民生活水平和經(jīng)濟(jì)狀況的改善，克拉霉素在臨床上的應(yīng)用也越來越廣泛，導(dǎo)致了H.pylori對克拉霉素的耐藥率呈現(xiàn)出增高趨勢。其耐藥機(jī)制與H.Pylori23SrRNA V區(qū)基因突變使克拉霉素與細(xì)菌核糖體50S亞基結(jié)合能力降低有關(guān)[14]。本文結(jié)果顯示黔南州醫(yī)院分離到的H.pylori菌株對克拉霉素的耐藥率達(dá)到了29.7%，與貴陽地區(qū)33.33%的耐藥率接近，明顯高于原素梅等[15]報(bào)道的7.4%及杜軍等[16]報(bào)道的9.17%耐藥率。根據(jù)第四次全國處理共識報(bào)告意見，當(dāng)克拉霉素耐藥率高于15%～20%時(shí)，則不宜再選用含有甲硝唑或克拉霉素的標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)療法作為根除H.pylori的一線方案，而推薦鉍劑四聯(lián)療法作為一線治療方案。阿莫西林、左氧氟沙星因其耐藥率低可作為根除H.pylori的主要抗生素[3,17]。本研究中H.Pylori對左氧氟沙星的耐藥率為20.3%，低于對甲硝唑和克拉霉素的耐藥率。綜合上述耐藥資料，在本地區(qū)行H.Pylori根除治療時(shí)可優(yōu)先選用阿莫西林，遇到克拉霉素和甲硝唑耐藥菌株時(shí)可選用左氧氟沙星，如能根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用2種敏感抗生素配合質(zhì)子泵抑制劑及鉍劑進(jìn)行治療更利于根除H.Pylori。

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(2015-05-20收稿，2015-06-30修回)

中文編輯： 周 凌； 英文編輯： 劉 華

Prevalence and Antibiotic Resistance ofHelicobacterpyloriIsolated from 280 Patients Accepting Gastroscopy in Qiannan Autonomous Prefecture

PAN Ke1, ZHANG Renhong1, ZHENG Juan1, ZHANG Dandan1, CHEN Zhenghong2, WANG Fei2, WEI Gang2, QI Tingna2

(1.DepartmentofGastrointestinalMedicine,People'sHospitalofQiannanAutonomousPrefecture,Duyun558000,Guizhou,China; 2.DepartmentofMicrobiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550025,Guizhou,China)

Objective: To investigate infection situation and antibiotic resistance ofHelicobacterpyloriisolated from 280 patients undergoing gastroscopy in Qiannan autonomous prefecture. Methods: A total of 280 patients undergoing gastroscopy in Qiannan autonomous prefecture were enrolled in this study. Gastric mucosal specimens were collected and rapid urease testing(RUT)was used to diagnoseH.pyloriinfection.H.pyloriinfection rates of different nationality, different sex and different disease type were compared. The positive gastric mucosa tissue in RUT test underwent microaerophilic isolation and culture. Modified agar dilution method was adopted to detect antibiotic susceptibility of clinlicalH.pyloristrains to amoxicillin, levofloxacin, metronidazole and clarithromycin, and antibiotic resistance rates of clinlicalH.pyloristrains of different nationality were compared. Results: Among 280 patients with disease of upper digestive tract,H.pyloriinfection rate was 86.1% (241/280). There were no statistically significant differences ofH.pyloriinfection rate in different nationality and genderP>0.05).H.Pyloriinfection rate of patients with peptic ulcer was highest (95.4%), followed by chronic gastritis (84.1%) and gastric cancer (76.9%),P<0.05. 74H.pyloriisolates were obtained by microaerophilic culture. The resistance rate of 74H.pyloriisolates to amoxicillin, levofloxacin, metronidazole and clarithromycin was 5.4% (4/74), 20.3% (15/74), 86.5% (64/74), 29.7% (22/74), respectively and there were no statistically significant differences between Han and minority patients (P>0.05). Conclusion:H.pyloriwas the major factor that contributes to upper gastrointestinal diseases occuring in the people's hospital of Qiannan autonomous prefecture. The resistance rates ofH.pylorito metronidazole and clarithromycin were higher compared with amoxicillin and levofloxacin .

Helicobacterpylori; infection; antibiotics; drug resistance

國家自然科學(xué)基金(81460314)； 貴州省科技廳-貴陽醫(yī)學(xué)院聯(lián)合基金[黔科合LG字(2012)010]

時(shí)間：2015-08-07

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150807.2252.026.html

R378；R573

A

1000-2707(2015)09-0930-05

**通信作者 E-mail:qitingna77@163.com