何偉聰 董曉慧,2* 譚北平,2 楊奇慧 遲淑艷 劉泓宇 章 雙

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524088；2.南海生物資源開(kāi)發(fā)與利用協(xié)同創(chuàng)新中心，廣州510006)

?

益生菌對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、消化酶和免疫酶活性的影響

何偉聰1董曉慧1,2*譚北平1,2楊奇慧1遲淑艷1劉泓宇1章 雙1

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524088；2.南海生物資源開(kāi)發(fā)與利用協(xié)同創(chuàng)新中心，廣州510006)

本試驗(yàn)旨在研究枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌單獨(dú)或混合添加于飼料中對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、消化酶和免疫酶活性的影響。選取平均體重為(22.00±0.15) g的健康軍曹魚(yú)幼魚(yú)840尾，隨機(jī)分成7組(T0、T1、T2、T3、T4、T5、T6組)，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40尾魚(yú)。T0組為對(duì)照組，投喂基礎(chǔ)飼料50 d；T1、T2和T3組前30天分別投喂含1×107CFU/g枯草芽孢桿菌、1×107CFU/g嗜酸乳桿菌、2×107CFU/g枯草芽孢桿菌與嗜酸乳桿菌混合物(枯草芽孢桿菌∶嗜酸乳桿菌=1∶1，質(zhì)量比)的飼料，后20天投喂基礎(chǔ)飼料；T4、T5和T6組分別投喂含1×107CFU/g枯草芽孢桿菌、1×107CFU/g嗜酸乳桿菌、2×107CFU/g枯草芽孢桿菌與嗜酸乳桿菌混合物的飼料50 d。結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，T1、T2組的增重率(WGR)無(wú)顯著差異(P>0.05)，T3、T4、T5、T6組的WGR則顯著升高(P<0.05)，最大值出現(xiàn)在T6組，且顯著高于其他各組(P<0.05)。特定生長(zhǎng)率(SGR)的變化趨勢(shì)與WGR類(lèi)似。T2、T3、T4、T5、T6組的飼料系數(shù)(FCR)顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，同時(shí)T4和T6組還顯著低于其他益生菌添加組(P<0.05)。飼料中添加益生菌能顯著提高肝臟淀粉酶及肝臟和腸道蛋白酶活性(P<0.05)；對(duì)照組及T3和T4組腸道淀粉酶活性顯著低于T5和T6組(P<0.05)，顯著高于T1和T2組(P<0.05)。各益生菌添加組血清溶菌酶活性均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。持續(xù)投喂益生菌組(T4、T5、T6組)血清總超氧化物歧化酶活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且T6組還顯著高于T4和T5組(P<0.05)，非持續(xù)投喂益生菌組(T1、T2、T3組)中除T1組外均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。與對(duì)照組相比，飼料中添加益生菌顯著降低血清堿性磷酸酶活性(P<0.05)；血清酸性磷酸酶活性除T2和T3組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)、T6與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)外，其余各組均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。本試驗(yàn)條件下，飼料中添加枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌或二者的混合物(質(zhì)量比1∶1)均能夠促進(jìn)軍曹魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)，提高免疫酶和消化酶活性，持續(xù)投喂效果優(yōu)于非持續(xù)投喂，以持續(xù)投喂2種益生菌混合物的效果最佳。

軍曹魚(yú)；益生菌；生長(zhǎng)性能；免疫酶；消化酶

軍曹魚(yú)(Rachycentroncanadum)隸屬鱸形目(Perciformes)，鱸亞目(Percoidei)，軍曹魚(yú)科(Rachycentridae)，軍曹魚(yú)屬(Rachycentron)，俗稱(chēng)海鱺、海龍魚(yú)，具有個(gè)體大、生長(zhǎng)快、營(yíng)養(yǎng)豐富、肉質(zhì)細(xì)膩、味道鮮美等特點(diǎn)，是當(dāng)前我國(guó)南方海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖的優(yōu)良品種之一[1-2]。近年來(lái)，隨著高密度集約化養(yǎng)殖模式的推廣，養(yǎng)殖密度過(guò)大及養(yǎng)殖水體惡化等問(wèn)題導(dǎo)致軍曹魚(yú)病害頻發(fā)，為控制病害而大量使用的抗生素不僅破壞了養(yǎng)殖水體生態(tài)系統(tǒng)，而且因水產(chǎn)品中的藥物殘留帶來(lái)食品安全問(wèn)題。為了更好地解決養(yǎng)殖病害和食品安全等問(wèn)題，確保水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展，尋找綠色環(huán)保、安全高效的抗生素替代品成為目前的研究熱點(diǎn)。由于在生產(chǎn)上通過(guò)在飼料中添加免疫增強(qiáng)劑來(lái)防止魚(yú)類(lèi)疾病的方法簡(jiǎn)單易行，且具有良好效果，因此越來(lái)越受到人們的關(guān)注。而免疫增強(qiáng)劑中的益生菌由于具有提高養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)性能、免疫力、抗病力作用且無(wú)殘留、無(wú)毒副、對(duì)環(huán)境無(wú)不良影響，成為最有潛力的抗生素替代品。

益生菌是指在一定濃度范圍內(nèi)可以促進(jìn)動(dòng)物健康的活體微生物[3]，主要有芽孢桿菌類(lèi)、乳酸菌類(lèi)、酵母菌和光合細(xì)菌等，我國(guó)已批準(zhǔn)部分品種在養(yǎng)殖業(yè)和飼料業(yè)中應(yīng)用。益生菌的作用機(jī)理主要為：自身富含蛋白質(zhì)、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；其在增殖的過(guò)程中分泌的酶類(lèi)可促進(jìn)宿主對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收；生長(zhǎng)過(guò)程中通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)空間和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而抑制致病菌的生長(zhǎng)；自身的結(jié)構(gòu)成分如肽聚糖等能刺激宿主免疫系統(tǒng)，進(jìn)而提高免疫力[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加不同水平的益生菌可提高凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)[6-7]、牙鲆(Paralichthysolivaceus)[8]、羅非魚(yú)(Oreochromisspp.)[9]、金頭鯛(Sparusauratus)[10-11]等的生長(zhǎng)性能、相關(guān)酶活性和抗病力。飼料中添加益生菌對(duì)軍曹魚(yú)生長(zhǎng)、免疫等指標(biāo)影響的研究?jī)H見(jiàn)于本實(shí)驗(yàn)室報(bào)道，而益生菌不同投喂方式對(duì)軍曹魚(yú)生長(zhǎng)等指標(biāo)影響的研究未見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在探討持續(xù)與非持續(xù)投喂添加單一或復(fù)合益生菌的飼料對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、消化酶和免疫酶活性的影響，從而為益生菌在軍曹魚(yú)養(yǎng)殖中高效、合理地應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼料制作

以魚(yú)粉、去皮豆粕為蛋白質(zhì)源，魚(yú)油、玉米油和大豆磷脂油為脂肪源，制成粗蛋白質(zhì)含量46%、粗脂肪含量8%的基礎(chǔ)飼料(表1)，在基礎(chǔ)飼料中分別添加枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌及二者的混合物(枯草芽孢桿菌∶嗜酸乳桿菌=1∶1，質(zhì)量比)，配制成有效活菌數(shù)分別為1.0×107、1.0×107、2.0×107CFU/g的3種試驗(yàn)飼料，上述菌種均購(gòu)自廣東省微生物菌種保藏中心(GIMCC)。飼料原料經(jīng)粉碎后過(guò)60目篩，按照配方比例準(zhǔn)確稱(chēng)重后混勻，微量組分以逐級(jí)擴(kuò)大法添加混合，之后加入預(yù)先混勻的魚(yú)油、大豆磷脂油和玉米油，搓散油脂顆粒后攪拌混合15 min，分別加入氯化膽堿溶液、一水合磷酸二氫鈣溶液，繼續(xù)攪拌5 min，然后按處理將不同的菌液添加水分稀釋后加入到正在攪拌的飼料中，繼續(xù)攪拌10 min，用F-26型雙螺桿擠條機(jī)將攪拌均勻的飼料壓制成粒徑為3.0 mm的顆粒飼料，風(fēng)干后用封口袋編號(hào)分裝，于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，并檢測(cè)飼料樣品中有效活菌數(shù)。

1.2 試驗(yàn)用魚(yú)及飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在廣東省湛江市南三島海域廣東粵海飼料有限公司深水網(wǎng)箱系統(tǒng)中進(jìn)行。試驗(yàn)用魚(yú)購(gòu)于海南省瓊海市博鰲鎮(zhèn)某魚(yú)苗場(chǎng)。試驗(yàn)開(kāi)始前，軍曹魚(yú)幼魚(yú)先在網(wǎng)箱(3.0 m×3.0 m×4.5 m)中暫養(yǎng)2周，期間投喂商品飼料(廣東粵海飼料有限公司產(chǎn)品，粗蛋白質(zhì)含量44%)，使其適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境和飼料。暫養(yǎng)期結(jié)束后，饑餓24 h后，挑選健壯無(wú)傷、規(guī)格一致[平均體重(22.00±0.15) g]的軍曹魚(yú)幼魚(yú)隨機(jī)分配到21個(gè)網(wǎng)箱(1.5 m×2.0 m×2.5 m)中，每個(gè)網(wǎng)箱放養(yǎng)40尾魚(yú)。根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將試驗(yàn)魚(yú)分為7個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)(網(wǎng)箱)。對(duì)照組(T0組)投喂基礎(chǔ)飼料；T1、T2和T3組在前30天分別投喂含枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌+嗜酸乳桿菌飼料，后20天投喂基礎(chǔ)飼料；T4、T5和T6組分別持續(xù)投喂含枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌+嗜酸乳桿菌飼料50 d。每天投喂2次(07:00、17:00)，日投喂量為體重的5%～10%，水溫29.5～34.0 ℃，鹽度16‰～20‰，溶解氧濃度≥6 mg/L，試驗(yàn)期50 d。

1.3 樣品采集及分析方法

1.3.1 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束饑餓24 h后，將每個(gè)網(wǎng)箱中的軍曹魚(yú)全部撈出，用丁香酚(1∶10 000)麻醉后稱(chēng)重、計(jì)數(shù)。每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)選取6尾魚(yú)心臟采血，采集的血樣放入不含抗凝劑的1.5 mL的離心管中，在冰上靜置4 h，然后4 ℃條件下4 000 r/min離心10 min，收集血清，分裝后于-80 ℃冰箱保存待測(cè)。每個(gè)網(wǎng)箱再隨機(jī)取5尾魚(yú)解剖取肝臟、腸道(前、后腸)，于-80 ℃超低溫冰箱保存待測(cè)。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1)維生素預(yù)混料為每千克飼料提供The vitamin premix provided the following per kg of the diet:VA 12 000 IU，VD 4 000 IU，VE 400 mg，VK340 mg，VB160 mg，VB2200 mg，VB640 mg，VB120.4 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 280 mg，煙酸nicotinic acid 800 mg，生物素 biotin 6 mg，葉酸 folic acid 15 mg，肌醇 inositol 400 mg，對(duì)氨基苯甲酸 PABA 400 mg，β-胡蘿卜素 β-carotene 12 mg。

2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供The mineral premix provided the following per kg of the diet:KCl 953.47 mg，MgSO4·7H2O 1 024.44 mg，檸檬酸鐵 ferric citrate 850.25 mg，ZnSO4·7H2O 353.57 mg，CuSO4·5H2O 59.84 mg，MnSO4·H2O 96.26 mg，CoCl2·6H2O 8.16 mg，Na2SeO34.47 mg。

3)測(cè)定值 Measured values。

1.3.2 指標(biāo)測(cè)定

飼料常規(guī)成分測(cè)定：采用AOAC(2005)[12]中方法進(jìn)行。其中，水分含量測(cè)定采用105 ℃烘干恒重法；粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用凱氏定氮法;粗脂肪含量測(cè)定采用索氏抽提法；粗灰分含量測(cè)定采用箱式電阻爐550 ℃灼燒法。

血清免疫酶活性測(cè)定：堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、溶菌酶(LZM)活性均采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測(cè)定，樣品前處理、試劑配制和測(cè)定步驟嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

肝臟及腸道淀粉酶(AMS)、蛋白酶(PRS)活性測(cè)定：稱(chēng)取適量組織，并記下其準(zhǔn)確重量，按照組織樣品與生理鹽水1∶9的比例加入生理鹽水，并在冰水浴條件下勻漿，制成10%組織勻漿液，4 ℃條件下2 500 r/min離心15 min，小心吸取上清液分裝，進(jìn)行測(cè)定。AMS活性測(cè)定嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說(shuō)明書(shū)執(zhí)行，PRS活性測(cè)定采用福林酚試劑法[13]，以每毫克組織蛋白質(zhì)在37 ℃下每分鐘水解酪蛋白生成1 μg酪氨酸作為1個(gè)酶活性單位。

1.4 計(jì)算公式

增重率(WGR,%)=100×

(末均重-初均重)/初均重；

特定生長(zhǎng)率(SGR,%/d)=100×(ln末均重-

ln初均重)/飼養(yǎng)天數(shù)；

飼料系數(shù)(FCR)=攝食飼料總重/

(末均重-初均重)；

成活率(SR,%)=100×終末尾數(shù)/

初始尾數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。用SPSS 19.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，當(dāng)組間差異顯著(P<0.05)時(shí)，進(jìn)行Duncan氏法多重比較。

2 結(jié) 果

2.1 益生菌對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，飼料中添加益生菌對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，其中持續(xù)投喂組(T4、T5、T6組)的WGR和SGR均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，同時(shí)T4和T5組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，但均顯著低于T6組(P<0.05)。非持續(xù)投喂組(T1、T2和T3組)間WGR和SGR無(wú)顯著差異(P>0.05)。T1和T2組的WGR與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，但T3組的WGR則顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；T1組的SGR與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，T2、T3組的SGR則顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。此外，與對(duì)照組相比，各益生菌添加組軍曹魚(yú)幼魚(yú)的FCR均顯著降低(P<0.05)，連續(xù)投喂組的FCR均優(yōu)于非連續(xù)投喂組，其中T4和T6組的FCR顯著低于其他益生菌添加組(P<0.05)。各組的成活率無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 益生菌對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無(wú)字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 益生菌對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)肝臟及腸道消化酶活性的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，飼料中添加益生菌顯著提高軍曹魚(yú)幼魚(yú)肝臟AMS活性(P<0.05)，其中T6組的肝臟AMS活性顯著高于其他益生菌添加組(P<0.05)，而其他益生菌添加組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。T5和T6組的前腸AMS活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而T1和T2組則顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，T3、T4組則與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。T4組的后腸AMS活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且顯著高于T1、T2、T5組(P<0.05)，但與T3、T6組無(wú)顯著差異(P>0.05)。此外，與對(duì)照組相比，各益生菌添加組的肝臟、前腸和后腸PRS活性顯著提高(P<0.05)，同時(shí)持續(xù)投喂組均顯著高于非持續(xù)投喂組(P<0.05)。T6組的肝臟和前腸PRS活性與T5組無(wú)顯著差異(P>0.05)，但顯著高于T4組(P<0.05)；T6組的后腸PRS活性顯著高于其他益生菌添加組(P<0.05)，T4與T5組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 益生菌對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)肝臟及腸道消化酶活性的影響

續(xù)表3項(xiàng)目Items組別GroupsT0T1T2T3T4T5T6蛋白酶PRS肝臟liver1．026±0．023e1．405±0．034c1．232±0．061d1．443±0．031c1．635±0．088b1．758±0．031a1．768±0．045a前腸foregut1．705±0．047d1．759±0．040c1．727±0．031d1．780±0．030bc1．792±0．021b1．799±0．026ab1．826±0．030a后腸hindgut2．235±0．075e2．665±0．124d2．724±0．039c2．758±0．020c2．820±0．115b2．832±0．100b2．885±0．097a

2.3 益生菌對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)血清免疫酶活性的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，各益生菌添加組軍曹魚(yú)幼魚(yú)血清LZM活性均顯著提高(P<0.05)，血清LZM活性在各組之間均具有顯著差異(P<0.05)，以T6組最高。與對(duì)照組相比，持續(xù)投喂組能顯著提高血清T-SOD活性(P<0.05)，且持續(xù)投喂復(fù)合益生菌組(T6組)顯著高于持續(xù)投喂單一益生菌組(T4、T5組)；血清T-SOD活性在非持續(xù)

投喂益生菌組中，T1組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，T2和T3組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。與對(duì)照組相比，飼料中添加益生菌能顯著降低血清AKP活性(P<0.05)。T3、T4和T5組血清ACP活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，T1和T2組則顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，T6組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 益生菌對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)血清免疫酶活性的影響

3 討 論

目前益生菌已經(jīng)以不同的方式(如拌料投喂、投入到水中、強(qiáng)化活餌等)運(yùn)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)當(dāng)中，Wang等[9]每隔4 d用1×107CFU/mL的糞腸球菌(Enteroccusfaecium)ZJ4處理羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus)養(yǎng)殖水體，結(jié)果表明，經(jīng)益生菌處理的養(yǎng)殖水體中的羅非魚(yú)體增重和日增重顯著高于未處理的對(duì)照組。華雪銘等[14]發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加芽孢桿菌(Bacillussp.)和硒酵母可顯著促進(jìn)異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)的生長(zhǎng)。在大菱鲆(Scophthalmusmaximus)[15]、草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellus)[16]、牙鲆[8,17]、青魚(yú)(Mylopharyngodonpiceus)[18]、吉富羅非魚(yú)(GIFT)[19]、斜帶石斑魚(yú)(Epinepheluscoioides)[20]等養(yǎng)殖對(duì)象飼料中添加不同益生菌的研究結(jié)果均表明益生菌能在一定程度上促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)，提高動(dòng)物的WGR。本試驗(yàn)中，各益生菌添加組的WGR和SGR均優(yōu)于對(duì)照組，從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，持續(xù)投喂益生菌的效果優(yōu)于非持續(xù)投喂，復(fù)合益生菌效果優(yōu)于單一益生菌。連續(xù)投喂復(fù)合益生菌的T6組的WGR比對(duì)照組提高了28.49%，與上述研究結(jié)果相似。據(jù)報(bào)道，復(fù)合益生菌比單一益生菌更能提高大菱鲆的存活率及其生長(zhǎng)性能[15]。Zokaeifar等[6]報(bào)道，2株枯草芽孢桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦的WGR、SGR有顯著提高，但不影響FCR。另有研究認(rèn)為飼料中不同濃度的枯草芽孢桿菌對(duì)青魚(yú)的體增重和FCR無(wú)顯著影響[18]，不同濃度的嗜酸乳酸菌不影響吉富羅非魚(yú)的增重和FCR[19]。上述試驗(yàn)結(jié)果的不同可能源于益生菌的種類(lèi)和添加量、試驗(yàn)動(dòng)物種類(lèi)和規(guī)格的不同，且益生菌的活性及其對(duì)水生動(dòng)物作用還受到養(yǎng)殖環(huán)境如鹽度、溫度等因素的影響[21]。目前研究認(rèn)為益生菌促進(jìn)魚(yú)體生長(zhǎng)主要在于進(jìn)入魚(yú)體消化道的益生菌富含蛋白質(zhì)，易被機(jī)體吸收，其次進(jìn)入消化道的益生菌能夠定植下來(lái)，抑制和排除有害菌，達(dá)到維持或恢復(fù)腸內(nèi)菌群的平衡，使機(jī)體處于良好的狀態(tài)，利于對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[22-23]。此外，腸道內(nèi)的益生菌在增殖過(guò)程中會(huì)分泌代謝酶類(lèi)，補(bǔ)充內(nèi)源性酶或?qū)Ⅳ~(yú)體不能消化的大分子物質(zhì)分解成易被腸道細(xì)胞吸收的小分子物質(zhì)，進(jìn)而更利于魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼料中添加枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌或二者(質(zhì)量比1∶1)的混合物均可提高軍曹魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能、免疫力及消化酶活性，且持續(xù)投喂復(fù)合益生菌效果優(yōu)于非持續(xù)或單一投喂益生菌，說(shuō)明本試驗(yàn)選擇的2種益生菌在消化道中具有協(xié)同作用。

[1] 艾春香.軍曹魚(yú)的養(yǎng)殖生物學(xué)特性及營(yíng)養(yǎng)需求[J].飼料研究,2004(2):41-44 .

[2] 勾效偉,區(qū)又君,廖銳.我國(guó)軍曹魚(yú)研究現(xiàn)狀[J].海洋漁業(yè),2007,29(1):84-89.

[4] FULLER R.Probiotics in man and animals[J].Journal of Applied Bacteriology,1989,66(5):365-378.

[5] BOMBA A,NEMCOVR,MUDROOVD,et al.The possibilities of potentiating the efficacy of probiotics[J].Trends in Food Science & Technology,2002,13(4):121-126.

[6] ZOKAEIFAR H,BALCZAR J L,SAAD C R,et al.Effects ofBacillussubtilison the growth performance,digestive enzymes,immune gene expression and disease resistance of white shrimp,Litopenaeusvannamei[J].Fish & Shellfish Immunology,2012,33(4):683-689.

[7] 楊世平,吳灶和,簡(jiǎn)紀(jì)常.飼料中添加沼澤生紅冬孢酵母對(duì)凡納濱對(duì)蝦消化酶及腸道微生物的影響[J].水產(chǎn)科學(xué),2011,30(7):391-394.

[8] KIM J S,HARIKRISHNAN R,KIM M C,et al.Dietary administration ofZooshikellasp.enhance the innate immune response and disease resistance ofParalichthysolivaceusagainstSreptococcusiniae[J].Fish & Shellfish Immunology,2010,29(1):104-110.

[9] WANG Y B,TIAN Z Q,YAO J T,et al.Effect of probiotics,Enteroccusfaecium,on tilapia (Oreochromisniloticus) growth performance and immune response[J].Aquaculture,2008,277(3):203-207.

[10] VARELA J L,RUIZ-JARABO I,VARGAS-CHACOFF L,et al.Dietary administration of probiotic Pdp11 promotes growth and improves stress tolerance to high stocking density in gilthead seabreamSparusauratus[J].Aquaculture,2010,309(1/2/3/4):265-271.

[11] CEREZUELA R,GUARDIOLA F A,GONZLEZ P,et al.Effects of dietary Bacillus subtilis,Tetraselmischuii,andPhaeodactylumtricornutum,singularly or in combination,on the immune response and disease resistance of sea bream (SparusaurataL.)[J].Fish & Shellfish Immunology,2012,33(2):342-349.

[12] AOAC.Official methods of analysis of AOAC International[S].18th ed.Gaithersburg:AOAC International,2005.

[13] 白燕,王維新.刺參腸道蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶與纖維素酶活性的測(cè)定方法[J].飼料工業(yè),2012,33(20):28-32.

[14] 華雪銘,周洪琪,邱小琮,等.飼料中添加芽孢桿菌和硒酵母對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)及抗病力的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2001,25(5):448-453.

[15] 高鳳祥,郭文,潘雷,等.幾種益生菌對(duì)大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)及消化酶活性的影響[J].海洋科學(xué),2011,35(1):10-16.

[16] 沈文英,李衛(wèi)芬,梁權(quán),等.飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能、免疫和抗氧化功能的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2011,23(5):881-886.

[17] HEO W S,KIM Y R,KIM E Y,et al.Effects of dietary probiotic,Lactococcuslactissubsp.lactis I2,supplementation on the growth and immune response of olive flounder (Paralichthysolivaceus)[J].Aquaculture,2013,376-379:20-24.

[18] 沈斌乾,陳建明,郭建林,等.飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)青魚(yú)生長(zhǎng)、消化酶活性和魚(yú)體組成的影響[J].水生生物學(xué)報(bào),2013,17(1):48-53.

[19] 劉小玲,曹俊明,鄺哲師,等.嗜酸乳酸菌對(duì)吉富羅非魚(yú)生長(zhǎng)、非特異性免疫酶活性和腸道菌群的影響[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,40(1):123-126.

[20] SON V M,CHANG C C,WU M C,et al.Dietary administration of the probiotic,Lactobacillusplantarum,enhanced the growth,innate immune responses,and disease resistance of the grouperEpinepheluscoioides[J].Fish & Shellfish Immunology,2009,26(5):691-698.

[21] 程遠(yuǎn),黃凱,黃秀蕓,等.飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)吉富羅非魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、免疫力和抗氧化功能的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2014,26(6):1503-1512.

[22] 郭升偉.益生素對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能、血液生化指標(biāo)及免疫功能的影響[D].碩士學(xué)位論文.福州:福建農(nóng)林大學(xué),2010.

[23] 劉波.益生素對(duì)異育銀鯽消化酶活性、腸道菌群及生產(chǎn)性能的影響[D].碩士學(xué)位論文.南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2004.

[24] 江永明,付天璽,張麗,等.微生物制劑對(duì)奧尼羅非魚(yú)生長(zhǎng)及消化酶活性的影響[J].水生生物學(xué)報(bào),2011,35(6):998-1004.

[25] 陳南南.餌料中添加芽孢桿菌對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)的影響及機(jī)理探討[D].碩士學(xué)位論文.杭州:浙江大學(xué),2010.

[26] 劉小剛,周洪琪,華雪銘,等.微生態(tài)制劑對(duì)異育銀鯽消化酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2002,26(5):448-452.

[27] 劉陽(yáng).地衣芽孢桿菌KL6對(duì)鯉魚(yú)生產(chǎn)性能及消化酶活性的影響[D].碩士學(xué)位論文.天津:天津師范大學(xué),2012.

[28] SUN Y Z,YANG H L,MA R L,et al.Effect of dietary administration ofPsychrobactersp.on the growth,feed utilization,digestive enzymes and immune responses of grouperEpinepheluscoioides[J].Aquaculture Nutrition,2011,17(3):e733-e740.

[29] S?GAARD H,SUHR-JESSEN T.Microbials for feed:beyond lactic acid bacteria[J].Feed International,1990,11(1):32-34,36-38.

[30] 付天璽,魏開(kāi)建,許國(guó)煥.芽孢桿菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究和應(yīng)用概況[J].水利漁業(yè),2007,27(3):102-104.

[31] 張春曉,王玲,孫鳴,等.枯草芽孢桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和免疫的影響[J].飼料研究,2010(12):55-58.

[32] CHIU C H,CHENG C H,GUA W R,et al.Dietary administration of the probiotic,SaccharomycescerevisiaeP13,enhanced the growth,innate immune responses,and disease resistance of the grouper,Epinepheluscoioides[J].Fish & Shellfish Immunology,2010,29(6):1053-1059.

[33] SUN Y Z,YANG H L,MA R L,et al.Probiotic applications of two dominant gutBacillusstrains with antagonistic activity improved the growth performance and immune responses of grouperEpinepheluscoioides[J].Fish & Shellfish Immunology,2010,29(5):803-809.

[34] HARIKRISHNAN R,BALASUNDARAM C,HEO M S.Effect of probiotics enriched diet onParalichthysolivaceusinfected with lymphocystis disease virus (LCDV)[J].Fish & Shellfish Immunology,2010,29(5):868-874.

[35] GIRI S S,SUKUMARAN V,OVIYA M.Potential probioticLactobacillusplantarumVSG3 improves the growth,immunity,and disease resistance of tropical freshwater fish,Labeorohita[J].Fish & Shellfish Immunology,2013,34(2):660-666.

[36] 李桂英,宋曉玲,孫艷,等.幾株腸道益生菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異免疫力和抗病力的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2011,18(6):1358-1367.

[37] SALINAS I,ABELLI L,BERTONI F,et al.Monospecies and multispecies probiotic formulations produce different systemic and local immunostimulatory effects in the gilthead seabream (SparusaurataL.)[J].Fish & Shellfish Immunology,2008,25(1/2):114-123.

[38] 劉曉勇,張穎,齊茜,等.枯草芽孢桿菌對(duì)雜交鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、消化酶活性及非特異性免疫的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2011,18(6):1315-1320.

[39] 李小梅,楊麗冬,張家學(xué),等.一種復(fù)合益生菌對(duì)斜帶石斑魚(yú)生長(zhǎng)及免疫特性影響研究[J].飼料工業(yè),2015,36(2):30-33.

[40] SUN Y Z,YANG H L,MA R L,et al.Effect ofLactococcuslactisandEnterococcusfaeciumon growth performance,digestive enzymes and immune response of grouperEpinepheluscoioides[J].Aquaculture Nutrition,2012,18(3):281-289.

[41] SUN Y Z,YANG H L,HUANG K P,et al.Application of autochthonousBacillusbioencapsulated in copepod to grouperEpinepheluscoioideslarvae[J].Aquaculture,2013,392-395:44-50.

[42] 袁豐華,林黑著,李卓佳,等.凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)尖吻鱸的生長(zhǎng)、消化酶及非特異性免疫酶的影響[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2010,19(6):792-797.

[43] 林黑著,袁豐華,李卓佳,等.光合細(xì)菌PS2對(duì)尖吻鱸的生長(zhǎng)、消化酶及非特異性免疫酶的影響[J].南方水產(chǎn),2010,6(1):25-29.

*Corresponding author, professor, E-mail: dongxiaohui2003@163.com

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Effects of Probiotics on Growth Performance, Digestive Enzyme and Immune Enzyme Activities of Juvenile Cobia (Rachycentroncanadum)

HE Weicong1DONG Xiaohui1,2*TAN Beiping1,2YANG Qihui1CHI Shuyan1LIU Hongyu1ZHANG Shuang1

(1.LaboratoryofAquaticAnimalNutritionandFeed,FisheriesCollege,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524088,China; 2.SouthChinaSeaBio-ResourceExploitationandUtilizationCollaborativeInnovationCenter,Guangzhou510006,China)

This experiment was conducted to study the effects ofBacillussubtilisandLactobacillusacidophilusas separate or mixed in diets on the growth performance, digestive enzyme and immune enzyme activities of juvenile cobia (Rachycentroncanadum). Eight hundred and forty healthy juvenile cobia with an initial body weight of (22.00±0.15) g were randomly divided into 7 groups (groups T0, T1, T2, T3, T4, T5 and T6, respectively) with 3 replicates per group and 40 fish per replicate. The group T0 was used as control group, and fish in this group were fed a basal diet for 50 days; the fish in groups T1, T2 and T3 were fed diets containing 1×107CFU/gB.subtilis, 1×107CFU/gL.acidophilusand 2×107CFU/gB.subtilisandL.acidophilusmixture (mass ratio ofB.subtilisandL.acidophilus=1∶1) for 30 days and then 20 days switched to basal diet, respectively; the fish in groups T4, T5 and T6 were fed diets containing 1×107CFU/gB.subtilis, 1×107CFU/gL.acidophilusand 2×107CFU/gB.subtilisandL.acidophilusmixture for 50 days, respectively. The results showed as follows: compared with control group, the weight gain rate (WGR) in groups T1 and T2 had no significant difference (P>0.05), but the WGR in groups T3, T4, T5 and T6 was significantly increased (P<0.05), and the group T6 had the maximum value which was significantly higher than that in other groups (P<0.05). The specific gain rate (SGR) had a similar changing trend to WGR. The feed conversion ratio (FCR) in groups T2, T3, T4, T5 and T6 was significantly lower than that in control group (P<0.05), meanwhile, the FCR in groups T4 and T6 was significantly lower than that in other probiotics supplemental groups (P<0.05). Diets with supplementation of probiotics could significantly enhance the activities of amylase and protease in liver (P<0.05), and improve the activity of protease in intestine (P<0.05). The activity of amylase in intestine in control goup, groups T3 and T4 was significantly lower than that in groups T5 and T6, and significantly higher than that in groups T1 and T2 (P<0.05). Diet with supplementation of probiotics could significantly improve the activity of serum lysozyme (LZM) (P<0.05). The serum total superoxide dismutase (T-SOD) activity in continuous feeding groups (groups T4, T5 and T6) was significantly higher than that in control group (P<0.05), and the serum T-SOD activity in group T6 was significantly higher than that in groups T4 and T5 (P<0.05). However, the serum T-SOD activity in non-continuous feeding groups (groups T1, T2 and T3) was significantly lower than that in control group except group T1 (P<0.05). Compared with the control group, the serum alkaline phosphatase (AKP) activity in probiotics supplemental groups was significantly decreased (P<0.05). The serum acid phosphatase (ACP) activity in groups T2 and T3 was significantly higher than that in control group (P<0.05), and group T6 had no significant difference with control group (P>0.05), while that in other groups was significantly lower than that in control group (P<0.05). These results indicate that supplementation ofB.subtilisandL.acidophilusas separate or mixed (1∶1, mass ratio) in diets can promote the growth, and increase the activities of immune enzymes and digestive enzymes of juvenile cobia. Continuous feeding is better than non-continuous feeding and the mixed probiotics has the best effect.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2015, 27(12)：3821-3830]

cobia (Rachycentroncanadum); probiotic; growth performance; immune enzyme; digestive enzyme

10.3969/j.issn.1006-267x.2015.12.022

2015-06-24

廣東省科技攻關(guān)項(xiàng)目(2012B020307005)；廣東省教育廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(2013KJCX0096)；廣東省基金項(xiàng)目(S2013010014729)

何偉聰(1989—)，男，廣東河源人，碩士研究生，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料。E-mail： gerryhe1988@163.com

*通信作者：董曉慧，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: dongxiaohui2003@163.com

S963

A

1006-267X(2015)12-3821-10