周 彤，劉 穎，石英愛，張麗紅

（1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院a內(nèi)分泌科；b呼吸內(nèi)科，吉林長春130021；2.吉林大學(xué)病理生物學(xué)教育部重點實驗室，吉林長春130021）

腫瘤干細胞標記物ALDH1和Ki67在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達和意義

周 彤1a，劉 穎1b，石英愛2＊，張麗紅2＊

（1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院a內(nèi)分泌科；b呼吸內(nèi)科，吉林長春130021；2.吉林大學(xué)病理生物學(xué)教育部重點實驗室，吉林長春130021）

腫瘤干細胞（Cancer Stem Cell，CSC）為存在于腫瘤組織中的數(shù)量極少、具有無限增殖潛能，可分化為腫瘤細胞，且對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移起決定性作用的細胞。乙醛脫氫酶1（aldehyde dehygeogenase1，ALDH1），是在ALDH基因家族指導(dǎo)下合成的一類酶，主要存在于肝臟與腎臟細胞中，在體內(nèi)主要發(fā)揮乙醛的代謝解毒功能，也與細胞的增殖、分化相關(guān)，可作為干細胞標志物［1］；同時也是腫瘤起始細胞（cancer－initiating cells，CICs）的標志物之一［2］。本研究以5例子宮內(nèi)膜單純性增生病例為對照，利用免疫組織化學(xué)方法觀察31例子宮內(nèi)膜腺癌的ALDH1和Ki67的表達，并探討二者表達的相關(guān)性，為以腫瘤干細胞為靶向診斷和治療子宮內(nèi)膜腺癌提供理論和實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集吉林大學(xué)第一臨床醫(yī)院2013年10月2014年10月期間的子宮內(nèi)膜腺癌切除標本，共計31例。包括：相對高分化腺癌16例；中分化腺癌8例；低分化腺癌7例。另有子宮內(nèi)膜單純性增生標本5例；所有患者術(shù)前均未接受任何化療、放療等的輔助治療，臨床病例資料完整。

1.2 免疫組織化學(xué)染色（SP法）

鼠抗人ALDH1單克隆抗體購于美國BD公司；兔抗人Ki67多克隆購于北京中杉公司，按試劑盒說明書操作。

1.3 結(jié)果判定

高倍鏡下（200×）每張切片隨機選擇5個視野，子宮內(nèi)膜單純性增生組織計數(shù)腺體上皮細胞，腺癌計數(shù)腫瘤細胞，每個視野計數(shù)200個細胞，共1000個，計算陽性細胞所占的百分數(shù)，其中＞50%為＋＋＋（陽性）；25%～50%為＋＋；＜25%為＋；無著色為－（陰性）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

全部實驗數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析處理。各組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

ALDH1蛋白主要表達于細胞質(zhì)中，呈棕黃色顆狀。ALDH1蛋白在部分子宮內(nèi)膜單純性增生組織腺上皮中表達，少數(shù)病例陽性細胞出現(xiàn)在間質(zhì)內(nèi)，表達率為40.0%（2／5）。子宮內(nèi)膜癌組織中ALDH1既可表達于腫瘤細胞胞質(zhì)中，部分間質(zhì)內(nèi)亦可見陽性表達，表達率為90.3%（28／31）；且隨著腫瘤分化程度的不同，從高分化到低分化，其陽性表達率逐漸提高（見表1），經(jīng)χ2檢驗，組間差異有顯著性，P＜0.05。但ALDH1與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)（P＞0.05）。Ki67主要表達在細胞核中，呈棕黃色顆粒。Ki67在子宮內(nèi)膜單純性增生組織中不表達。而在子宮內(nèi)膜癌組織中Ki67表達于腫瘤細胞核中，陽性率為100%（見表1）。經(jīng)χ2檢驗，組間差異有顯著性，P＜0.0001。Ki67與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等呈正相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

子宮內(nèi)膜腺癌是女性高發(fā)的惡性腫瘤之一。早期患者無明顯癥狀，缺乏有效的診斷方法，療效及預(yù)后并不理想。近年來隨著干細胞研究的逐漸深入，腫瘤干細胞學(xué)說受到重視。目前關(guān)于子宮內(nèi)膜腺癌腫瘤干細胞標記物的研究甚少，有研究報道稱CD133可能是其中之一［3］。

ALDH1屬醛脫氫酶家族成員之一，其主要功能就是在細胞內(nèi)參與催化氧化維生素A成為相應(yīng)視黃酸的不可逆反應(yīng)，而后者作為維甲酸核受體的配體，通過維甲酸受體信號通路直接調(diào)節(jié)基因表達，從而促進細胞分化，減少增殖［4］。也有研究表明惡性腫瘤的發(fā)生依賴于一種數(shù)量很少的異質(zhì)性細胞群體，稱為腫瘤起始細胞（cancer－initiating cells，CICs），對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移起決定性作用，也是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療失敗的根源［1］。ALDH1在很多干細胞／前體細胞中表達，也可能是腫瘤起始細胞CICs的標志物之一。有證據(jù)表明ALDH1高表達的子宮內(nèi)膜癌細胞個體預(yù)后差，且與腫瘤耐藥和復(fù)發(fā)有關(guān)［5］。Wang等人發(fā)現(xiàn)ALDH1高表達的子宮內(nèi)膜癌細胞系具有高度惡性生物學(xué)行為包括腫瘤發(fā)生、發(fā)展、耐藥及高侵襲力等［2］。故ALDH1可作為潛在的子宮內(nèi)膜腺癌的腫瘤干細胞的標記物。目前關(guān)于ALDH1在卵巢癌、乳腺癌中的表達研究相對較多［6］，可作為卵巢癌、乳腺癌、肺癌［7］以及其他腫瘤干細胞標記物。但對于其在子宮內(nèi)膜腺癌的研究相對較少。本實驗觀察了ALDH1在部分子宮內(nèi)膜單純性增生組織腺上皮中有表達；在子宮內(nèi)膜癌組織陽性表達率則可達為90.3%，且隨著腫瘤分化程度的升高逐漸提高。但ALDH1表達與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)（P＞0.05）。

細胞增殖抗原標記物（Ki67）是一種與增殖細胞相關(guān)的核抗原，是目前公認的有效評估腫瘤細胞增殖活性的重要標記物，其表達的高低反映細胞增殖的程度［8］。本研究觀察了Ki67在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達情況，發(fā)現(xiàn)其在子宮內(nèi)膜單純性增生組織中不表達，而子宮內(nèi)膜腺癌腫瘤細胞陽性率為100%，且Ki67與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等正相關(guān)（P＜0.05）。而通過對ALDH和Ki67兩者在子宮內(nèi)膜腺癌表達情況相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)無相關(guān)性，可能與統(tǒng)計病例數(shù)較少有關(guān)。

表1 ALDH1蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜癌中的表達（χ2檢驗）

腫瘤干細胞理論認為CSCs是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的根源所在。雖然CSCs在腫瘤組織中的數(shù)量極少，但其具有無限增殖潛能、高致瘤性、放化療抵抗性和高侵襲性，也是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療失敗的根源。已經(jīng)成為今后臨床腫瘤靶向治療的關(guān)鍵點。本研究為ALDH1作為子宮內(nèi)膜腺癌腫瘤干細胞標記物提供一定的實驗依據(jù)，為子宮內(nèi)膜腺癌的治療提供了新的方向。

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［3］Nakamura M，Zhang，X，Mizumoto Y，et al.Molecular characterization of CD133＋cancer stem－like cells in endometrial cancer［J］.Int J Oncl，2014，44（3）：669.

［4］Penumantsa k，Edassery S L，Barua A，et al.Differential expression of aldehyde dehydrogenase 1A1（ALDH1）in normal ovary and serous ovarian tumors［J］.Journal of Ovarian Research，2013，（28）：1.

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2014－12－24）

1007－4287（2015）09－1532－02

吉林省衛(wèi)生廳科技計劃（2013ZC005）；吉林省重點科技攻關(guān)項目（20150204066S）

＊通訊作者