吳均靜 張廣濤

摘 要：目的：建立原料藥咖啡因中有機(jī)溶劑三氯甲烷殘留量的測(cè)定方法。方法：采用頂空氣相色譜法，電子捕獲器，以超純水為溶劑，色譜柱為石英毛細(xì)管色譜柱：PE ELITE-5MS（30m×0.25mm，膜厚0.25μm），載氣為N2。結(jié)果：三氯甲烷測(cè)定方法的線性關(guān)系，重復(fù)性，檢測(cè)限，定量限均達(dá)到了預(yù)定的分析要求，回收率在95.7%-98.6%之間。結(jié)論：本方法能快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出有機(jī)溶劑三氯甲烷的殘留量，能用于原料藥咖啡因中殘留溶劑的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：殘留溶劑1；三氯甲烷2；頂空氣相色譜法3；咖啡因4

咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合物，是一種中樞神經(jīng)興奮劑，能夠暫時(shí)的驅(qū)走睡意并恢復(fù)精力。有咖啡因成分的咖啡、茶、軟飲料及能量飲料十分暢銷，因此，咖啡因也是世界上最普遍被使用的精神藥品。在咖啡因合成過(guò)程中，粗品咖啡因結(jié)晶離心后母液中含有0.5%-1.5%的咖啡因，生產(chǎn)中使用三氯甲烷萃取，回收母液中的咖啡因。在人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH），美國(guó)藥典（USP）和中國(guó)藥典中都劃定三氯甲烷為第二類溶劑，有麻醉性和致癌可能性，并規(guī)定其限度0.006%。由于本試驗(yàn)只檢查一種殘留溶劑，故采用毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等，方法，測(cè)定方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

1 儀器設(shè)備和試劑

PE-HS16L頂空自動(dòng)進(jìn)樣器， PE-Clarus 580氣相色譜儀；頂空瓶：20ml 頂空瓶（PE公司）。原料藥咖啡因樣品（公司待銷售成品），三氯甲烷為優(yōu)級(jí)純，試驗(yàn)用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

（1）色譜柱：PE Elite-5MS，30m×0.25mm×0.25μm，石英毛細(xì)管色譜柱。

（2）頂空進(jìn)樣器條件：爐溫，70℃；取樣針，85℃；傳輸線，110℃；載氣氣壓力，16.5psi；加壓時(shí)間，3min；進(jìn)樣時(shí)間，0.02min；拔針時(shí)間，0.2min；保溫時(shí)間，20min。

（3）GC條件：汽化室溫度，110℃；柱溫箱溫度，80℃；檢測(cè)器溫度，375℃；載氣，N2（純度為99.999%）；流速，1ml/min；分流，30；補(bǔ)充氣體，30ml/min。

2.2 線性關(guān)系考察

（1）溶液的制備與測(cè)試

線性關(guān)系選擇期望濃度0.6000ug/ml的50%-120%之間8個(gè)點(diǎn)，即0.300ug/ml，0.360ug/ml，0.420ug/ml，0.480ug/ml，0.540ug/ml，0.0

60ug/ml，0.660ug/ml，0.720ug/ml，取優(yōu)級(jí)純?nèi)燃淄樵噭?，分別配制上述濃度溶液。取24個(gè)頂空瓶，將上述溶液每瓶各取3個(gè)1ml上述分別放入頂空瓶中密封，在70℃保溫20分鐘，然后進(jìn)樣，每瓶進(jìn)樣1次，以同一濃度溶液的3次進(jìn)樣的峰面積平均值為一點(diǎn)，共8點(diǎn)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，可接受標(biāo)準(zhǔn)為：n=8，R2≥0.990，截距≤25%。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

各濃度對(duì)應(yīng)鋒面積為：117143，145779，170525，195270，220015，

247250，269505，294251。以三氯甲烷溶液濃度為橫坐標(biāo)，以三氯甲烷峰面積為縱坐標(biāo)，擬合線性回歸方程作圖。線性回歸方程為：y=419306x-6379.1，R2=0.9995，截距=2.17%，線性關(guān)系良好符合要求。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

用優(yōu)級(jí)純?nèi)燃淄楹统兯渲?份0.600ug/ml重復(fù)性試驗(yàn)溶液，取6個(gè)頂空瓶每瓶各加1ml重復(fù)性試驗(yàn)溶液密封，每瓶在70℃保溫20分鐘，然后進(jìn)樣，以6次進(jìn)樣各0.600ug/ml峰面積計(jì)算RSD，可接受標(biāo)準(zhǔn)為：n≥6，RSD≤2.5%。測(cè)試鋒面積結(jié)果分別為：179993，183230，179604，181439，179556，179523。通過(guò)計(jì)算RSD=0.8297%，重復(fù)性試驗(yàn)符合規(guī)定。

2.4 回收率試驗(yàn)

（1）對(duì)照溶液測(cè)定：取優(yōu)級(jí)純?nèi)燃淄檫m量加超純水水配成6.000ug/ml溶液，取10ml至100ml容量瓶中稀至刻度，即三氯甲烷濃度為0.600ug/ml，測(cè)定3次，取平均值，峰面積RSD≤2.5%。

（2）分別取樣品約0.100g至3個(gè)100ml容量瓶中，分成3組，分別加入11ml，10ml，9ml，濃度為6.000ug/ml三氯甲烷溶液，加入超純水稀釋至刻度，配制3個(gè)不同三氯甲烷濃度（0.660ug/ml，0.600ug/ml，0.540ug/ml）的樣品，各測(cè)定3次，即測(cè)定9次，計(jì)算回收率，回收率應(yīng)在80%-120%之間，RSD≤10%。

（3）對(duì)照溶液RSD=0.6721%，樣品溶液RSD=1.6744%，回收率分別為95.7%，98.6%，95.9%。回收率在95.7%-98.6%之間，符合規(guī)定。

2.5 檢測(cè)限（LOD），定量限（LOQ）試驗(yàn)

取6.000ug/ml濃度三氯甲烷溶液，用超純水在100ml容量瓶依次逐級(jí)稀釋，按對(duì)應(yīng)的檢測(cè)方法測(cè)定每個(gè)濃度測(cè)試3次，直至測(cè)定的色譜峰峰高為基線噪聲的3倍（3次峰面積RSD≤20%）和10倍（3次峰面積RSD≤20%），計(jì)算三氯甲烷對(duì)應(yīng)的含量，即分別為檢測(cè)限和定量限。通過(guò)試驗(yàn)得出檢測(cè)限（LOD）：0.003ug/ml，定量限（LOQ）為0.006ug/ml。

2.6 樣品含量測(cè)定

（1）樣品溶液：分別取5個(gè)成品批次咖啡因樣品0.1000g至10ml容量瓶中加水溶解，取1ml至頂空瓶中密封，在70℃保溫20分鐘，然后測(cè)試。有三氯甲烷峰出現(xiàn)時(shí)用三氯甲烷對(duì)照溶液的濃度和峰面積計(jì)算樣品中三氯甲烷含量。

（2）對(duì)照溶液：取分析純?nèi)燃淄檫m量精密稱定，用超純水稀至0.600ug/ml溶液取3個(gè)頂空瓶每瓶將上述溶液取1ml到入密封，在70℃保溫20分鐘，然后進(jìn)樣，每瓶進(jìn)一次樣，以3次進(jìn)樣各峰面積計(jì)算RSD，RSD≤2.5%。

（3）三氯甲烷殘留量限度為0.006%，通過(guò)計(jì)算本測(cè)試方法三氯甲烷的殘留量檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ）分別為0.00003%和0.00006%，測(cè)試5批咖啡因樣品（批號(hào)：TC2014901～TC2014905）中有機(jī)溶劑殘留量，測(cè)試結(jié)果均小于LOD，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，能在市場(chǎng)銷售。

3 結(jié)束語(yǔ)

（1）由于三氯甲烷易揮發(fā)，在溶液配制和測(cè)試過(guò)程中應(yīng)控制，確保測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。

（2）測(cè)試時(shí)應(yīng)關(guān)注標(biāo)準(zhǔn)品溶液的穩(wěn)定性，建議采取測(cè)試樣品溶液后繼續(xù)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)試，變化值≤20%為宜。

（3）由于殘留溶劑含量測(cè)定屬限度檢查，我們關(guān)注的是樣品中殘留溶劑的含量是否超出限度，因此為方便快捷完成測(cè)試，配制標(biāo)準(zhǔn)溶液即可按照殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)0.006%進(jìn)行操作。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國(guó)藥典. 2010年版，二部，附錄Ⅷ P殘留溶劑測(cè)定法[S].

[2]USP35-NF30.<467>Residual Solvents，185.

[3]ICH Q2A.Validation of Analytical Procedures： Definitions and Terminology.1994.

[4]ICH Q2B.Validation of Analytical Procedures： Methodology.1996.

作者簡(jiǎn)介：吳均靜（1985-），女，助理工程師，化學(xué)制藥專業(yè)，從事原料藥生產(chǎn)工藝監(jiān)督和檢驗(yàn)分析工作。